ମୁଁ ବିଶ୍ାସ କରେ ଯେ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରିବା ସମୟରେ ସମସ୍ତେ ସର୍ବଦା ଏହିପରି କିମ୍ବା ଏହିପରି ସମସ୍ୟାର ସମ୍ମୁଖୀନ ହେବେ, କିନ୍ତୁ ସେମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରୁ ଅଧିକାଂଶକୁ ଦୁଇଟି ମୁଖ୍ୟ ସମସ୍ୟାରେ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇପାରେ:

ଜିନ୍ ଟେମ୍ପଲେଟର ବହୁତ କମ୍ ବିସ୍ତାର (ବିସ୍ତାର);
ଅତ୍ୟଧିକ ଟାର୍ଗେଟ୍ ନଥିବା ଜିନ୍ ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ |
ଏହି ସମସ୍ୟାର ସମାଧାନ ପାଇଁ ଯୋଗୀ ବ୍ୟବହାର କରିବା ହେଉଛି ସାଧାରଣ ରଣନୀତି |ସାଧାରଣତ add ଯୋଗର ଭୂମିକା ଦୁଇଟି ଦିଗ ଥାଏ:
ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନଜିନ୍ ର (ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନ);
ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରିମିଙ୍ଗ୍ ହ୍ରାସ କରନ୍ତୁ |
ଆଜି, ସଂପାଦକ ଆପଣଙ୍କୁ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ସାଧାରଣ ଯୋଗୀ ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର କାର୍ଯ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ସହିତ ସଂକ୍ଷେପରେ ପରିଚିତ କରାଇବ |
ଯୋଗୀ ଯାହା ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନକୁ ହ୍ରାସ କରେ |
ସଲଫକ୍ସାଇଡ୍ |(DMSO)
ଜିନ୍ ନମୁନା |ଉଚ୍ଚ GC ବିଷୟବସ୍ତୁ ସହିତ |ତଥାପି, DMSO ଟ୍ୟାକ୍ ପଲିମେରେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ମଧ୍ୟ ବହୁତ କମ କରିଥାଏ |ତେଣୁ, ସମସ୍ତଙ୍କୁ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଆକ୍ସେସିବିଲିଟି ଏବଂ ପଲିମେରେଜ୍ ର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ସନ୍ତୁଳିତ କରିବାକୁ ପଡିବ |ସମ୍ପାଦକ ପରାମର୍ଶ ଦେଇଛନ୍ତି ଯେ ଆପଣ DSMO ର ବିଭିନ୍ନ ଏକାଗ୍ରତା ଚେଷ୍ଟା କରିପାରିବେ, ଯେପରିକି 2% ରୁ 10%, ଆପଣଙ୍କ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ଏକାଗ୍ରତା ଖୋଜିବା ପାଇଁ |
ଅଣ-ଆୟନିକ୍ ଡିଟରଜେଣ୍ଟସ୍ |
ଅଣ-ଆୟନିକ୍ ଡିଟରଜେଣ୍ଟସ୍, ଯେପରିକି 0.1-1% ଟ୍ରିଟନ୍ ଏକ୍ସ -100, ଟ୍ୱିନ୍ 20 କିମ୍ବା NP-40, ସାଧାରଣତ D DNA ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନକୁ ହ୍ରାସ କରିଥାଏ |ଯଦିଓ ଏହା ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଜିନ୍ ର ଆମ୍ଲିଫିକେସନ୍ ବ increase ାଇପାରେ, ଏହା ମଧ୍ୟ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାରର ସମସ୍ୟା ସୃଷ୍ଟି କରିବ |ତେଣୁ, ଏହି ଯୋଗାଣଗୁଡ଼ିକ ବିନା ବର୍ଜ୍ୟବସ୍ତୁ ବିନା କମ୍ ଉତ୍ପାଦନ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ ଭଲ କାମ କରେ, କିନ୍ତୁ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ଅଶୁଦ୍ଧ PRC ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ ଏତେ ଭଲ ନୁହେଁ |ଅଣ-ଆୟନିକ୍ ଡିଟରଜେଣ୍ଟଗୁଡିକର ଅନ୍ୟ ଏକ ଲାଭ ହେଉଛି SDS ପ୍ରଦୂଷଣର ହ୍ରାସ |ସାଧାରଣତ the ଡିଏନ୍ଏ ନିଷ୍କାସନ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ, SDS କୁ PCR ପଦକ୍ଷେପରେ ଅଣାଯିବ, ଯାହା ପଲିମେରେଜ୍ ର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ବହୁ ମାତ୍ରାରେ ବାଧା ଦେଇଥାଏ |ତେଣୁ, ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ 0.5% Tween-20 କିମ୍ବା Tween-40 ଯୋଗ କରିବା SDS ର ନକାରାତ୍ମକ ପ୍ରଭାବକୁ ନିରପେକ୍ଷ କରିପାରେ |
ବେଟାଏନ୍ |_
ବେଟାଇନ୍ ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନ ଗଠନକୁ ହ୍ରାସ କରି ଡିଏନ୍ଏ ଆମ୍ଲିଫିକେସନ୍ରେ ଉନ୍ନତି ଆଣିପାରେ ଏବଂ ସାଧାରଣତ commercial ବ୍ୟବସାୟିକ PCR କିଟ୍ ସହିତ ଏକ “ରହସ୍ୟ” ଅଟେ |ଯଦି ଆପଣ ବିଟାଏନ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ଚାହାଁନ୍ତି, ତେବେ ଆପଣ ବିଟାଏନ୍ କିମ୍ବା ବିଟାଏନ୍ ମୋନୋ-ହାଇଡ୍ରେଟ୍ (ବିଟାଇନ୍ କିମ୍ବା ବେଟାଇନ୍ ମୋନୋ-ହାଇଡ୍ରେଟ୍) ରଖିବା ଉଚିତ୍, କିନ୍ତୁ ବିଟାଇନ୍ ହାଇଡ୍ରୋକ୍ଲୋରିଡ୍ (ବିଟାଇନ୍ HCl) ନୁହେଁ, 1-1.7M ର ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ରତାକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରନ୍ତୁ |ବିଟାଇନ୍ ମଧ୍ୟ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତାକୁ ଉନ୍ନତ କରିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିଥାଏ କାରଣ ଏହା DNA ତରଳିବା / DNA denaturation ର ମୂଳ ଯୁଗଳ ରଚନା ନିର୍ଭରଶୀଳତାକୁ ଦୂର କରିଥାଏ |
ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରିମିଙ୍ଗ୍ ହ୍ରାସ କରିବାକୁ ଯୋଗୀ |
ଫର୍ମାମାଇଡ୍ |
ଫର୍ମାମାଇଡ୍ ହେଉଛି ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ ଜ organic ବ PCR ଯୋଗୀ |ଏହା ଡିଏନ୍ଏରେ ପ୍ରମୁଖ ଗ୍ରୀଭ୍ ଏବଂ ଛୋଟ ଗ୍ରୀଭ୍ ସହିତ ମିଶିପାରେ, ଯାହାଦ୍ୱାରା ମାଷ୍ଟର DNA ଡବଲ୍ ହେଲିକ୍ସର ସ୍ଥିରତା ହ୍ରାସ ହୁଏ ଏବଂ DNA ର ତରଳିବା ତାପମାତ୍ରା କମିଯାଏ |PCR ପରୀକ୍ଷଣରେ ବ୍ୟବହୃତ ଫର୍ମାମାଇଡ୍ର ଏକାଗ୍ରତା ସାଧାରଣତ 1 1% -5% ଅଟେ |
ଟେଟ୍ରାମେଥାଇଲ୍ |ଆମୋନିୟମ୍ କ୍ଲୋରାଇଡ୍ |( TMAC)
ଟେଟ୍ରାମେଥାଇଲାମୋନିୟମ୍ କ୍ଲୋରାଇଡ୍ ହାଇବ୍ରିଡାଇଜେସନ୍ (ହାଇବ୍ରିଡାଇଜେସନ୍ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା) ର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ବ increase ାଇପାରେ ଏବଂ DNA ର ତରଳିବା ତାପମାତ୍ରା ବ increase ାଇପାରେ |ଏହିପରି, TMAC ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରିମିଙ୍ଗକୁ ଅପସାରଣ କରିପାରିବ ଏବଂ DNA ଏବଂ RNA ର ଭୁଲ ବୁ ind ାମଣାକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରିବ |ଯଦି ଆପଣ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତି |ପ୍ରାଥମିକଗୁଡିକ ଖରାପ କରନ୍ତୁ |PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ, TMAC ଯୋଡିବାକୁ ମନେରଖ, ଯାହା ସାଧାରଣତ 15 15-100 ମିଟର ଏକାଗ୍ରତାରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |
ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ସାଧାରଣ ଯୋଗୀ |
ଉପରୋକ୍ତ ଦୁଇଟି ବର୍ଗର ଯୋଗ ସହିତ, PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଅନେକ ସାଧାରଣ ଯୋଗୀ ଅଛି, ଯଦିଓ ସେମାନଙ୍କର ଭିନ୍ନ କାର୍ଯ୍ୟ ଅଛି, ସେଗୁଡ଼ିକ ମଧ୍ୟ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ |
ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ ଆୟନ |
ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ ଆୟନ ହେଉଛି ପଲିମେରେଜ୍ ର ଏକ ଅପରିହାର୍ଯ୍ୟ କୋଫାକ୍ଟର (କୋଫାକ୍ଟର), ଅର୍ଥାତ୍ ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ ଆୟନ ବିନା ପଲିମେରେଜ୍ ନିଷ୍କ୍ରିୟ ଅଟେ |ଅବଶ୍ୟ, ଅତ୍ୟଧିକ ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ ଆୟନ ମଧ୍ୟ ପଲିମେରେଜ୍ ର କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଇପାରେ |ପ୍ରତ୍ୟେକ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ ଆୟନର ଏକାଗ୍ରତା ଭିନ୍ନ ହେବ |ଚେଲିଂ ଏଜେଣ୍ଟଗୁଡିକ (ଯେପରିକି EDTA କିମ୍ବା ସାଇଟ୍ରେଟ୍), dNTP ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନର ଏକାଗ୍ରତା ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ ଆୟନର ଏକାଗ୍ରତା ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ |ତେଣୁ, ଯଦି ଆପଣଙ୍କର PCR ପରୀକ୍ଷଣରେ ଆପଣଙ୍କର କିଛି ଅସୁବିଧା ଅଛି, ତେବେ ଆପଣ ବିଭିନ୍ନ ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ ଆୟନର ଏକାଗ୍ରତା ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିବାକୁ ଚେଷ୍ଟା କରିପାରିବେ, ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, 1.0 ରୁ 4.0mM ମଧ୍ୟରେ, 0.5-1mM ବ୍ୟବଧାନ ସହିତ |
ସୂଚନାଯୋଗ୍ୟ ଯେ ଏକାଧିକ ଫ୍ରିଜ୍-ଥ୍ ଚକ୍ର ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ କ୍ଲୋରାଇଡ୍ ଦ୍ରବଣର ଏକାଗ୍ରତା ସ୍ତରକୁ ନେଇପାରେ |ତେଣୁ, ଆପଣ ପ୍ରତ୍ୟେକ ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ଏହାକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ରୂପେ ତରଳାଇ ଦିଅନ୍ତୁ ଏବଂ ଏହାକୁ ବ୍ୟବହାର କରିବା ପୂର୍ବରୁ ଏହାକୁ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶାନ୍ତୁ |
ବୋଭାଇନ୍ ସେରମ୍ ଆଲବମିନ |(ବୋଭାଇନ୍ ଆଲବମିନ, BSA)
ମଲିକୁଲାର ରସାୟନ ବିଜ୍ଞାନ ପରୀକ୍ଷଣରେ, ବୋଭାଇନ୍ ସେରମ୍ ଆଲବମିନ ଏକ ସାଧାରଣ ଯୋଗୀ, ବିଶେଷତ en ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ଏନଜାଇମ୍ ହଜମ ଏବଂ PCR ପରୀକ୍ଷଣରେ |PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ, BSA ଫେନୋଲିକ୍ ଯ ounds ଗିକ ପରି ଦୂଷିତ ପଦାର୍ଥକୁ ହ୍ରାସ କରିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରେ |ଏବଂ ଏହା ମଧ୍ୟ କୁହାଯାଏ ଯେ ଏହା ଟେଷ୍ଟ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ କାନ୍ଥରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଶୀଳର ଆଡିଶନ୍ ହ୍ରାସ କରିପାରିବ |PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ, ସାଧାରଣତ B BSA ର ଏକାଗ୍ରତା 0.8 ମିଗ୍ରା / ମିଲିରେ ପହଞ୍ଚିପାରେ |
 
ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଉତ୍ପାଦ:
PCR ହିରୋ |(ରଙ୍ଗ ସହିତ)
PCR ହିରୋ |