PCR ରେଜେଣ୍ଟଗୁଡିକର ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ପ୍ରୋବଗୁଡିକର କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ଯାଞ୍ଚ କରିବା ଏବଂ ଆନୁଷ୍ଠାନିକ ପରୀକ୍ଷଣଗୁଡିକର ସୁଗମ ଅଗ୍ରଗତି ନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ ସବୁଠାରୁ ଉପଯୁକ୍ତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅବସ୍ଥା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା |
ତେବେ ପ୍ରାଥମିକ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ଆମେ କିପରି ପ୍ରାଥମିକ ଅନୁସନ୍ଧାନ ନିଶ୍ଚିତ କରିବା ଆବଶ୍ୟକ?
ମୁଖ୍ୟ ସୂଚକଗୁଡ଼ିକ ହେଉଛି ବେସ୍ ଲାଇନ୍, ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ର, ସିଟି ମୂଲ୍ୟ, ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦକ୍ଷତା, ନିମ୍ନ-ଏକାଗ୍ରତା ନମୁନା ଚିହ୍ନଟ, CV ଇତ୍ୟାଦି |
ବେସ୍ ଲାଇନ୍ |
PCR ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ରରେ ବେସ୍ ଲାଇନ୍ ହେଉଛି ଭୂସମାନ୍ତର ରେଖା |PCR ବିସ୍ତାର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ପ୍ରଥମ କିଛି ଚକ୍ରରେ, ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସଙ୍କେତ ଅଧିକ ପରିବର୍ତ୍ତନ ହୁଏ ନାହିଁ ଏବଂ ଏକ ସିଧା ରେଖା ଗଠନ କରେ |ଏହି ସିଧାସଳଖ ରେଖା ହେଉଛି ବେସ୍ ଲାଇନ୍ |
PCR ପ୍ରାଇମର୍ ପ୍ରୋବ ସ୍କ୍ରିନିଂ କରିବାବେଳେ, ବେସ୍ ଲାଇନ୍ ସ୍ତର ଅଛି କି ନାହିଁ ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ |ପ୍ରାଇମର୍ ପ୍ରୋବ ଏକାଗ୍ରତାର ଶୁଦ୍ଧତା ବେସ୍ ଲାଇନ୍ ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଇବ, ଯେପରି ବେସ୍ ଲାଇନ୍ ବ rise ଼ିବା କିମ୍ବା ଖସିଯିବା |ବେସ୍ ଲାଇନ୍ ମଧ୍ୟ ଏକ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ସୂଚକ |
ବିସ୍ତାର ବକ୍ର
ଅନ୍ୟ ଏକ ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ସୂଚକ ହେଉଛି ବିସ୍ତାର ବକ୍ରର ଆକୃତି |ଦ୍ secondary ିତୀୟ ବର୍ଦ୍ଧନ କିମ୍ବା ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଅସ୍ୱାଭାବିକ ବର୍ଦ୍ଧନ ବକ୍ରକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ ଏକ S ଆକୃତିର ବକ୍ର ରହିବା ଭଲ |
Ct ମୂଲ୍ୟ
ବେସଲାଇନରୁ ଏକ୍ସପୋନ୍ସନାଲ ଅଭିବୃଦ୍ଧି ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଇନଫ୍ଲେକ୍ସନ୍ ପଏଣ୍ଟ ସହିତ ଅନୁରୂପ ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା ହେଉଛି Ct ମୂଲ୍ୟ |
ସମାନ ନମୁନା ପାଇଁ, ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରାଇମର୍ ପ୍ରୋବଗୁଡ଼ିକ ବିଭିନ୍ନ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ରରେ ପରିଣତ ହୁଏ, ଏବଂ ସଂପୃକ୍ତ Ct ମୂଲ୍ୟ ବର୍ଦ୍ଧନ ଦକ୍ଷତା ଏବଂ ହସ୍ତକ୍ଷେପ ଡିଗ୍ରୀ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଭାବିତ ହେବ |ସିଦ୍ଧାନ୍ତରେ, ଆମେ ବାଛିଥିବା ପ୍ରାଥମିକ ଅନୁସନ୍ଧାନର Ct ମୂଲ୍ୟ ଯେତେ ଛୋଟ, ସେତେ ଭଲ |
ବୃଦ୍ଧି ଦକ୍ଷତା |
PCR ବିସ୍ତାରଣ ଦକ୍ଷତାର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ପାଇଁ ସବୁଠାରୁ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ଏବଂ ସ୍ଥିର ପଦ୍ଧତି ମଧ୍ୟରୁ ଗୋଟିଏ ହେଉଛି ମାନକ ବକ୍ର, ଯାହା ଅନୁସନ୍ଧାନକାରୀଙ୍କ ଦ୍ widely ାରା ମଧ୍ୟ ବହୁଳ ଭାବରେ ସ୍ୱୀକୃତିପ୍ରାପ୍ତ |ପଦ୍ଧତି ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକର ଆପେକ୍ଷିକ ସଂଖ୍ୟାକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ନମୁନା ତିଆରି କରିବା ସହିତ ଜଡିତ |ଏହି ନମୁନାଗୁଡିକ ସାଧାରଣତ concent ଏକାଗ୍ର ଷ୍ଟକ୍ ସମାଧାନର କ୍ରମିକ ଦିଲ୍ୟୁସନ୍ ଦ୍ୱାରା ନିର୍ମିତ, ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ ହେଉଛି 10 ଗୁଣା ମିଶ୍ରଣ |Cq ମୂଲ୍ୟ ପାଇବା ପାଇଁ ବ pl ଼ାଇବା ପାଇଁ ମାନକ qPCR ପ୍ରୋଗ୍ରାମ ବ୍ୟବହାର କରି, ଏବଂ ଶେଷରେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନାର ଏକାଗ୍ରତା ଏବଂ ସଂପୃକ୍ତ Cq ମୂଲ୍ୟ ଅନୁଯାୟୀ Cq = -klgX0 + b, ଏବଂ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦକ୍ଷତା E = 10 (-1 / k) -1 ଅନୁଯାୟୀ ଏକ ମାନକ ବକ୍ର ଚିତ୍ର ବ୍ୟବହାର କରି |ପରିମାଣିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ qPCR ବ୍ୟବହାର କରିବାବେଳେ, ବିସ୍ତାର ଦକ୍ଷତା 90% -110% (3.6> k> 3.1) ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ରହିବା ଆବଶ୍ୟକ |
ନିମ୍ନ-ଏକାଗ୍ରତା ନମୁନା ଚିହ୍ନଟ |
ଯେତେବେଳେ ନମୁନା ଏକାଗ୍ରତା କମ୍, ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରାଥମିକ ଅନୁସନ୍ଧାନର ଚିହ୍ନଟ ହାର ଭିନ୍ନ ଅଟେ |ନକଲ କରିବାକୁ ଆମେ 20 ଟି ନିମ୍ନ-ଏକାଗ୍ରତା ନମୁନା ଚୟନ କରୁ, ଏବଂ ସର୍ବାଧିକ ଚିହ୍ନଟ ହାର ସହିତ ପ୍ରାଇମର୍-ପ୍ରୋବ ସିଷ୍ଟମ୍ ସର୍ବୋତ୍ତମ |
ଭେରିଏସନ କୋଏଫିସିଏଣ୍ଟ୍ (CV)
ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ ରିଜେଣ୍ଟ୍ର ଲାଇନ୍ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ଅନୁଯାୟୀ ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରାଇମର୍ ପ୍ରୋବ ସହିତ 10 ଟି ନକଲ ନମୁନା ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇପାରିବ |
ପରିମାଣିକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା:
ସଠିକତା
ଗୋଟିଏ ବ୍ୟାଚ୍ ମଧ୍ୟରେ ସଠିକତା ପୂରଣ ହେବା ଉଚିତ: ପରୀକ୍ଷଣ ଏକାଗ୍ରତାର ଲୋଗାରିଥମିକ୍ ମୂଲ୍ୟର ପରିବର୍ତ୍ତନର କୋଏଫିସିଏଣ୍ଟ୍ (CV,%) ≤5% |ଯେତେବେଳେ ନମୁନା ଏକାଗ୍ରତା କମ୍, ଚିହ୍ନଟ ଏକାଗ୍ରତାର ଲୋଗାରିଦମର ପରିବର୍ତ୍ତନର କୋଏଫିସିଏଣ୍ଟ୍ (CV,%) ≤10% ଅଟେ |
ଗୁଣାତ୍ମକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା:
ସଠିକତା
ଗୋଟିଏ ବ୍ୟାଚ୍ ମଧ୍ୟରେ ସଠିକତା ପୂରଣ ହେବା ଉଚିତ୍:
(1) Ct ମୂଲ୍ୟର ପରିବର୍ତ୍ତନ (CV,%) ≤5%
ସମାନ ନମୁନାକୁ ସମାନ୍ତରାଳ ଭାବେ 10 ଥର ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ, ଏବଂ ପରୀକ୍ଷା ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ନିରନ୍ତର ହେବା ଉଚିତ୍ |
ପୋଷ୍ଟ ସମୟ: ସେପ୍ଟେମ୍ବର -20-2021 |
