ଲିଡ୍ |

ଲମ୍ବା ଅଣ-କୋଡିଂ RNA, lncRNA ହେଉଛି ଏକ ଅଣ-କୋଡିଂ RNA, ଯାହାର ଲମ୍ବ 200 ରୁ ଅଧିକ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍, ସାଧାରଣତ 200 200-100000 nt ମଧ୍ୟରେ |lncRNA ଏପିଜେନେଟିକ୍, ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଏବଂ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ସ୍ତରରେ ଜିନ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିଥାଏ ଏବଂ X କ୍ରୋମୋଜୋମ୍ ସାଇଲେନ୍ସିଂ, ଜିନୋମ୍ ଇମ୍ପ୍ରିଣ୍ଟିଂ ଏବଂ କ୍ରୋମାଟିନ୍ ମୋଡିଫିକେସନ୍, ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଆକ୍ଟିଭେସନ୍, ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ବାଧା, ଆଣବିକ ପରିବହନ, କୋଷ ଚକ୍ର ନିୟନ୍ତ୍ରଣ, କୋଷ ଭିନ୍ନତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଏବଂ ଡୋଜ୍ କ୍ଷତିପୂରଣ ପ୍ରଭାବ (ଡୋଜେଜ୍ କ୍ଷତିପୂରଣ ପ୍ରଭାବ) ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ବହୁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ନିୟାମକ ପ୍ରକ୍ରିୟା, ଘନ ଘନ ଘନ ଘନ ଘନ ଘନ ଅଟେ |

01  LncRNA ର ପ୍ରକାର ଏବଂ ଗୁଣ |

ଉପରୋକ୍ତ ଚିତ୍ରରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି lncRNA ଏହାର ଗଠନର ବିଭିନ୍ନ ଉତ୍ସ ଅନୁଯାୟୀ ଅନେକ ପ୍ରକାରରେ ବିଭକ୍ତ |ନିମ୍ନଲିଖିତ ବ characteristics ଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡିକ ଅଛି:

1. lncRNA ଗୁଡ଼ିକ ସାଧାରଣତ longer ଲମ୍ବା, ଗତିଶୀଳ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ଏବଂ ଭିନ୍ନତା ସମୟରେ ବିଭିନ୍ନ ବିଭାଜନ ପ୍ରଣାଳୀ ସହିତ |
2. କୋଡିଂ ଜିନ୍ ସହିତ ତୁଳନା କଲେ lncRNA ସାଧାରଣତ a ଏକ କମ୍ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସ୍ତର ଥାଏ |
3. ଅଧିକାଂଶ lncRNA ଗୁଡ଼ିକର ଟିସୁ ଭିନ୍ନତା ଏବଂ ବିକାଶ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ସ୍ପଷ୍ଟ ସାମୟିକ ଏବଂ ସ୍ଥାନିକ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଅଛି |
4. ଟ୍ୟୁମର୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ରୋଗରେ ଚରିତ୍ରଗତ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ଅଛି |
5. lncRNA ର ଉପସେଲୁଲାର୍ ଅବସ୍ଥାନ ବିଭିନ୍ନ ଅଟେ |
6. ସଂରକ୍ଷଣରେ କ୍ରମ କମ୍, କିନ୍ତୁ କାର୍ଯ୍ୟର ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଡିଗ୍ରୀ ସଂରକ୍ଷଣ ଇତ୍ୟାଦି ଅଛି |

02 LncRNA ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ବିଷୟରେ ବାରମ୍ବାର ପଚରାଯାଉଥିବା ପ୍ରଶ୍ନ |

କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ lncRNA ର କମ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ, ଲମ୍ବା ଦ length ର୍ଘ୍ୟ ଏବଂ ଉଚ୍ଚ ସ୍ତରୀୟ ସଂରଚନା ହେତୁ, ଏହିପରି RNA ରେ ପ୍ରାୟତ complex ଜଟିଳ ସଂରଚନା ଥାଏ ଯେପରିକି ଷ୍ଟେମ୍ ଲୁପ୍ କିମ୍ବା ହେୟାରପିନ, ଏବଂ RT-qPCR ଅସଫଳ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ କିମ୍ବା ନିମ୍ନ ଦକ୍ଷତା ସମସ୍ୟାର ସମ୍ମୁଖୀନ ହୁଏ |

03 LncRNA ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ସମାଧାନ |

କେନ୍ଦ୍ରୀୟ ନିୟମରେ, RNA କୁ ଏକ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରି DNA କୁ ସିନ୍ଥାଇଜ୍ କରିବା ପାଇଁ ନିଜସ୍ୱ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରି RNA ଜୀବାଣୁର ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ କୁହାଯାଏ |ଭିଟ୍ରୋରେ cDNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ସିନ୍ଥାଇଜ୍ କରିବା ପାଇଁ RNA ଭାଇରସ୍ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବାର ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ କୁହାଯାଏ |ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ସିଷ୍ଟମରେ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ମୁଖ୍ୟ ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ: RNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍, ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍, ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଉପାଦାନ |

1.RNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ |

ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଉପରେ RNA ଟେମ୍ପଲେଟର ପ୍ରଭାବ ଏହାର ଗଠନ, ଶୁଦ୍ଧତା ଏବଂ ଅଖଣ୍ଡତାରେ ପ୍ରତିଫଳିତ ହୁଏ |ବାହାର କରାଯାଇଥିବା RNA ର ଶୁଦ୍ଧତା ଏବଂ ଅଖଣ୍ଡତା ଯେତେ ଅଧିକ, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ର ଦକ୍ଷତା ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରିମାଣିକ ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ଅଧିକ ସଠିକ୍ |ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ RNA ନିଷ୍କାସନ ପୁନ ag ଦ୍ by ାରା ଶୁଦ୍ଧ ହୋଇଥିବା RNA ପ୍ରାୟତ alcohol ମଦ୍ୟପାନ ଏବଂ ଗୁଆନାଡାଇନ୍ ଲୁଣର ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ ଧାରଣ କରିଥାଏ, ଯାହାକି ଅଧିକାଂଶ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ଉପରେ ଏକ ଦୃ strong ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ |

2. ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ରିଭର୍ କରନ୍ତୁ |

ସମଗ୍ର ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ସିଷ୍ଟମରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ର ଏକ ପ୍ରମୁଖ ପ୍ରଭାବ ରହିଛି |ଅଧିକାଂଶ ଲାବୋରେଟୋରୀରେ ବ୍ୟବହୃତ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ତାପମାତ୍ରା ସାଧାରଣତ 42 42 ° C ଅଟେ |ବାସ୍ତବରେ, ଉଚ୍ଚ ସ୍ତରୀୟ RNA ସଂରଚନା ଖୋଲିବା ପାଇଁ ଅଧିକ ତାପମାତ୍ରା ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ, ଏବଂ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକତା ଅଧିକ |

3.ପ୍ରାଥମିକ

ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକରେ ଜିନ୍-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଇମର୍, ରାଣ୍ଡମ୍ ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ଅଲିଗୋ ଡିଟି ପ୍ରାଇମର୍ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ |ଅଧିକାଂଶ lncRNA ଗୁଡ଼ିକରେ polyA ଲାଞ୍ଜ ନାହିଁ, ଏବଂ ଅଲିଗୋ dT ସହିତ ରାଣ୍ଡମ ପ୍ରାଇମର୍ଗୁଡ଼ିକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ମେଳ କରିବା ଜରୁରୀ |

4. ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ |

RNA କୁ ଅବନତି କରିବା ସହଜ ବୋଲି ଦୃଷ୍ଟିରେ ରଖି, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ସିଷ୍ଟମରେ ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକର ପରିଚୟକୁ କମ୍ କରାଯାଇପାରିବ, ଯାହାକି RNase ର ପ୍ରବେଶକୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ପ୍ରତିରୋଧ କରିପାରିବ ଏବଂ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ର ସୁଗମ ଅଗ୍ରଗତି ନିଶ୍ଚିତ କରିପାରିବ |

Fଓରେଜିନ୍ |RNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍, qPCR କୁ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରାପ୍ତ କରେ |

ଆପଣଙ୍କର lncRNA ଚିହ୍ନଟକୁ ବିସ୍ତୃତ ଭାବରେ ଏସକର୍ଟ କରନ୍ତୁ |

ପଶୁ ସମୁଦାୟ RNA I |solationକିଟ୍ (gDNA ଅପସାରଣ ସ୍ତମ୍ଭ ସହିତ)

କକ୍ଷ ସମୁଦାୟ RNA I |solationକିଟ୍ (gDNA ଅପସାରଣ ସ୍ତମ୍ଭ ସହିତ)

Lnc-RT ହିରୋଟିଏମ୍ I (gDNase ସହିତ) (lncRNA ରୁ ପ୍ରଥମ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ cDNA ସିନ୍ଥେସିସ୍ ପାଇଁ ସୁପର ପ୍ରେମିକ୍ସ)

ପ୍ରକୃତ ସମୟ PCR EasyTM-SYBR ସବୁଜ I |

Aଲାଭ ofRNA ନିଷ୍କାସନ:

କିଟ୍ ତୃତୀୟ ପି generation ଼ିର RNA ନିଷ୍କାସନ ପ୍ରଯୁକ୍ତିକୁ ବ୍ୟବହାର କରେ, DNase ବ୍ୟବହାର କରିବାର କ .ଣସି ଆବଶ୍ୟକତା ନାହିଁ |

96, 24, 12, ଏବଂ 6-ଭଲ ପ୍ଲେଟ୍ ସଂସ୍କୃତ କୋଷରୁ 11 ମିନିଟ୍, gDNA ମୁକ୍ତ, ଉଚ୍ଚ-ଶୁଦ୍ଧତା, ଉଚ୍ଚ-ଗୁଣାତ୍ମକ ସମୁଦାୟ ସେଲ୍ RNA ର ଉଚ୍ଚ-ଦକ୍ଷତା ନିଷ୍କାସନ |

LncRNA ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ର ଲାଭ:

ଜେନୋମିକ୍ DNA ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ଶୀଘ୍ର ହଟାଇବା ପାଇଁ LncRNA ପାଇଁ ଏକ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ସିଷ୍ଟମ୍ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର ଭାବରେ ବିକଶିତ |

ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ସିଷ୍ଟମରେ ଉଚ୍ଚ ତାପଜ ସ୍ଥିରତା ଅଛି ଏବଂ ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ 50 ° C ରେ ଭଲ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ଅଛି |

ଉଚ୍ଚ ଜିସି ବିଷୟବସ୍ତୁ ଏବଂ ଜଟିଳ ଦଳୀୟ ସଂରଚନା ସହିତ ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକ ଉଚ୍ଚ ଦକ୍ଷତା ସହିତ ଓଲଟା ହୋଇପାରେ |

ସୁବିଧାof qPCR:

ହଟ୍ ଷ୍ଟାର୍ଟ ଫରେଜେନ୍ ଟ୍ୟାକ୍ ପଲିମେରେଜ୍ ର ଅଧିକ ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଦକ୍ଷତା, ଅଧିକ ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଏବଂ ଅଧିକ ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଅଛି |

ଅପ୍ଟିମାଇଜଡ୍ ରିଅଲ୍ PCR ସହଜ ମିକ୍ସ SYBR ଗ୍ରୀନ୍ କରେ ମୋର ଅଧିକ ଚିହ୍ନଟ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଥାଏ, ଏବଂ ଏହାର ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ତୀବ୍ରତା ସମାନ ଦ୍ରବ୍ୟର 3-5 ଗୁଣ ଅଟେ, ଯାହା ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପରିମାଣିକ ପରୀକ୍ଷଣର ଆବଶ୍ୟକତା ପୂରଣ କରିପାରିବ |