1. RNA ସମାଧାନର ଅବଶୋଷଣ ଚିହ୍ନଟ କରନ୍ତୁ |
280, 320, 230, ଏବଂ 260 nm ରେ ଅବଶୋଷଣ ଯଥାକ୍ରମେ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍, ପୃଷ୍ଠଭୂମି (ସମାଧାନ ଟର୍ବିଡିଟି), ଲୁଣର ଏକାଗ୍ରତା ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ ପରି ଜ organic ବ ପଦାର୍ଥର ମୂଲ୍ୟକୁ ପ୍ରତିପାଦିତ କରେ |ସାଧାରଣତ only କେବଳ OD260 / OD280 (ଅନୁପାତ, R) କୁ ଦେଖ |ଯେତେବେଳେ 1.8 ~ 2.0, ଆମେ ଭାବୁ ଯେ RNA ରେ ପ୍ରୋଟିନ୍ କିମ୍ବା ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଜ organic ବ ପଦାର୍ଥର ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ସହ୍ୟ କରାଯାଇପାରେ, କିନ୍ତୁ ଏହା ମନେ ରଖିବା ଉଚିତ ଯେ ଯେତେବେଳେ ଟ୍ରାଇସ୍ ଅବଶୋଷଣକୁ ଚିହ୍ନିବା ପାଇଁ ବଫର୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, R ମୂଲ୍ୟ 2 ରୁ ଅଧିକ ହୋଇପାରେ (ସାଧାରଣତ it ଏହା <2.2 ହେବା ଉଚିତ) |ଯେତେବେଳେ R <1.8, ସମାଧାନରେ ପ୍ରୋଟିନ୍ କିମ୍ବା ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଜ organic ବ ପଦାର୍ଥର ପ୍ରଦୂଷଣ ଅଧିକ ସ୍ପଷ୍ଟ ହୁଏ, ଏବଂ ଆବଶ୍ୟକତା ଅନୁଯାୟୀ RNA ର ଭାଗ୍ୟ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇପାରେ |ଯେତେବେଳେ R> 2.2, ଏହାର ଅର୍ଥ ହେଉଛି RNA ଏକକ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ରେ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜ୍ ହୋଇଛି |
2. RNA ର ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେଟିକ୍ pattern ାଞ୍ଚା |
ସାଧାରଣତ ,, RNA ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ପାଇଁ ଡେନାଟରିଂ ଜେଲ୍ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, କିନ୍ତୁ ଯଦି ଏହା କେବଳ RNA ର ଗୁଣବତ୍ତା ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ ହୋଇଥାଏ, ତେବେ ଡେନାଟରିଂ ଜେଲ୍ ଆବଶ୍ୟକ ନୁହେଁ ଏବଂ ସାଧାରଣ ଆଗରୋଜ୍ ଜେଲ୍ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ର ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟ ହେଉଛି 28S ଏବଂ 18S ବ୍ୟାଣ୍ଡର ଅଖଣ୍ଡତା ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର ଅନୁପାତ, କିମ୍ବା mRNA ସ୍ମାରର ଅଖଣ୍ଡତା ଚିହ୍ନଟ କରିବା |ସାଧାରଣତ ,, ଯଦି 28S ଏବଂ 18S ବ୍ୟାଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ଉଜ୍ଜ୍ୱଳ, ସ୍ୱଚ୍ଛ ଏବଂ ତୀକ୍ଷ୍ଣ (ବ୍ୟାଣ୍ଡର ଧାରକୁ ସ୍ପଷ୍ଟ କରେ), ଏବଂ 28S ର ଉଜ୍ଜ୍ୱଳତା 18S ବ୍ୟାଣ୍ଡର ଦୁଇଗୁଣରୁ ଅଧିକ, ଆମେ RNA ର ଗୁଣକୁ ଭଲ ବୋଲି ବିବେଚନା କରୁ |
ଉପରୋକ୍ତ ଦୁଇଟି ପଦ୍ଧତି ଯାହାକୁ ଆମେ ସାଧାରଣତ use ବ୍ୟବହାର କରୁ, କିନ୍ତୁ RNA ସମାଧାନରେ ଅବଶିଷ୍ଟ RNase ଅଛି କି ନାହିଁ ଏହି ଦୁଇଟି ପଦ୍ଧତି ମଧ୍ୟରୁ କ clearly ଣସିଟି ସ୍ପଷ୍ଟ ଭାବରେ ଆମକୁ କହିପାରିବ ନାହିଁ |ଯଦି ସମାଧାନରେ ବହୁତ କମ୍ ପରିମାଣର RNase ଥାଏ, ତେବେ ଉପରୋକ୍ତ ପଦ୍ଧତି ସହିତ ଏହାକୁ ଚିହ୍ନିବା ଆମ ପାଇଁ କଷ୍ଟକର, କିନ୍ତୁ ପରବର୍ତ୍ତୀ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକ 37 ଡିଗ୍ରୀରୁ ଅଧିକ ଏବଂ ଦୀର୍ଘ ସମୟ ପାଇଁ କରାଯାଇଥାଏ |ଏହି ଉପାୟରେ, ଯଦି RNA ସମାଧାନରେ ବହୁତ କମ୍ ପରିମାଣର RNase ଥାଏ, ତେବେ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷଣରେ ସେମାନଙ୍କର ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରିବାକୁ ଏକ ଉପଯୁକ୍ତ ପରିବେଶ ଏବଂ ସମୟ ରହିବ, ଏବଂ ଅବଶ୍ୟ ଏହି ସମୟରେ ପରୀକ୍ଷା ଥଣ୍ଡା ହେବ |ନିମ୍ନରେ ଆମେ ଏକ ପଦ୍ଧତି ଉପସ୍ଥାପନ କରୁଛୁ ଯାହା RNA ସମାଧାନରେ ଅବଶିଷ୍ଟ RNase ଅଛି କି ନାହିଁ ନିଶ୍ଚିତ କରିପାରିବ |
3. ଉତ୍ତାପ ସଂରକ୍ଷଣ ପରୀକ୍ଷା
ନମୁନା ଏକାଗ୍ରତା ଅନୁଯାୟୀ, RNA ସମାଧାନରୁ ଦୁଇଟି 1000 ng RNA ଟାଣନ୍ତୁ ଏବଂ ଏହାକୁ 0.5 ମିଲି ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବରେ ମିଶାନ୍ତୁ, ଏବଂ ଏହାକୁ pH 7.0 ଟ୍ରାଇସ୍ ବଫର୍ ସହିତ ସମୁଦାୟ 10 ଉଲ୍ ଆକାରରେ ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟ କରନ୍ତୁ, ଏବଂ ତା’ପରେ ଟ୍ୟୁବ୍ ର କ୍ୟାପ୍ ସିଲ୍ କରନ୍ତୁ |ସେଥିମଧ୍ୟରୁ ଗୋଟିଏକୁ କ୍ରମାଗତ ତାପମାତ୍ରା ଜଳ ସ୍ନାନରେ 70 ° C ରେ ରଖନ୍ତୁ ଏବଂ ଏହାକୁ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଗରମ ରଖନ୍ତୁ |ଅନ୍ୟ ଅଂଶଟି -20 ° C ରେଫ୍ରିଜରେଟରରେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇଥିଲା |ଯେତେବେଳେ ସମୟ ସରିବ, ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ପାଇଁ ଦୁଇଟି ନମୁନା କା remove ଼ିଦିଅ |ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ସମାପ୍ତ ହେବା ପରେ, ଦୁଇଟିର ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେଟିକ୍ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ତୁଳନା କରନ୍ତୁ |ଯଦି ଦୁଇଜଣଙ୍କର ବ୍ୟାଣ୍ଡ ସ୍ଥିର ଥାଏ କିମ୍ବା କ significant ଣସି ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ନଥାଏ (ଅବଶ୍ୟ, ସେମାନଙ୍କର ବ୍ୟାଣ୍ଡ ମଧ୍ୟ ପଦ୍ଧତି 2 ରେ ସର୍ତ୍ତଗୁଡିକ ପୂରଣ କରେ), ଏହାର ଅର୍ଥ ହେଉଛି RNA ସମାଧାନରେ କ res ଣସି ଅବଶିଷ୍ଟ RNase ପ୍ରଦୂଷଣ ନାହିଁ, ଏବଂ RNA ର ଗୁଣ ବହୁତ ଭଲ |ଅପରପକ୍ଷେ, ଯଦି 70 ° C ରେ ଇନକ୍ୟୁବେଡ୍ ହୋଇଥିବା ନମୁନା ସ୍ପଷ୍ଟ ଅବକ୍ଷୟ ଦେଖାଏ, ତେବେ ଏହା ସୂଚିତ କରେ ଯେ RNA ସମାଧାନରେ RNase ପ୍ରଦୂଷଣ ଅଛି |
2 RNA ଉତ୍ତୋଳନ ପାଇଁ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପଦ୍ଧତି ଏବଂ କ ques ଶଳ |
RNA ବାହାର କରିବା ସମୟରେ ଆମେ ଅନେକ ସମୟରେ ସମ୍ମୁଖୀନ ହେଉଥିବା ସମସ୍ୟାଗୁଡ଼ିକ ହେଉଛି: (1) RNA ଅମଳ କମ୍;(୨) RNA ରେ ଲୁଣର ଗମ୍ଭୀର ପ୍ରଦୂଷଣ ଅଛି;()) RNA ରେ ଗମ୍ଭୀର ଜ organic ବ ଦ୍ରବଣ ପ୍ରଦୂଷଣ ଅଛି;(4) ନମୁନା ଅବକ୍ଷୟ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ସମସ୍ୟା |
1. ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ ସମୁଦାୟ RNA ନିଷ୍କାସନ ରେଜେଣ୍ଟସ୍ |
ପଶୁ ଟିସୁ ଏବଂ ପଶୁ କୋଷରୁ ସମୁଦାୟ RNA ବାହାର କରିବା ପାଇଁ ଗୁଆନାଡାଇନ୍ ଆଇସୋଥାଇଓସିଆନେଟ୍ ପଦ୍ଧତି ଏବଂ ଟ୍ରାଇଜୋଲ୍ ପଦ୍ଧତି ହେଉଛି ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ ପଦ୍ଧତି |ଏହା ବିଶେଷତ small ଛୋଟ ନମୁନା ଏବଂ ଟିସୁ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ଯାହାକି ବାହାର କରିବା କଷ୍ଟକର, ଯେପରିକି ରାବଣ ଚର୍ମ ଏବଂ ପଶୁ ସଂଯୋଜକ ଟିସୁରୁ ମୋଟ RNA ବାହାର କରିବା;ଏହା ସହିତ, ଟ୍ରାଇଜୋଲ୍, ଏକ ସାଧାରଣ ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟର ଲାଇସିସ୍ ରିଜେଣ୍ଟ୍ ଭାବରେ, ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁ, ଜୀବାଣୁ, କବକ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଟିସୁ ବାହାର କରିବାରେ ମଧ୍ୟ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରେ |ପଲିସାକାରାଇଡ୍ ଏବଂ ପଲିଫେନୋଲ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁ ପାଇଁ, ଯେପରିକି କ୍ୟାମେଲିଆ ଓଲିଫେରା, ଚା ପତ୍ର, ରେପିସ୍ ଇତ୍ୟାଦି, ମୋଟ RNA ବାହାର କରିବା ପାଇଁ CTAB ପଦ୍ଧତି ମଧ୍ୟ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରେ |
ଏକ ପାରମ୍ପାରିକ ପଦ୍ଧତି ଭାବରେ, ଏହାର ସାଧାରଣ ତାପମାତ୍ରା କାର୍ଯ୍ୟ, ଡବଲ୍ ସ୍ତମ୍ଭ ପ୍ରଣାଳୀ ମଧ୍ୟ ବହୁତ ଲୋକପ୍ରିୟ, RNase ଯୋଡିବାର ଆବଶ୍ୟକତା ନାହିଁ, ଏବଂ ନିରାପତ୍ତା - ଉତ୍ତୋଳନ ପାଇଁ କ ch ଣସି କ୍ଲୋରୋଫର୍ମ, ଫେନୋଲ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଜ organic ବ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ନାହିଁ |(ପରାମର୍ଶିତ ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ | )
2. ପଶୁ ଟିସୁରୁ ମୋଟ RNA ବାହାର କରିବା |
)
)ଅପସାରିତ ଟିସୁକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣରୂପେ ଚିରି ଦିଆଯିବା ଉଚିତ, ଖଣ୍ଡିତ ଟିସୁକୁ RNase ବିନା ଏକ ଇପି ଟ୍ୟୁବରେ ରଖିବା, ଲାଇସେଟ୍ ଯୋଡିବା, ଚିଙ୍ଗୁଡ଼ି ଟିସୁ ଲାଇସେଟରେ ସମ୍ପୁର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ଉନ୍ମୁକ୍ତ ହେବା ଉଚିତ ଏବଂ ହୋମୋଜେନାଇଜେସନ୍ ପାଇଁ ପ୍ରସ୍ତୁତ ହେବା ଉଚିତ |
(3) ସାଧାରଣ ଟିସୁ ପାଇଁ, ହୋମୋଜେନାଇଜେସନ୍ ପାଇଁ ମୁଗ ବିନ୍ ଆକାରର ଟିସୁ (30-60 ମିଗ୍ରା) ଚୟନ କରନ୍ତୁ |ଯଦି ଟିସୁରେ ପ୍ରଚୁର ପରିମାଣର ପ୍ରୋଟିନ୍, ଚର୍ବି, କିମ୍ବା ଘନ ଫାଇବ୍ରସ୍ ଟିସୁ ଯଥା ଯକୃତ ଥାଏ, ତେବେ ଉପଯୁକ୍ତ ଭାବରେ କଟା ଟିସୁ ପରିମାଣ ବ increase ଼ାନ୍ତୁ କିମ୍ବା ହ୍ରାସ କରନ୍ତୁ (ଇଚ୍ଛାଧୀନ) 10 ~ 20 ମିଗ୍ରା ବାଛନ୍ତୁ |
(4) ଯଦି ମାଛର ମାଂସପେଶୀ, ଚିଙ୍ଗୁଡ଼ି ମାଂସ, ଜେଲିଫିସ୍ ଏବଂ ଅଧିକ ଜଳୀୟ ପଦାର୍ଥ ଥିବା ଅନ୍ୟ ଟିସୁ ବାହାର କରାଯାଏ, ତେବେ ନମୁନା ପରିମାଣକୁ ଉପଯୁକ୍ତ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି କରାଯିବା ଉଚିତ (100-200 ମିଗ୍ରା ପରାମର୍ଶ) |
(5) ଯଦି ସର୍ତ୍ତଗୁଡିକ ଅନୁମତି ଦିଏ, ଏକ ଉଚ୍ଚ-ପାସ୍ ଟିସୁ ହୋମୋଜେନାଇଜର୍ ସହିତ ହୋମୋଜେନାଇଜ୍ ହେବା ପରେ ପଶୁ ଟିସୁ ସିଧାସଳଖ ବାହାର କରାଯାଇପାରିବ, ଯଦି ଏପରି ଉପକରଣ ନଥାଏ |
()) ଅନ୍ତିମ ନିଷ୍କାସନ ପରେ ମିଳିଥିବା RNA କୁ ତୁରନ୍ତ ବରଫ ବାକ୍ସରେ ରଖାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |
3. ପଶୁ କୋଷ RNA ନିଷ୍କାସନ |
)ତରଳ ପଦାର୍ଥକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣରୂପେ ପରିତ୍ୟାଗ କରିବା ପରେ ଲାଇସେଟ୍ କୁ ସିଧାସଳଖ ନିର୍ଗତ କୋଷରେ ଯୋଡନ୍ତୁ ନାହିଁ |ଏହା ଦ୍ layer ାରା ବାହ୍ୟ ସ୍ତରରେ ଥିବା ଲାଇସେଡ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ପରେ ନିର୍ଗତ ହୋଇଥିବା ହିଷ୍ଟୋନ୍ ପ୍ୟାକେଜ୍ ନିର୍ଗତ କୋଷଗୁଡିକର ବାହ୍ୟକୁ ଅନୁସରଣ କରିବ, ଯାହା ଦ୍ l ାରା ଲାଇସେଟ୍ ସହିତ ପେଲେଟ୍ ଭିତରେ ଥିବା କୋଷଗୁଡ଼ିକର ସମ୍ପର୍କ ସୀମିତ ରହିବ |, ଫଳସ୍ୱରୂପ ଅସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ସେଲ୍ ଲାଇସିସ୍ ଏବଂ RNA ଅମଳ ହ୍ରାସ ହେଲା |
|ନିଷ୍କାସନ ପାଇଁ ଏନଜାଇମର ଇପି ଟ୍ୟୁବରେ ଲାଇସେଟ୍ ମିଶାନ୍ତୁ |
|
4. ଉଦ୍ଭିଦ RNA ନିଷ୍କାସନ |
ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁ ଫେନୋଲିକ୍ ଯ ounds ଗିକରେ ଭରପୂର, କିମ୍ବା ପଲିସାକାରାଇଡରେ ଭରପୂର, କିମ୍ବା କିଛି ଅଜ୍ଞାତ ଦ୍ secondary ିତୀୟ ମେଟାବୋଲାଇଟ୍ ଧାରଣ କରିଥାଏ, କିମ୍ବା RNase ର ଉଚ୍ଚ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଥାଏ |ଏହି ପଦାର୍ଥଗୁଡିକ ସେଲ୍ ଲାଇସିସ୍ ପରେ RNA ସହିତ ଦୃ ly ଭାବରେ ମିଶ୍ରିତ ହୋଇ ଅବିସ୍ମରଣୀୟ କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ କିମ୍ବା କୋଲଏଡାଲ୍ ପ୍ରିମିଟାଇଟ୍ ସୃଷ୍ଟି କରେ, ଯାହା ଅପସାରଣ କରିବା କଷ୍ଟକର |ତେଣୁ, ଯେତେବେଳେ ଆମେ ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁ ବାହାର କରୁ, ଆମକୁ ଉଦ୍ଭିଦ ପାଇଁ ଏକ କିଟ୍ ବାଛିବା ଆବଶ୍ୟକ |କିଟରେ ଥିବା ଲାଇସେଟ୍ ପଲିଫେନୋଲର ସହଜ ଅକ୍ସିଡେସନ୍ ଏବଂ ପଲିସାକାରାଇଡ୍ ଯ ounds ଗିକ ଏବଂ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ପୃଥକ ହେବା ସମସ୍ୟାର ସମାଧାନ କରିପାରିବ |
(ପଲିସାକାରାଇଡ୍ ପଲିଫେନୋଲ୍ ଉଦ୍ଭିଦ RNA ନିଷ୍କାସନ ପାଇଁ, ପରାମର୍ଶିତ ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ:
(1) ଉଦ୍ଭିଦର ଚୋପା, ଡାଲି, ମଞ୍ଜି, ପତ୍ର ଇତ୍ୟାଦି ଏକ ମୋର୍ଟାରରେ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିରେ ରହିବା ଉଚିତ |ଗ୍ରାଇଣ୍ଡିଂ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ, ନମୁନା ତରଳିବା ପାଇଁ ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନକୁ ସମୟ ସମୟରେ ପୂର୍ଣ୍ଣ କରାଯିବା ଉଚିତ୍ |ଗ୍ରାଉଣ୍ଡ ନମୁନାକୁ ଶୀଘ୍ର ଲାଇସେଟରେ ଯୋଡାଯିବା ଉଚିତ ଏବଂ RNA ଅବକ୍ଷୟରୁ ରକ୍ଷା ପାଇବା ପାଇଁ କମ୍ପିତ ହେବା ଉଚିତ |
()) ଚାଉଳ ଏବଂ ଗହମ ପତ୍ର ପରି ଫାଇବର ସମୃଦ୍ଧ ନମୁନା ପାଇଁ, ନିର୍ବାହର ପରିମାଣ ଉପଯୁକ୍ତ ଭାବରେ ହ୍ରାସ କରାଯିବା ଉଚିତ, ନଚେତ୍ ଟିସୁ ଗ୍ରାଇଣ୍ଡିଂ ଏବଂ ଲାଇସିସ୍ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ହେବ ନାହିଁ, ଫଳସ୍ୱରୂପ RNA ର କମ୍ ଅମଳ ମିଳିବ |
()) ଅଧିକ ଜଳୀୟ ପଦାର୍ଥ ଥିବା ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁ ପାଇଁ, ଯେପରିକି ଡାଳିମ୍ବ ଫଳ, ତରଭୁଜ ଫଳ, ପେଚା ଫଳ ଇତ୍ୟାଦି, ନମୁନା ଆକାର ଉପଯୁକ୍ତ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି କରାଯିବା ଉଚିତ (100-200 ମିଗ୍ରା ଇଚ୍ଛାଧୀନ) |
|ପାରମ୍ପାରିକ ଟିସୁ ହୋମୋଜେନାଇଜରଗୁଡିକ ହୋମୋଜେନାଇଜିଂ ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁରେ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ହୋଇନପାରେ ଏବଂ ସାଧାରଣତ recommended ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇନଥାଏ |
5. RNA ନିଷ୍କାସନ ପାଇଁ ସତର୍କତା |
(1) ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍ ଏବଂ ଥୋଇବାକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ ଟିସୁ ନମୁନା ଯଥାସମ୍ଭବ ସତେଜ ହେବା ଉଚିତ |
()) ନିଷ୍କାସନ ସମୟରେ ଟିସୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିରେ ରହିବା ଉଚିତ୍, ଏବଂ ଟିସୁର ପରିମାଣ ଅତ୍ୟଧିକ କମ୍ ହେବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ, ଅଧିକ ଛାଡିଦିଅନ୍ତୁ |
()) ନମୁନାକୁ ପୁରା ଲାଇସ୍ କରିବା ପାଇଁ ଲାଇସେଟ୍ ଯୋଡିବା ପରେ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ଇନକ୍ୟୁବେସନ ସମୟ ଦିଆଯିବା ଉଚିତ |
)
()) ଧୋଇବାବେଳେ, ଧୋଇବା ତରଳ ଟ୍ୟୁବ୍ କାନ୍ଥରେ ସମ୍ପୁର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ଅନୁପ୍ରବେଶ କରିବା ଉଚିତ୍ |
)
)ପାରମ୍ପାରିକ ଟ୍ରାଇଜୋଲ୍ କ୍ଲାଭେଜ୍ ଏବଂ ଆଇସୋପ୍ରୋପାନୋଲ୍ ବୃଷ୍ଟିପାତ ପ୍ରଣାଳୀରେ, ଅନ୍ତିମ RNA DEPC ପାଣିରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ ହୁଏ, ତେଣୁ ବିଲୋପ ପାଇଁ ଏକ ଉପଯୁକ୍ତ ସମୟ ଦିଆଯିବା ଉଚିତ ଏବଂ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ର ତଳ ଅଂଶ ଏକ ପାଇପେଟ୍ ଟିପ୍ ସହିତ କ୍ରମାଗତ ଭାବରେ ଉଡ଼ିବା ଉଚିତ |
3 ଟିକମ୍ RNA ଏକାଗ୍ରତା / ଖରାପ ଗୁଣ ପାଇଁ କାରଣ ଏବଂ ସମାଧାନ |
1. ଅମଳ ବହୁତ କମ୍ ଅଟେ |
ବାହାର କରାଯାଇଥିବା ନମୁନା ଅତ୍ୟଧିକ କମ୍, ସମୁଦାୟ ପରିମାଣ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ନୁହେଁ, କିମ୍ବା ବାହାର କରାଯାଇଥିବା ନମୁନା ଅତ୍ୟଧିକ ଏବଂ ଲାଇସିସ୍ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ନୁହେଁ;ଉପଯୁକ୍ତ ଗୁଣର ଟିସୁ କିମ୍ବା କୋଷଗୁଡିକ ବାହାର କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯିବା ଉଚିତ, ନମୁନାର ପୂର୍ବ ଚିକିତ୍ସା ଭଲ ଭାବରେ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ ଏବଂ ଲାଇସିସ୍ ଯଥେଷ୍ଟ ହେବା ଉଚିତ |
2. ଜେନୋମ ଅବଶିଷ୍ଟ |
ଟ୍ରାଇଜୋଲ୍ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ extr ାରା ବାହାର କରିବା ସମୟରେ, ଯେତେବେଳେ ଅଲ ern କିକ ସ୍ତର ସ୍ତର ପରେ ସ୍ତରକୁ ଚୋବାଇ ଦିଆଯାଏ, ଗୁରୁତର ଜିନୋମ ପ୍ରଦୂଷଣ ହେବ;ମଧ୍ୟମ ସ୍ତରରେ ସ୍ତନ୍ୟପାନ ନକରିବା ପାଇଁ ଅତିରିକ୍ତ ଯତ୍ନ ନେବା ଉଚିତ୍ |ଯଦି ସ୍ତମ୍ଭ ପଦ୍ଧତି ନିଷ୍କାସନ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, DNase ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ କିଟ୍ ବାହାର କରିବା ପାଇଁ ଚୟନ କରାଯାଇପାରିବ |ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ଉପରେ ଥିବା ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ସିଧାସଳଖ DNase I ସହିତ ହଜମ ହୁଏ, ଯାହା DNA ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶକୁ ବହୁତ କମ କରିପାରେ |
3. RNA ଅବନତି |
ଏହା ନିଜେ ବାହାର କରାଯାଇଥିବା ନମୁନାର ଅବକ୍ଷୟ ହୋଇପାରେ, କିମ୍ବା ଉତ୍ତୋଳନ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ ଘଟିଥିବା ଅବକ୍ଷୟ ହୋଇପାରେ;ଯଥାସମ୍ଭବ, RNA ଉତ୍ତୋଳନ ପାଇଁ ତାଜା ନମୁନା ବ୍ୟବହାର କରାଯିବା ଉଚିତ ଏବଂ ସଂଗୃହିତ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ କିମ୍ବା -80 ° C ରେଫ୍ରିଜରେଟରରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯିବା ଉଚିତ ଏବଂ ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍ ଏବଂ ଥୋଇଙ୍ଗକୁ ଏଡାଇବା ଉଚିତ |RNA ନିଷ୍କାସନ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ RNase / DNase ମାଗଣା ଟିପ୍ସ, ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ସାମଗ୍ରୀ ବ୍ୟବହାର କରାଯିବା ଉଚିତ |ନିଷ୍କାସନ ପ୍ରକ୍ରିୟା ଯଥାସମ୍ଭବ ହେବା ଉଚିତ୍ |ବାହାର କରାଯାଇଥିବା ଆରଏନଏକୁ ଏକ ବରଫ ବାକ୍ସରେ ରଖାଯିବା ଉଚିତ ଏବଂ ସମୟ ସମୟରେ -80 ରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯିବା ଉଚିତ |ଯଦି ବାହାର କରାଯାଇଥିବା RNA କୁ ଜେଲ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ det ାରା ଚିହ୍ନଟ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ, ତେବେ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଉତ୍ତୋଳନ ପରେ ତୁରନ୍ତ କରାଯିବା ଉଚିତ ଏବଂ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ବଫର୍ ଏକ ନୂତନ ପ୍ରସ୍ତୁତ ସହିତ ବଦଳାଯିବା ଉଚିତ୍ |
4. ଲୁଣ ଏବଂ ଜ organic ବ ଦ୍ରବଣର ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ |
ନିଷ୍କାସନ ରେଜେଣ୍ଟଗୁଡିକରେ ଫେନୋଲ୍ ଏବଂ ଗୁଆନାଡାଇନ୍ ଲୁଣ ଥାଏ, ଏବଂ ଧୋଇବା ଦ୍ରବଣରେ ଇଥାନଲ୍ ଥାଏ |ଉତ୍ତୋଳନ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ, ଲାଇସେଟ୍ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ଅବଶୋଷିତ ହୋଇନଥିଲା ଏବଂ ପରିତ୍ୟାଗ କରାଯାଇ ନଥିଲା, ଏବଂ ଧୋଇବା ସମାଧାନ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଶୁଖାଯାଇ ନଥିଲା |ଅବଶିଷ୍ଟ ଲୁଣ ଏବଂ ଜ organic ବ ଦ୍ରବଣ ପରବର୍ତ୍ତୀ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଏବଂ PCR ପାଇଁ କ୍ଷତିକାରକ |ବିଭିନ୍ନ ଡିଗ୍ରୀ ପ୍ରତିବନ୍ଧକ, ତେଣୁ ନିଷ୍କାସନ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ ଟିସୁ ଲାଇସେଟ୍ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ଅପସାରଣ କରାଯିବା ଉଚିତ, ଏବଂ ଧୋଇବା ଯଥେଷ୍ଟ ହେବା ଉଚିତ ଯାହା ଦ୍ tube ାରା ଟ୍ୟୁବ୍ ର ଆଖପାଖ କାନ୍ଥ ଧୋଇ ହୋଇପାରିବ |ଏହା ସହିତ, ଟ୍ୟୁବ୍ ଖାଲି ହୋଇଯାଏ ଏବଂ ଉଡିବା ଏକ ଆବଶ୍ୟକୀୟ ପଦକ୍ଷେପ, ଯାହା ଜ organic ବ ପଦାର୍ଥର ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶକୁ ଆହୁରି ହ୍ରାସ କରିବ |
RNA ନିଷ୍କାସନ ବିଷୟରେ ଅଧିକ ସୂଚନା ପାଇଁ, ଦୟାକରି ଆମର ୱେବସାଇଟ୍ ଅନୁସରଣ କରନ୍ତୁ:
ଅଧିକ ସୂଚନା ପାଇଁ www.foreivd.com |
ପୋଷ୍ଟ ସମୟ: ଡିସେମ୍ବର -01-2022 |
