ସିଧାସଳଖ PCR ହେଉଛି ଏକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଯାହା ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଉତ୍ତୋଳନ ବିନା ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ପଶୁ କିମ୍ବା ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁକୁ ସିଧାସଳଖ ବ୍ୟବହାର କରେ |ଅନେକ ଉପାୟରେ, ପ୍ରତ୍ୟକ୍ଷ PCR ନିୟମିତ PCR ପରି କାମ କରେ |

ମୁଖ୍ୟ ପାର୍ଥକ୍ୟ ହେଉଛି ସିଧାସଳଖ PCR ରେ ବ୍ୟବହୃତ କଷ୍ଟମ୍ ବଫର୍, ନମୁନାକୁ ସିଧାସଳଖ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଉତ୍ତୋଳନ ବିନା PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଦିଆଯାଇପାରେ, କିନ୍ତୁ ଏନଜାଇମର ସହନଶୀଳତା ଏବଂ ସିଧାସଳଖ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଜଡିତ ବଫରର ସୁସଙ୍ଗତତା ପାଇଁ ଅନୁରୂପ ଆବଶ୍ୟକତା ଅଛି |

ଯଦିଓ ସାଧାରଣ ନମୁନାରେ ଅଧିକ କିମ୍ବା କମ PCR ଇନହିବିଟର ଅଛି, ସିଧାସଳଖ PCR ଏନ୍ଜାଇମ୍ ଏବଂ ବଫର୍ କ୍ରିୟାରେ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ବିସ୍ତାର ବୃଦ୍ଧି କରିପାରିବ |ପାରମ୍ପାରିକ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଏକ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ ଉଚ୍ଚ-ଗୁଣାତ୍ମକ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଆବଶ୍ୟକ, ଯାହା ଟେମ୍ପଲେଟରେ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଅପରିଷ୍କାରତା ରହିଲେ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ସୁଗମ ପ୍ରଗତିକୁ ପ୍ରତିରୋଧ କରିପାରିବ |ସିଧାସଳଖ PCR ବର୍ତ୍ତମାନ ମଲିକୁଲାର ଡାଇଗ୍ନୋଷ୍ଟିକ୍ କ୍ଷେତ୍ରରେ ସବୁଠାରୁ ଲୋକପ୍ରିୟ ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ମଧ୍ୟରୁ ଗୋଟିଏ |

01 ସିଧାସଳଖ PCR ମୂଳତ animal ପଶୁ ଏବଂ ଉଦ୍ଭିଦ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହେଉଥିଲା |

ସିଧାସଳଖ PCR ର ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ପ୍ରୟୋଗ ପ୍ରାଣୀ ଏବଂ ଉଦ୍ଭିଦ କ୍ଷେତ୍ରରେ, ଯେପରିକି ମୂଷାଙ୍କ ରକ୍ତ, ଟିସୁ ଏବଂ କେଶ, ବିଲେଇ, ଚିକେନ୍, ରାବଣ, ମେଣ୍, ା, ଗୋରୁ ଇତ୍ୟାଦି, ଉଦ୍ଭିଦ ପତ୍ର ଏବଂ ମଞ୍ଜି ଇତ୍ୟାଦି, ଜେନୋଟାଇପିଂ, ଟ୍ରାନ୍ସଜେନିକ୍, ପ୍ଲାସିମ ଚିହ୍ନଟ, ଜିନ୍ ନକ୍ଆଉଟ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ, DNA ଉତ୍ସ ଚିହ୍ନଟ, ପ୍ରଜାତି ଚିହ୍ନଟ, SNP ବିଶ୍ଳେଷଣ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ କ୍ଷେତ୍ରରେ |

ଏହି କ୍ଷେତ୍ରଗୁଡିକର କିଛି ସାଧାରଣ ବ features ଶିଷ୍ଟ୍ୟ ଅଛି, ଅର୍ଥାତ୍ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ଅଧିକ ଏବଂ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଉତ୍ତୋଳନ ଅସୁବିଧାଜନକ ଅଟେ, ତେଣୁ ପ୍ରତ୍ୟକ୍ଷ PCR କେବଳ ସମୟ ସଞ୍ଚୟ କରିପାରିବ ନାହିଁ ଏବଂ ଫଳାଫଳ ଉପରେ ସାମାନ୍ୟ ପ୍ରଭାବ ପକାଇବ ନାହିଁ, ବରଂ ଖର୍ଚ୍ଚ ମଧ୍ୟ ସଞ୍ଚୟ କରିପାରିବ |

ପାଥୋଜେନ ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ସିଧାସଳଖ PCR ହେଉଛି ନିକଟ ଅତୀତର କିଛି ବିଷୟ, କିଛି PCR ପୁନ ag ଉତ୍ପାଦକ ନୂତନତ୍ୱ କରିବା ସମୟରେ ଏହି ଦିଗରେ ବହୁ ଉଦ୍ୟମ କରିଛନ୍ତି |ବିଶେଷକରି ଏହି COVID-19 ମହାମାରୀରେ, SARS-CoV-2 ନ୍ୟୁକ୍ଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ଡିଟେକସନ୍ କିଟ୍ (ମଲ୍ଟିପ୍ଲେକ୍ସ PCR ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପ୍ରୋବ ପ୍ରଣାଳୀ) ପରି ଅନେକ ଚିହ୍ନଟ ଦ୍ରବ୍ୟ ବଜାରରେ ପ୍ରକାଶ ପାଇଛି, ଯାହା SARS-CoV-2 ନ୍ୟୁକ୍ଲିଅକ୍ ଏସିଡ୍ ର ଗୁଣାତ୍ମକ ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ RT PCR ଟେକ୍ନୋଲୋଜି (rRT-PCR) ବ୍ୟବହାର କରିଥାଏ |

ସାଧାରଣ ORF1ab, N, E, ଏବଂ ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ ସିଧାସଳଖ PCR ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ବ୍ୟବହାର କରୁଥିବା କମ୍ପାନୀଗୁଡିକ ମଧ୍ୟରୁ ଫୋରେଜେନ୍ ଅନ୍ୟତମ |ପ୍ରକାର ମାନବ ନାସୋଫାର୍ଜିଗଲ୍ କିମ୍ବା ଓରୋଫାର୍ଜିଙ୍ଗାଲ୍ ସ୍ ab ାବ୍ ନମୁନାରେ ଲାଇନ୍ସ୍ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଯେପରିକି SARS-CoV-2 B.1.1.7 ବଂଶ (UK), B.1.351 ବଂଶ (ZA), B.1.617 ବଂଶ (IND) ଏବଂ P.1 ବଂଶ (BR) |

02  ପ୍ରତ୍ୟକ୍ଷ PCR ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ ରେଜେଣ୍ଟସ୍ |

ନମୁନା ଲାଇସେଟ୍ |

ନମୁନା ଲାଇସେଟ୍ ନିଜେ ବିନ୍ୟାସ କରାଯାଇପାରିବ କିମ୍ବା କ୍ରୟ କରାଯାଇପାରିବ |ବିଭିନ୍ନ ବ୍ରାଣ୍ଡର ଲାଇସେଟ୍ ରଚନାରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ ଲାଇସିଂ କ୍ଷମତାକୁ ଭିନ୍ନ କରିବ, ଏବଂ ତା’ପରେ ଲାଇସିଂ ସମୟ ସାମାନ୍ୟ ଭିନ୍ନ ହେବ |ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ପଶୁ ଟିସୁ ନମୁନା ପ୍ରସ୍ତୁତି ପାଇଁ ସାଧାରଣତ 30 30 ମିନିଟ୍ କିମ୍ବା ରାତାରାତି ଲାଇସିସ୍ ସୁପାରିଶ କରାଯାଏ, ଏବଂ ଜୀବାଣୁଙ୍କ ପାଇଁ ଲାଇସିସ୍ ସମାଧାନ 3-10 ମିନିଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ରହିଥାଏ |

PCR ମାଷ୍ଟର ମିଶ୍ରଣ |

ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବର୍ଦ୍ଧନ ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ବର୍ଦ୍ଧିତ କ୍ଷମତା ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ହଟ-ଷ୍ଟାର୍ଟ DNA ପଲିମେରେଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |ସିଧାସଳଖ PCR ର ମୂଳ ହେଉଛି ଏକ ଅତ୍ୟଧିକ ସହନଶୀଳ ପଲିମେରେଜ୍ |

ନମୁନାରେ ଥିବା ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକୁ ବିଲୋପ କରନ୍ତୁ କିମ୍ବା ପ୍ରତିରୋଧ କରନ୍ତୁ ଯାହା DNA ବିସ୍ତାରକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ |

ଲାଇସେଟ୍ ସହିତ ନମୁନା ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ପରେ, ପ୍ରୋଟିନ୍, ଲିପିଡସ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ କୋଷ ଆବର୍ଜନା ମୁକ୍ତ ହେବ, ଏହି ପଦାର୍ଥଗୁଡିକ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ପ୍ରତିରୋଧ କରିବ |ତେଣୁ, ସିଧାସଳଖ PCR ଏହି କାରଣଗୁଡିକର ପ୍ରଭାବ ହ୍ରାସ କରିବାକୁ ଅନୁରୂପ ଅପସାରଣ କିମ୍ବା ଇନହିବିଟରଗୁଡ଼ିକର ଯୋଗ ଆବଶ୍ୟକ କରେ |

03  ସିଧାସଳଖ PCR ର ପାଞ୍ଚଟି ଜ୍ଞାନ ବିନ୍ଦୁର ସଂଗ୍ରହ |

ପ୍ରଥମେ, ବିଭିନ୍ନ ଜ ological ବିକ ନମୁନା ପାଇଁ ସିଧାସଳଖ PCR ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ହେଉଛି ଏକ ପ୍ରତ୍ୟକ୍ଷ PCR ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା |ଏହି ବ technical ଷୟିକ ଅବସ୍ଥାରେ, ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଅଲଗା କରିବା ଏବଂ ବାହାର କରିବା, ଟିସୁ ନମୁନାକୁ ସିଧାସଳଖ ବସ୍ତୁ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରିବା ଏବଂ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରିବା ପାଇଁ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ପ୍ରାଇମର୍ ଯୋଡିବା ଆବଶ୍ୟକ ନାହିଁ |

ଦ୍ୱିତୀୟତ Direct, ସିଧାସଳଖ PCR ଟେକ୍ନୋଲୋଜି କେବଳ ପାରମ୍ପାରିକ DNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ନୁହେଁ, ବରଂ RNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ PCR ମଧ୍ୟ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରେ |

ତୃତୀୟତ Direct, ସିଧାସଳଖ PCR ଟେକ୍ନୋଲୋଜି କେବଳ ଟିସୁ ନମୁନାରେ ନିୟମିତ ଗୁଣାତ୍ମକ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକୁ କାର୍ଯ୍ୟକାରୀ କରେ ନାହିଁ, ବରଂ ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ qPCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକୁ ମଧ୍ୟ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରେ, ଯାହାକି ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀକୁ ଦୃ strong ଆଣ୍ଟି-ବ୍ୟାକଗ୍ରାଉଣ୍ଡ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ହସ୍ତକ୍ଷେପ କ୍ଷମତା ଏବଂ ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଆଣ୍ଟାଗନାଷ୍ଟିକ୍ କ୍ଷମତାକୁ ବନ୍ଦ କରିଥାଏ |

ଚତୁର୍ଥ, ସିଧାସଳଖ PCR ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ଦ୍ୱାରା ଲକ୍ଷ୍ୟ କରାଯାଇଥିବା ନମୁନାଗୁଡ଼ିକ କେବଳ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ରିଲିଜ୍ ଆବଶ୍ୟକ କରେ, ଏବଂ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ବାଧା ସୃଷ୍ଟି କରୁଥିବା ପ୍ରୋଟିନ୍, ପଲିସାକାରାଇଡ୍, ଲୁଣ ଆୟନ ଇତ୍ୟାଦି ଅପସାରଣ କରେ ନାହିଁ |ଯାହା ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ପଲିମେରେଜ୍ ଏବଂ PCR ମିକ୍ସ ଆବଶ୍ୟକ କରେ, ଜଟିଳ ପରିସ୍ଥିତିରେ ଏନଜାଇମ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ ନକଲ ସଠିକତା ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ ଉତ୍କୃଷ୍ଟ ପ୍ରତିରୋଧ ଏବଂ ଆଡାପ୍ଟାବିଲିଟି ରହିବା ଆବଶ୍ୟକ |

ପଞ୍ଚମ, କ N ଣସି ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ସମୃଦ୍ଧ ଚିକିତ୍ସା ବିନା ସିଧାସଳଖ PCR ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ଦ୍ୱାରା ଲକ୍ଷ୍ୟ କରାଯାଇଥିବା ଟିସୁ ନମୁନା ଏବଂ ଟେମ୍ପଲେଟର ପରିମାଣ ବହୁତ କମ୍, ଯାହା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀକୁ ଅତ୍ୟଧିକ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଏବଂ ବର୍ଦ୍ଧନ ଦକ୍ଷତା ଆବଶ୍ୟକ କରେ |