• PCR ହେଉଛି ଏକ ପଦ୍ଧତି ଯାହାକି ଅଳ୍ପ ପରିମାଣର DNA ଟେମ୍ପଲେଟରୁ DNA ବୃଦ୍ଧି କରିବାକୁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |RT-PCR ଏକ RNA ଉତ୍ସରୁ ଏକ DNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ବ୍ୟବହାର କରେ ଯାହା ପରେ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇପାରିବ |
• PCR ଏବଂ RT-PCR ସାଧାରଣତ end ଏଣ୍ଡପଏଣ୍ଟ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅଟେ, ଯେତେବେଳେ qPCR ଏବଂ RT-qPCR ଉପସ୍ଥିତ ଟେମ୍ପଲେଟର ପରିମାଣ ଆକଳନ କରିବାକୁ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମୟରେ ଉତ୍ପାଦ ସିନ୍ଥେସିସ୍ ହାରର ଗତିଜ ବ୍ୟବହାର କରିଥାଏ |
• ନୂତନ ପଦ୍ଧତି, ଯେପରିକି ଡିଜିଟାଲ୍ PCR, ପ୍ରାରମ୍ଭିକ DNA ଟେମ୍ପଲେଟର ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିମାଣ ପ୍ରଦାନ କରିଥାଏ, ଯେତେବେଳେ କି ଆଇସୋଥର୍ମାଲ୍ PCR ଭଳି ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ଫଳାଫଳ ପ୍ରଦାନ କରିବା ପାଇଁ ମହଙ୍ଗା ଉପକରଣର ଆବଶ୍ୟକତାକୁ ହ୍ରାସ କରିଥାଏ |

ପଲିମେରେଜ୍ ଶୃଙ୍ଖଳା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା (PCR) ହେଉଛି ଏକ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ସରଳ ଏବଂ ବହୁଳ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ମଲିକୁଲାର ବାୟୋଲୋଜି କ techni ଶଳ ଯାହା DNA ଏବଂ RNA କ୍ରମକୁ ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ଚିହ୍ନଟ କରେ |ଡିଏନ୍ଏ କ୍ଲୋନିଂ ଏବଂ ବିସ୍ତାରର ପାରମ୍ପାରିକ ପଦ୍ଧତି ତୁଳନାରେ, ଯାହା ପ୍ରାୟତ days ଦିନ ନେଇପାରେ, PCR କେବଳ କିଛି ଘଣ୍ଟା ଆବଶ୍ୟକ କରେ |PCR ଅତ୍ୟନ୍ତ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କ୍ରମର ଚିହ୍ନଟ ଏବଂ ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ସର୍ବନିମ୍ନ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଆବଶ୍ୟକ କରେ |ମ Basic ଳିକ PCR ପଦ୍ଧତିଗୁଡିକ ସରଳ DNA ଏବଂ RNA ଚିହ୍ନଟରୁ ଆହୁରି ଉନ୍ନତ ହୋଇଛି |ନିମ୍ନରେ, ଆମେ ଆପଣଙ୍କର ଅନୁସନ୍ଧାନ ଆବଶ୍ୟକତା ପାଇଁ ବିଭିନ୍ନ PCR ପଦ୍ଧତି ଏବଂ ଏନଜୋ ଲାଇଫ୍ ସାଇନ୍ସରେ ପ୍ରଦାନ କରୁଥିବା ରେଜେଣ୍ଟଗୁଡିକର ଏକ ସମୀକ୍ଷା ପ୍ରଦାନ କରିଛୁ |ବ scientists ଜ୍ଞାନିକମାନଙ୍କୁ ସେମାନଙ୍କର ପରବର୍ତ୍ତୀ ଅନୁସନ୍ଧାନ ପ୍ରୋଜେକ୍ଟରେ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ PCR ରେଜେଣ୍ଟଗୁଡ଼ିକୁ ଶୀଘ୍ର ପ୍ରବେଶ କରିବାକୁ ସାହାଯ୍ୟ କରିବାକୁ ଆମେ ଲକ୍ଷ୍ୟ ରଖିଛୁ!

PCR

ମାନକ PCR ପାଇଁ, ଆପଣଙ୍କୁ କେବଳ ଏକ DNA ପଲିମେରେଜ୍, ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍, ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍, ପ୍ରାଇମର୍, ବର୍ଦ୍ଧିତ ହେବାକୁ ଥିବା DNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଏବଂ ଥର୍ମୋସାଇକ୍ଲର୍ ଦରକାର |PCR ଯନ୍ତ୍ରକ its ଶଳ ଏହାର ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟ ପରି ସରଳ: 1) ଡବଲ୍-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ DNA (dsDNA) ହେଉଛି ଉତ୍ତାପକୁ ଚିହ୍ନିତ କରାଯାଇଛି, 2) ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକ ଏକକ DNA ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ ସହିତ ସମାନ୍ତରାଳ, ଏବଂ 3) ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକ DNA ପଲିମେରେଜ୍ ଦ୍ୱାରା ବିସ୍ତାରିତ ହୋଇଛି, ଫଳସ୍ୱରୂପ ଏହାର ଦୁଇଟି କପି | ମୂଳ DNA ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ |ତାପମାତ୍ରା ଏବଂ ସମୟର କ୍ରମରେ ଡେନାଟୁରେସନ୍, ଆନ୍ଲିଙ୍ଗ୍ ଏବଂ ବିସ୍ତାର ପ୍ରକ୍ରିୟା ଏକ ବୃଦ୍ଧି ଚକ୍ର ଭାବରେ ଜଣାଶୁଣା (ଚିତ୍ର 1) |

ବ୍ୟବହୃତ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଏବଂ ପ୍ରାଇମର୍ ସେଟ୍ ପାଇଁ ଚକ୍ରର ପ୍ରତ୍ୟେକ ସୋପାନକୁ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରାଯିବା ଉଚିତ |ଏହି ଚକ୍ରଟି ପ୍ରାୟ 20-40 ଥର ପୁନରାବୃତ୍ତି ହୁଏ, ଏବଂ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଉତ୍ପାଦକୁ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇପାରେ, ସାଧାରଣତ ag ଆଗରୋଜ୍ ଜେଲ୍ (ଚିତ୍ର 2) |

ଯେହେତୁ PCR ଏକ ଅତ୍ୟନ୍ତ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ପଦ୍ଧତି ଏବଂ ଏକକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ ବହୁତ ଛୋଟ ଭଲ୍ୟୁମ୍ ଆବଶ୍ୟକ, ଅନେକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ ଏକ ମାଷ୍ଟର ମିଶ୍ରଣ ପ୍ରସ୍ତୁତି ସୁପାରିଶ କରାଯାଏ |ମାଷ୍ଟର ମିଶ୍ରଣ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶ୍ରିତ ହେବା ଉଚିତ ଏବଂ ତା’ପରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସଂଖ୍ୟା ଦ୍ୱାରା ବିଭକ୍ତ ହେବା ନିଶ୍ଚିତ କରେ ଯେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ସମାନ ପରିମାଣର ଏନଜାଇମ୍, dNTP ଏବଂ ପ୍ରାଇମର୍ ରହିବ |ଅନେକ ଯୋଗାଣକାରୀ, ଯେପରିକି ଏନଜୋ ଲାଇଫ୍ ସାଇନ୍ସେସ୍, PCR ମିଶ୍ରଣ ମଧ୍ୟ ପ୍ରଦାନ କରନ୍ତି ଯାହା ପ୍ରାଥମିକ ଏବଂ DNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ବ୍ୟତୀତ ସବୁକିଛି ଧାରଣ କରିଥାଏ |

ଗୁଆନାଇନ୍ / ସାଇଟୋସିନ୍ ସମୃଦ୍ଧ (ଜିସି ସମୃଦ୍ଧ) ଅଞ୍ଚଳ ମାନକ PCR କ ques ଶଳରେ ଏକ ଚ୍ୟାଲେଞ୍ଜକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ |ନିମ୍ନ GC ବିଷୟବସ୍ତୁ ସହିତ କ୍ରମ ଅପେକ୍ଷା GC ସମୃଦ୍ଧ କ୍ରମ ଅଧିକ ସ୍ଥିର ଅଟେ |ଅଧିକନ୍ତୁ, ଜିସି ସମୃଦ୍ଧ କ୍ରମଗୁଡିକ ଦ୍ secondary ିତୀୟ ସଂରଚନା ଗଠନ କରିବାକୁ ଲାଗେ, ଯେପରିକି ହେୟାରପିନ ଲୁପ୍ |ଫଳସ୍ୱରୂପ, ଡିସିନାଟେସନ୍ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ଜିସି ସମୃଦ୍ଧ ଡବଲ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡଗୁଡିକ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଅଲଗା ହେବା କଷ୍ଟକର |ଫଳସ୍ୱରୂପ, ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ବିନା ବାଧାରେ ନୂତନ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ ସିନ୍ଥାଇଜ୍ କରିପାରିବ ନାହିଁ |ଏକ ଉଚ୍ଚ ଡେନାଟେରେସନ୍ ତାପମାତ୍ରା ଏହାକୁ ଉନ୍ନତ କରିପାରିବ, ଏବଂ ଏକ ଉଚ୍ଚ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ଏବଂ କ୍ଷୁଦ୍ର ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ସମୟକୁ ଆଡଜଷ୍ଟେସନ୍ ଜିସି ସମୃଦ୍ଧ ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବନ୍ଧନକୁ ରୋକିପାରେ |ଅତିରିକ୍ତ ରିଜେଣ୍ଟଗୁଡିକ GC- ସମୃଦ୍ଧ କ୍ରମର ବୃଦ୍ଧି ବୃଦ୍ଧି କରିପାରିବ |DMSO, ଗ୍ଲାଇସେରଲ୍, ଏବଂ ବିଟାଏନ୍ ଦ୍ secondary ିତୀୟ ସଂରଚନାକୁ ବାଧା ଦେବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରେ ଯାହା ଜିସି ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ଦ୍ caused ାରା ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥାଏ ଏବଂ ଏହା ଦ୍ double ାରା ଡବଲ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡର ପୃଥକତାକୁ ସହଜ କରିଥାଏ |

ହଟ୍ ଷ୍ଟାର୍ଟ PCR |

ଅସ୍ପଷ୍ଟ ବର୍ଦ୍ଧନ ଏକ ସମସ୍ୟା ଯାହା PCR ସମୟରେ ଘଟିପାରେ |ଅଧିକାଂଶ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ଯାହା PCR ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ ପ୍ରାୟ 68 ° C ରୁ 72 ° C ତାପମାତ୍ରାରେ ସର୍ବୋତ୍ତମ କାର୍ଯ୍ୟ କରେ |ଏନଜାଇମ୍, ନିମ୍ନ ତାପମାତ୍ରାରେ ମଧ୍ୟ ସକ୍ରିୟ ହୋଇପାରେ |ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରାଠାରୁ କମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ, ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଭାବରେ ବାନ୍ଧିପାରନ୍ତି ଏବଂ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାରକୁ ନେଇପାରନ୍ତି, ଯଦିଓ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବରଫ ଉପରେ ସ୍ଥାପିତ ହୁଏ |ପଲିମେରେଜ୍ ଇନହିବିଟର ବ୍ୟବହାର କରି ଏହାକୁ ରୋକାଯାଇପାରିବ ଯାହା ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ତାପମାତ୍ରା ପହଞ୍ଚିବା ପରେ DNA ପଲିମେରେଜ୍ ଠାରୁ ବିଚ୍ଛିନ୍ନ ହୁଏ, ତେଣୁ ହଟ୍ ଷ୍ଟାର୍ଟ PCR ଶବ୍ଦ |ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ଏକ ଆଣ୍ଟିବଡି ହୋଇପାରେ ଯାହା ପଲିମେରେଜ୍ ଏବଂ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଡେନାଟୁରେସନ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ (ସାଧାରଣତ 95 95 ° C) ବାନ୍ଧେ |

ଉଚ୍ଚ ବିଶ୍ୱସ୍ତତା ପଲିମେରେଜ୍ |

ଯେତେବେଳେ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରାସ୍ ମୂଳ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ କ୍ରମରେ ଯଥେଷ୍ଟ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥାଏ, ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ ମେଳାରେ ତ୍ରୁଟି ଘଟିପାରେ |ପ୍ରୟୋଗଗୁଡ଼ିକରେ ମେଳ ଖାଉ ନାହିଁ ଯେପରିକି କ୍ଲୋନିଂ କଟିଯାଇଥିବା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍, ଏବଂ ଡାଉନଷ୍ଟ୍ରିମ୍ରେ ଭୁଲ୍ କିମ୍ବା ନିଷ୍କ୍ରିୟ ପ୍ରୋଟିନ୍ |ଏହି ଅସଙ୍ଗତିକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ, ଏକ “ପ୍ରୁଫ୍ରେଡିଂ” କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ସହିତ ପଲିମେରାଜଗୁଡିକ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇ କାର୍ଯ୍ୟ ପ୍ରବାହରେ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରାଯାଇଛି |ପ୍ରଥମ ପ୍ରୁଫ୍ରେଡିଂ ପଲିମେରେଜ୍, Pfu, 1991 ରେ ପାଇରୋକୋକସ୍ ଫୁରିଓସସରେ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଥିଲା |ଏହି Pfu ଏନଜାଇମର ଏକ 3 ରୁ 5 'ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଅଛି |ଯେହେତୁ ଡିଏନ୍ଏ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇଛି, ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡର 3 'ଶେଷରେ ଅସନ୍ତୁଷ୍ଟ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ ଅପସାରଣ କରିଥାଏ |ତା’ପରେ ସଠିକ୍ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ହୁଏ, ଏବଂ DNA ସିନ୍ଥେସିସ୍ ଜାରି ରହିଥାଏ |ଭୁଲ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ କ୍ରମର ଚିହ୍ନଟ, ଏନଜାଇମ୍ ସହିତ ସଠିକ୍ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓସାଇଡ୍ ଟ୍ରାଇଫୋସଫେଟ୍ ପାଇଁ ବନ୍ଧନ ସମ୍ବନ୍ଧୀୟତା ଉପରେ ଆଧାରିତ, ଯେଉଁଠାରେ ଅପାରଗ ବନ୍ଧନ ସିନ୍ଥେସିସ୍କୁ ମନ୍ଥର କରିଥାଏ ଏବଂ ସଠିକ୍ ବଦଳ ପାଇଁ ଅନୁମତି ଦେଇଥାଏ |Pfu polymerase ର ପ୍ରୁଫ୍ରେଡିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ, Taq DNA ପଲିମେରେଜ୍ ତୁଳନାରେ ଅନ୍ତିମ କ୍ରମରେ କମ୍ ତ୍ରୁଟି ଘଟାଏ |ସାମ୍ପ୍ରତିକ ବର୍ଷଗୁଡିକରେ, ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ପ୍ରୁଫ୍ରେଡିଂ ଏନଜାଇମଗୁଡିକ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଛି, ଏବଂ DNA ବୃଦ୍ଧି ସମୟରେ ତ୍ରୁଟି ହାରକୁ ହ୍ରାସ କରିବା ପାଇଁ ମୂଳ Pfu ଏନଜାଇମର ପରିବର୍ତ୍ତନ କରାଯାଇଛି |

RT-PCR |

ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ PCR, କିମ୍ବା RT-PCR, ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ RNA ବ୍ୟବହାରକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ |ଏକ ଅତିରିକ୍ତ ପଦକ୍ଷେପ RNA ଚିହ୍ନଟ ଏବଂ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ଅନୁମତି ଦିଏ |ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରି RNA ସଂପୃକ୍ତ DNA (cDNA) ରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ସିତ |RT-PCR ର ସଫଳତା ପାଇଁ RNA ଟେମ୍ପଲେଟର ଗୁଣ ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧତା ଜରୁରୀ |RT-PCR ର ପ୍ରଥମ ପଦକ୍ଷେପ ହେଉଛି ଏକ DNA / RNA ହାଇବ୍ରିଡ୍ର ସିନ୍ଥେସିସ୍ |ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜରେ ଏକ RNase H କାର୍ଯ୍ୟ ମଧ୍ୟ ଅଛି, ଯାହା ହାଇବ୍ରିଡ୍ର RNA ଅଂଶକୁ ଖରାପ କରିଥାଏ |ସିଙ୍ଗଲ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ ଡିଏନ୍ଏ ଅଣୁ ତା’ପରେ cDNA ରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ର DNA- ନିର୍ଭରଶୀଳ DNA ପଲିମେରେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଦ୍ୱାରା ସମାପ୍ତ ହୁଏ |ପ୍ରଥମ-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ଦକ୍ଷତା ବୃଦ୍ଧି ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିପାରେ |ଏଠାରୁ, cDNA କୁ ବୃଦ୍ଧି କରିବା ପାଇଁ ମାନକ PCR ପ୍ରଣାଳୀ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |RT-PCR ଦ୍ୱାରା RNA କୁ cDNA ରେ ପରିଣତ କରିବାର ସମ୍ଭାବନା ଅନେକ ସୁବିଧା ଅଛି, ଏବଂ ଏହା ମୁଖ୍ୟତ gen ଜିନ୍ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |RNA ଏକକ-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ ଏବଂ ବହୁତ ଅସ୍ଥିର, ଯାହା ସହିତ କାମ କରିବା ଚ୍ୟାଲେଞ୍ଜ ସୃଷ୍ଟି କରେ |ଏହା ସାଧାରଣତ q qPCR ର ପ୍ରଥମ ପଦକ୍ଷେପ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରିଥାଏ, ଯାହା ଜ bi ବିକ ନମୁନାରେ RNA ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପରିମାଣ କରିଥାଏ |

qPCR ଏବଂ RT-qPCR |

ବହୁ ପ୍ରୟୋଗ ପାଇଁ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଚିହ୍ନଟ, ବର୍ଣ୍ଣିତ ଏବଂ ପରିମାଣ କରିବା ପାଇଁ ପରିମାଣିକ PCR (qPCR) ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |RT-qPCR ରେ, RNA ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଗୁଡିକ ପ୍ରାୟତ c ସେମାନଙ୍କୁ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ କରି ପ୍ରଥମେ ସିଡିଏନ୍ଏରେ ଉପରୋକ୍ତ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଥାଏ, ଏବଂ ପରେ qPCR କାର୍ଯ୍ୟ କରାଯାଏ |ମାନକ PCR ପରି, DNA ତିନୋଟି ପୁନରାବୃତ୍ତି ପଦକ୍ଷେପ ଦ୍ୱାରା ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇଥାଏ: ଡେନାଟରେସନ୍, ଆନ୍ଲିଙ୍ଗ୍ ଏବଂ ବିସ୍ତାର |ତଥାପି, qPCR ରେ, ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଲେବେଲିଂ PCR ଅଗ୍ରଗତି କଲାବେଳେ ତଥ୍ୟ ସଂଗ୍ରହକୁ ସକ୍ଷମ କରିଥାଏ |ଉପଲବ୍ଧ ପଦ୍ଧତି ଏବଂ ରସାୟନ ବିଜ୍ଞାନର ପରିସର ହେତୁ ଏହି କ que ଶଳର ଅନେକ ଲାଭ ଅଛି |

ରଙ୍ଗ-ଆଧାରିତ qPCR (ସାଧାରଣତ green ସବୁଜ) ରେ, ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଲେବେଲିଂ ଏକ dsDNA ବାନ୍ଧୁଥିବା ରଙ୍ଗର ବ୍ୟବହାର କରି ବର୍ଦ୍ଧିତ DNA ଅଣୁଗୁଡ଼ିକର ପରିମାଣକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ |ପ୍ରତ୍ୟେକ ଚକ୍ର ସମୟରେ, ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ମାପ କରାଯାଏ |ନକଲ ହୋଇଥିବା DNA ପରିମାଣ ସହିତ ଆନୁପାତିକ ଭାବରେ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସଙ୍କେତ ବ increases େ |ତେଣୁ, “ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍” ରେ ଡିଏନ୍ଏ ପରିମାଣ କରାଯାଏ (ଚିତ୍ର 3) |ରଙ୍ଗ-ଆଧାରିତ qPCR ର ଅସୁବିଧା ହେଉଛି ଗୋଟିଏ ଥରରେ କେବଳ ଗୋଟିଏ ଲକ୍ଷ୍ୟ ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇପାରିବ ଏବଂ ନମୁନାରେ ଉପସ୍ଥିତ ଥିବା ଯେକ any ଣସି ds-DNA ସହିତ ରଙ୍ଗ ବାନ୍ଧିବ |

ପ୍ରୋବ-ଆଧାରିତ qPCR ରେ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନାରେ ଅନେକ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଏକାସାଙ୍ଗରେ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇପାରିବ, କିନ୍ତୁ ଏହା ପ୍ରାଇମର୍ ବ୍ୟତୀତ ବ୍ୟବହୃତ ଏକ ଟାର୍ଗେଟ୍-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରୋବ (ଗୁଡିକ) ର ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ୍ ଏବଂ ଡିଜାଇନ୍ ଆବଶ୍ୟକ କରେ |ଅନେକ ପ୍ରକାରର ଅନୁସନ୍ଧାନ ଡିଜାଇନ୍ ଉପଲବ୍ଧ, କିନ୍ତୁ ସବୁଠାରୁ ସାଧାରଣ ପ୍ରକାର ହେଉଛି ଏକ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ପ୍ରୋବ, ଯାହା ଫ୍ଲୋରୋଫୋର ଏବଂ କ୍ୱେନଚରକୁ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରେ |ଅନୁସନ୍ଧାନ ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ଥିବାବେଳେ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ରିଜୋନାନ୍ସ ଶକ୍ତି ସ୍ଥାନାନ୍ତର (FRET) କ୍ୱେଞ୍ଚର୍ ମାଧ୍ୟମରେ ଫ୍ଲୋରୋଫୋର ନିର୍ଗମନକୁ ରୋକିଥାଏ |ତଥାପି, PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମୟରେ, ପ୍ରାଥମିକ ବିସ୍ତାର ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କ୍ରମର ବିସ୍ତାର ସମୟରେ ଅନୁସନ୍ଧାନ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜ୍ ହୋଇଥାଏ |ଅନୁସନ୍ଧାନର ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ଫ୍ଲୋରୋଫୋରକୁ କ୍ୱେଞ୍ଚର୍ ଠାରୁ ପୃଥକ କରେ ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସରେ ଏକ ବୃଦ୍ଧି-ନିର୍ଭରଶୀଳ ବୃଦ୍ଧି ଘଟାଏ (ଚିତ୍ର 4) |ଏହିପରି, ଏକ ପ୍ରୋବ-ଆଧାରିତ qPCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରୁ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସଙ୍କେତ ନମୁନାରେ ଉପସ୍ଥିତ ଥିବା ପ୍ରୋବ ଟାର୍ଗେଟ କ୍ରମର ପରିମାଣ ସହିତ ଆନୁପାତିକ |କାରଣ ପ୍ରୋ-ଆଧାରିତ qPCR ରଙ୍ଗ-ଆଧାରିତ qPCR ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ, ଏହା ପ୍ରାୟତ q qPCR- ଆଧାରିତ ଡାଇଗ୍ନୋଷ୍ଟିକ୍ ଆସେସରେ ବ୍ୟବହୃତ ଟେକ୍ନୋଲୋଜି |

ଆଇସୋଥର୍ମାଲ୍ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ |

ଉପରୋକ୍ତ କ ques ଶଳଗୁଡ଼ିକରେ ଉଲ୍ଲେଖ କରାଯାଇଥିବା PCR ମହଙ୍ଗା ଥର୍ମୋସାଇକ୍ଲିଂ ଉପକରଣ ଆବଶ୍ୟକ କରେ, ଡେନାଟ୍ରେସନ୍, ଆନ୍ଲିଙ୍ଗ୍ ଏବଂ ବିସ୍ତାର ପଦକ୍ଷେପ ପାଇଁ ଚାମ୍ବର ତାପମାତ୍ରାକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ଉପରକୁ ଉଠାଇବା |ଅନେକଗୁଡ଼ିଏ କ ques ଶଳ ବିକଶିତ ହୋଇଛି ଯାହାକି ଏହିପରି ସଠିକ୍ ଉପକରଣର ଆବଶ୍ୟକତା ନାହିଁ ଏବଂ ଏକ ସରଳ ଜଳ ସ୍ନାନରେ କିମ୍ବା ଆଗ୍ରହର କୋଷ ମଧ୍ୟରେ ମଧ୍ୟ କରାଯାଇପାରିବ |ଏହି କ ques ଶଳଗୁଡ଼ିକୁ ସାମୂହିକ ଭାବରେ ଆଇସୋଥର୍ମାଲ୍ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ କୁହାଯାଏ ଏବଂ ଏକ୍ସପେନ୍ସିନାଲ୍, ଲାଇନ୍, କିମ୍ବା କ୍ୟାସକେଡ୍ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଉପରେ ଆଧାର କରି କାର୍ଯ୍ୟ କରାଯାଏ |

ସବୁଠାରୁ ଜଣାଶୁଣା ପ୍ରକାରର ଆଇସୋଥର୍ମାଲ୍ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ହେଉଛି ଲୁପ୍-ମଧ୍ୟସ୍ଥ ଆଇସୋଥର୍ମାଲ୍ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍, କିମ୍ବା LAMP |ଟେମ୍ପଲେଟ୍ DNA କିମ୍ବା RNA କୁ ବ pl ାଇବା ପାଇଁ LAMP 65⁰C ରେ ଏକ୍ସପେନ୍ସିନାଲ୍ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବ୍ୟବହାର କରେ |LAMP ସଂପାଦନ କରିବାବେଳେ, ଚାରିରୁ ଛଅଟି ପ୍ରାଇମର୍ ଟାର୍ଗେଟ୍ DNA ର ଅଞ୍ଚଳ ସହିତ ସଂପୃକ୍ତ, ନୂତନ DNA ସିନ୍ଥାଇଜ୍ କରିବା ପାଇଁ ଏକ DNA ପଲିମେରେଜ୍ ସହିତ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ଏହି ଦୁଇଟି ପ୍ରାଇମର୍ ର ପ୍ରଶଂସାକାରୀ କ୍ରମ ଅଛି ଯାହାକି ଅନ୍ୟ ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକରେ କ୍ରମକୁ ଚିହ୍ନିଥାଏ ଏବଂ ସେମାନଙ୍କୁ ବାନ୍ଧେ, ନୂତନ ସିନ୍ଥାଇଜ୍ ହୋଇଥିବା DNA ରେ ଏକ “ଲୁପ୍” ଗଠନକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ ଯାହା ପରବର୍ତ୍ତୀ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ବର୍ଦ୍ଧିତ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ପ୍ରାଥମିକ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ କୁ ସାହାଯ୍ୟ କରେ |ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ, ଅଗରୋଜ୍ ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ କିମ୍ବା କଲର୍ମିଟ୍ରି ସହିତ LAMP ଏକାଧିକ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା ଭିଜୁଆଲ୍ ହୋଇପାରିବ |କଲର୍ମେଟ୍ରି ଦ୍ product ାରା ଉତ୍ପାଦର ଉପସ୍ଥିତି କିମ୍ବା ଅନୁପସ୍ଥିତିକୁ ଭିଜୁଆଲାଇଜ୍ ଏବଂ ଚିହ୍ନଟ କରିବାର ସହଜତା ଏବଂ ଆବଶ୍ୟକ ମହଙ୍ଗା ଯନ୍ତ୍ରର ଅଭାବ LAMP କୁ SARS-CoV-2 ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ଏକ ଉପଯୁକ୍ତ ବିକଳ୍ପ ଯେଉଁଠାରେ କ୍ଲିନିକାଲ୍ ଲ୍ୟାବ ପରୀକ୍ଷା ସହଜରେ ଉପଲବ୍ଧ ନଥିଲା, କିମ୍ବା ନମୁନା ସଂରକ୍ଷଣ ଏବଂ ପରିବହନ | ଏହା ସମ୍ଭବ ନୁହେଁ, କିମ୍ବା ଲ୍ୟାବଗୁଡିକରେ ପୂର୍ବରୁ PCR ଥର୍ମୋସାଇକ୍ଲିଂ ଉପକରଣ ନଥିଲା |