ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR, ପରିମାଣିକ PCR କିମ୍ବା qPCR ଭାବରେ ମଧ୍ୟ ଜଣାଶୁଣା, PCR ବର୍ଦ୍ଧିତ ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକର ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ ମନିଟରିଂ ଏବଂ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ଏକ ପଦ୍ଧତି |
କାରଣ ପରିମାଣିକ PCR ର ସରଳ କାର୍ଯ୍ୟ, ଦ୍ରୁତ ଏବଂ ସୁବିଧାଜନକ, ଉଚ୍ଚ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା, ଭଲ ପୁନରାବୃତ୍ତି ଏବଂ ନିମ୍ନ ପ୍ରଦୂଷଣ ହାରର ସୁବିଧା ରହିଛି, ଏହା ଡାକ୍ତରୀ ପରୀକ୍ଷଣ, drug ଷଧର ଦକ୍ଷତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ, ଜିନ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ଅନୁସନ୍ଧାନ, ଟ୍ରାନ୍ସଜେନିକ୍ ଅନୁସନ୍ଧାନ, ଜିନ୍ ଚିହ୍ନଟ, ପାଥୋଜେନ ଚିହ୍ନଟ, ପ୍ରାଣୀ ଏବଂ ଉଦ୍ଭିଦ ଚିହ୍ନଟ କ୍ଷେତ୍ରରେ ବହୁଳ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |, ଖାଦ୍ୟ ପରୀକ୍ଷା ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ କ୍ଷେତ୍ର |
ତେଣୁ, ଆପଣ ଜୀବନ ବିଜ୍ଞାନରେ ମ basic ଳିକ ଅନୁସନ୍ଧାନରେ ନିୟୋଜିତ ଅଛନ୍ତି, କିମ୍ବା ଫାର୍ମାସ୍ୟୁଟିକାଲ୍ କମ୍ପାନୀ, ପଶୁପାଳନ କମ୍ପାନୀ, ଖାଦ୍ୟ କମ୍ପାନୀ, କିମ୍ବା ଏଣ୍ଟ୍ରି-ଏକ୍ଜିଟ୍ ଯାଞ୍ଚ ଏବଂ କ୍ୟାଣ୍ଟିନ ବ୍ୟୁରୋ, ପରିବେଶ ମନିଟରିଂ ବିଭାଗ, ଡାକ୍ତରଖାନା ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ୟୁନିଟ୍ ର କର୍ମଚାରୀ, ଆପଣ ଅଧିକ କିମ୍ବା କମ ସଂସ୍ପର୍ଶରେ ଆସିବେ କିମ୍ବା ପରିମାଣିକ PCR ମାଷ୍ଟର କରିବାର ଜ୍ଞାନ ଜାଣିବା ଆବଶ୍ୟକ |

ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ର ନୀତି |

ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ହେଉଛି ଏକ ପଦ୍ଧତି ଯେଉଁଥିରେ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀରେ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପଦାର୍ଥଗୁଡିକ ଯୋଗ କରାଯାଇଥାଏ, ଏବଂ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସିଗ୍ନାଲ୍ ତୀବ୍ରତାକୁ ପ୍ରକୃତ ସମୟରେ ଏକ ପରିମାଣିକ PCR ଯନ୍ତ୍ର ଦ୍ୱାରା ନୀରିକ୍ଷଣ କରାଯାଏ ଏବଂ ଶେଷରେ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ତଥ୍ୟ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ କରାଯାଏ |

【ବିସ୍ତାର ବକ୍ର】PCR ର ଗତିଶୀଳ ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ବର୍ଣ୍ଣନା କରୁଥିବା ବକ୍ର ଅଟେ |PCR ର ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ର ପ୍ରକୃତରେ ଏକ ମାନକ ଏକ୍ସପେନ୍ସିଭ୍ ବକ୍ର ନୁହେଁ, କିନ୍ତୁ ଏକ ସିଗମଏଡ୍ ବକ୍ର |

[ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ରର ପ୍ଲାଟଫର୍ମ ପର୍ଯ୍ୟାୟ]PCR ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା ବୃଦ୍ଧି, ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ନିଷ୍କ୍ରିୟ ହେବା, dNTP ଏବଂ ପ୍ରାଇମର ହ୍ରାସ, ଏବଂ ଉତ୍ପାଦ ଦ୍ p ାରା ଉତ୍ପାଦ ପାଇରୋଫୋସଫେଟ୍ ଇତ୍ୟାଦି ଦ୍ by ାରା ସିନ୍ଥେସିସ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ପ୍ରତିବନ୍ଧକ, PCR ସର୍ବଦା ବିସ୍ତାରିତ ହୁଏ ନାହିଁ |, ଏବଂ ଶେଷରେ ଏକ ମାଳଭୂମିରେ ପ୍ରବେଶ କରିବ |

[ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ରର ଏକ୍ସପେନ୍ସିନାଲ୍ ଅଭିବୃଦ୍ଧି ଅଞ୍ଚଳ]ଯଦିଓ ମାଳଭୂମି ପର୍ଯ୍ୟାୟ ବହୁତ ଭିନ୍ନ ହୋଇଥାଏ, ବିସ୍ତାର ବକ୍ରର ସୂକ୍ଷ୍ମ ଅଭିବୃଦ୍ଧି ଅଞ୍ଚଳର ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଅଞ୍ଚଳରେ, ପୁନରାବୃତ୍ତି ବହୁତ ଭଲ, ଯାହା PCR ର ପରିମାଣିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ |

[ଥ୍ରେସହୋଲ୍ଡ ମୂଲ୍ୟ ଏବଂ Ct ମୂଲ୍ୟ]ଆମେ ବିସ୍ତାରିତ ବକ୍ରର ସୂକ୍ଷ୍ମ ଅଭିବୃଦ୍ଧି କ୍ଷେତ୍ରରେ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଚିହ୍ନଟର ସୀମା ମୂଲ୍ୟ ସ୍ଥିର କରିଥାଉ, ଯଥା ଥ୍ରେଶୋଲ୍ଡ ମୂଲ୍ୟ (ଥ୍ରେସହୋଲ୍ଡ) |ଥ୍ରେସହୋଲ୍ଡ ମୂଲ୍ୟ ଏବଂ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ରର ଛକ ହେଉଛି Ct ମୂଲ୍ୟ, ଅର୍ଥାତ୍, Ct ମୂଲ୍ୟ ଥ୍ରେସହୋଲ୍ଡ ମୂଲ୍ୟ ପହଞ୍ଚିବା ପରେ ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା (ଥ୍ରେସହୋଲ୍ଡ ଚକ୍ର) କୁ ସୂଚିତ କରେ |

ନିମ୍ନରେ ଥିବା ଗ୍ରାଫ୍ ଥ୍ରେସହୋଲ୍ଡ ଲାଇନ ଏବଂ ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ର, ଥ୍ରେସହୋଲ୍ଡ ଏବଂ Ct ମୂଲ୍ୟ ମଧ୍ୟରେ ସମ୍ପର୍କକୁ ସ୍ପଷ୍ଟ ଭାବରେ ଦର୍ଶାଏ |

【କିପରି ପରିମାଣ କରିବେ?】

ଗାଣିତିକ ତତ୍ତ୍ by ଦ୍ୱାରା ଏହା ପ୍ରମାଣିତ ହୋଇଛି ଯେ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକର ଲୋଗାରିଦମ ସହିତ Ct ମୂଲ୍ୟର ଏକ ବିପରୀତ ର line ଖ୍ୟ ସମ୍ପର୍କ ଅଛି |ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ପ୍ରକୃତ ସମୟରେ PCR ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଉତ୍ପାଦ ଉପରେ ନଜର ରଖେ ଏବଂ ଏକ୍ସପୋନ୍ସନାଲ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ସେଗୁଡିକର ପରିମାଣ କରେ |

PCR ର ପ୍ରତ୍ୟେକ ଚକ୍ର ପାଇଁ, DNA ଦ୍ରୁତ ଗତିରେ 2 ଗୁଣ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଲା ଏବଂ ଶୀଘ୍ର ଏକ ମାଳଭୂମିରେ ପହଞ୍ଚିଲା |

ଧରାଯାଉ DNA ଆରମ୍ଭ କରିବାର ପରିମାଣ ହେଉଛି A |₀ , n ଚକ୍ର ପରେ, DNA ଉତ୍ପାଦର ତତ୍ତ୍ୱିକ ପରିମାଣ ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ କରାଯାଇପାରେ:

A _n =A ₀ × 2ⁿ

ତାପରେ, ପ୍ରାରମ୍ଭିକ DNA ପରିମାଣ A 0 ଯେତେ ଅଧିକ ହେବ, ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦ୍ରବ୍ୟର ପରିମାଣ ଚିହ୍ନଟ ମୂଲ୍ୟ An ରେ ପହଞ୍ଚିବ, ଏବଂ An ରେ ପହଞ୍ଚିବା ସମୟରେ ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା ହେଉଛି Ct ମୂଲ୍ୟ |ତାହା ହେଉଛି, ପ୍ରାରମ୍ଭିକ DNA ପରିମାଣ A 0 ଯେତେ ଅଧିକ, ପୂର୍ବର ବର୍ଦ୍ଧିତ ବକ୍ର ଶିଖର, ଏବଂ ଅନୁରୂପ ଭାବରେ ଆବଶ୍ୟକ ଚକ୍ର n କମ୍ ଅଟେ |

ଆମେ ଜଣାଶୁଣା ଏକାଗ୍ରତାର ମାନର ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ ଦିଲ୍ୟୁସନ୍ କରିଥାଉ ଏବଂ ଏହାକୁ ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ପାଇଁ ଏକ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରୁ, ଏବଂ DNA ପରିମାଣ ଆରମ୍ଭରୁ କ୍ରମାନୁସାରେ ସମାନ ବ୍ୟବଧାନରେ ଏକ ବର୍ଦ୍ଧିତ ବକ୍ରତା ମିଳିବ |Ct ମୂଲ୍ୟ ଏବଂ ଆରମ୍ଭ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ସଂଖ୍ୟାଗୁଡ଼ିକର ଲୋଗାରିଦମ୍ ମଧ୍ୟରେ ର line ଖ୍ୟ ସମ୍ପର୍କ ଅନୁଯାୟୀ, a[ମାନକ ବକ୍ର] ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଇପାରେ |

ନମୁନାର Ct ମୂଲ୍ୟକୁ ଅଜ୍ଞାତ ଏକାଗ୍ରତା ସହିତ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ବକ୍ରରେ ବଦଳାଇ, ଅଜ୍ଞାତ ଏକାଗ୍ରତା ସହିତ ନମୁନାର ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ପରିମାଣ ମିଳିପାରିବ, ଯାହା ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ର ପରିମାଣିକ ନୀତି |

ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ର ଚିହ୍ନଟ ପଦ୍ଧତି |

ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସିଷ୍ଟମରେ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ତୀବ୍ରତା ଚିହ୍ନଟ କରି PCR ଆମ୍ଲିଫିକେସନ୍ ଉତ୍ପାଦଗୁଡ଼ିକୁ ଚିହ୍ନଟ କରେ |

ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗ ଏମ୍ବେଡିଂ ପଦ୍ଧତିର ନୀତି |】

ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗ |, ଯେପରିକି ଟିବି ଗ୍ରୀନ୍ ®, ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଭାବରେ PCR ସିଷ୍ଟମରେ ଦ୍ୱିଗୁଣିତ DNA ଏବଂ ବାନ୍ଧିବା ପରେ ଫ୍ଲୋରୋସେସ୍ ସହିତ ବାନ୍ଧିପାରେ |

PCR ଚକ୍ରର ବୃଦ୍ଧି ସହିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀରେ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ତୀବ୍ରତା ବୃଦ୍ଧି ପାଇଲା |ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ତୀବ୍ରତାକୁ ଚିହ୍ନଟ କରି ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମୟରେ ଡିଏନ୍ଏ ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ର ପରିମାଣକୁ ପ୍ରକୃତ ସମୟରେ ତଦାରଖ କରାଯାଇପାରିବ, ଏବଂ ତାପରେ ନମୁନାରେ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଟେମ୍ପଲେଟର ପରିମାଣ ଓଲଟା ଅନୁମାନ କରାଯାଇପାରେ |

【ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପ୍ରୋବ ପଦ୍ଧତିର ନୀତି |】

ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଅନୁସନ୍ଧାନ |5 ′ ଶେଷରେ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ଏବଂ 3 ′ ଶେଷରେ ଏକ ଲିଭାଇବା ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ଏକ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ କ୍ରମ, ଯାହା ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ସହିତ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଭାବରେ ବାନ୍ଧି ହୋଇପାରେ |ଯେତେବେଳେ ଅନୁସନ୍ଧାନ ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ଥାଏ, ଫ୍ଲୋରୋଫୋର ଦ୍ itted ାରା ନିର୍ଗତ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଲିଭାଇବା ଗୋଷ୍ଠୀ ଦ୍ qu ାରା ଲିଭାଯାଇଥାଏ ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେସ୍ ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ |ଯେତେବେଳେ ଅନୁସନ୍ଧାନ କ୍ଷୟ ହୁଏ, ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପଦାର୍ଥ ବିଚ୍ଛିନ୍ନ ହୋଇ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ନିର୍ଗତ କରେ |

PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମାଧାନରେ ଏକ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଅନୁସନ୍ଧାନ ଯୋଡା ଯାଇଛି |ଆନ୍ନାଲିଂ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ, ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପ୍ରୋବ ଟେମ୍ପଲେଟର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସ୍ଥିତିକୁ ବାନ୍ଧିବ |ସମ୍ପ୍ରସାରଣ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ, PCR ଏନଜାଇମର 5 ′ → 3 ′ ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ସହିତ ହାଇବ୍ରିଡାଇଜଡ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପ୍ରୋବକୁ କ୍ଷୟ କରିପାରେ ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପଦାର୍ଥ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ନିର୍ଗତ ହେବା ପାଇଁ ବିଚ୍ଛିନ୍ନ ହୋଇଯାଏ |ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀରେ ଅନୁସନ୍ଧାନର ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ତୀବ୍ରତାକୁ ଚିହ୍ନଟ କରି, PCR ଉତ୍ପାଦର ବର୍ଦ୍ଧିତ ପରିମାଣ ଉପରେ ନଜର ରଖିବାର ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟ ହାସଲ ହୋଇପାରିବ |

【ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଚିହ୍ନଟ ପଦ୍ଧତିର ଚୟନ |】

ଯଦି ଏହା ଉଚ୍ଚ ହୋମୋଲୋଜି ସହିତ କ୍ରମକୁ ପୃଥକ କରିବା ଏବଂ ମଲ୍ଟିପ୍ଲେକ୍ସ PCR ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ ଯେପରିକି SNP ଟାଇପିଂ ଆନାଲିସିସ୍, ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପ୍ରୋବ ପଦ୍ଧତି ଅପୂରଣୀୟ |
ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ, ଏକ ସରଳ, ସହଜ ଏବଂ ସ୍ୱଳ୍ପ ମୂଲ୍ୟର ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଚିମେରା ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |

ପ୍ରୋବସ୍ ଷ୍ଟ୍ରଙ୍ଗ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା, ମଲ୍ଟିପ୍ଲେକ୍ସ PCR ପାଇଁ ସକ୍ଷମ |

ଅଭାବ

ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ଉଚ୍ଚ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଆବଶ୍ୟକତା;

ମଲ୍ଟିପ୍ଲେକ୍ସ PCR ସଂପାଦିତ ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଅନୁସନ୍ଧାନ, ଉଚ୍ଚ ମୂଲ୍ୟ ଡିଜାଇନ୍ କରିବାକୁ ଆବଶ୍ୟକ;

ବେଳେବେଳେ ଅନୁସନ୍ଧାନ ଡିଜାଇନ୍ କଷ୍ଟକର |

ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଉତ୍ପାଦ: