30 ବର୍ଷରୁ ଅଧିକ ଇତିହାସ ସହିତ PCR (ପଲିମେରେଜ୍ ଚେନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା) ହେଉଛି ଏକ ଭିଟ୍ରୋ ଡିଏନ୍ଏ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଟେକ୍ନୋଲୋଜି |

1983 ରେ ଆମେରିକାର ସେଟସ୍ ର କରୀ ମଲ୍ଲିକଙ୍କ ଦ୍ P ାରା PCR ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ଅଗ୍ରଗାମୀ ହୋଇଥିଲା। ମଲ୍ଲିକ 1985 ରେ PCR ପେଟେଣ୍ଟ ପାଇଁ ଆବେଦନ କରିଥିଲେ ଏବଂ ସେହି ବର୍ଷ ବିଜ୍ଞାନ ଉପରେ ପ୍ରଥମ PCR ଏକାଡେମିକ୍ କାଗଜ ପ୍ରକାଶ କରିଥିଲେ।ତାଙ୍କ କାର୍ଯ୍ୟ ପାଇଁ 1993 ରେ ମଲ୍ଲିକଙ୍କୁ ରସାୟନ ବିଜ୍ଞାନରେ ନୋବେଲ ପୁରସ୍କାର ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇଥିଲା।

PCR ର ମ Basic ଳିକ ନୀତିଗୁଡିକ |

PCR ଏକ ଲକ୍ଷରୁ ଅଧିକ ଥର ଟାର୍ଗେଟ୍ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିପାରିବ |ଏହି ନୀତିଟି ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ର ଅନୁକ୍ରମଣିକା ଅଧୀନରେ ଅଛି, ପ୍ୟାରେଣ୍ଟ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ DNA କୁ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଇମର୍ ଭାବରେ ବିସ୍ତାରର ପ୍ରାରମ୍ଭ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରେ |ଏହାକୁ ଭିଟ୍ରୋରେ ନକଲ କରାଯାଏ, ଯେପରି ଡେନାଟ୍ରେସନ୍, ଆନ୍ଲିଙ୍ଗ୍ ଏବଂ ଏକ୍ସଟେନ୍ସନ୍ |ପ୍ୟାରେଣ୍ଟ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ DNA ସହିତ daughter ିଅ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ DNA ର ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ପ୍ରକ୍ରିୟା |

ମାନକ PCR ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ତିନୋଟି ସୋପାନରେ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇଛି:

1. ଡେନାଟୁରେସନ୍: DNA ଡବଲ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ ଅଲଗା କରିବା ପାଇଁ ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରା ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |ଡିଏନ୍ଏ ଡବଲ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ ମଧ୍ୟରେ ଥିବା ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ବନ୍ଧ ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରାରେ ଭାଙ୍ଗିଗଲା (93-98 ℃) |

2. ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍: ଡବଲ୍-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ ଡିଏନ୍ଏ ଅଲଗା ହେବା ପରେ ତାପମାତ୍ରାକୁ କମ୍ କରନ୍ତୁ ଯାହା ଦ୍ prim ାରା ପ୍ରାଇମର୍ ଏକକ-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ DNA ସହିତ ବାନ୍ଧି ହୋଇପାରିବ |

3. ଏକ୍ସଟେନ୍ସନ୍: ତାପମାତ୍ରା ହ୍ରାସ ହେବାବେଳେ ବନ୍ଧା ହୋଇଥିବା ପ୍ରାଇମର୍ଗୁଡ଼ିକରୁ DNA ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ ସହିତ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ ସିନ୍ଥାଇଜ୍ କରିବା ଆରମ୍ଭ କରେ |ଯେତେବେଳେ ସମ୍ପ୍ରସାରଣ ସମାପ୍ତ ହୁଏ, ଏକ ଚକ୍ର ସମାପ୍ତ ହୁଏ, ଏବଂ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ସଂଖ୍ୟା ଦ୍ୱିଗୁଣିତ ହୁଏ |

ଏହି ତିନୋଟି ସୋପାନକୁ 25-35 ଥର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ, DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ସଂଖ୍ୟା ଦ୍ରୁତ ଗତିରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଇବ |

PCR ର ଚତୁରତା ହେଉଛି ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକ ବିଭିନ୍ନ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ପାଇଁ ଡିଜାଇନ୍ ହୋଇପାରିବ, ଯାହା ଦ୍ target ାରା ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ଖଣ୍ଡଗୁଡିକ ଅଳ୍ପ ସମୟ ମଧ୍ୟରେ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇପାରିବ |

ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ, PCR କୁ ତିନୋଟି ଶ୍ରେଣୀରେ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇପାରେ, ଯଥା ସାଧାରଣ PCR, ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ଏବଂ ଡିଜିଟାଲ୍ PCR |

ସାଧାରଣ PCR ର ପ୍ରଥମ ପି generation ଼ି |

ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜିନ୍ ବ pl ାଇବା ପାଇଁ ଏକ ସାଧାରଣ PCR ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଉପକରଣ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, ଏବଂ ତାପରେ ଉତ୍ପାଦ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ଅଗରୋଜ୍ ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, କେବଳ ଗୁଣାତ୍ମକ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇପାରିବ |

ପ୍ରଥମ ପି generation ଼ିର PCR ର ମୁଖ୍ୟ ଅସୁବିଧା:

1. ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାର ଏବଂ ମିଥ୍ୟା ସକରାତ୍ମକ ଫଳାଫଳକୁ ପ୍ରବୃତ୍ତ |

2. ଚିହ୍ନଟ ଏକ ଦୀର୍ଘ ସମୟ ନେଇଥାଏ ଏବଂ ଅପରେସନ୍ କଷ୍ଟଦାୟକ ଅଟେ |

3. କେବଳ ଗୁଣାତ୍ମକ ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇପାରିବ |

ଦ୍ୱିତୀୟ ପି generation ଼ିର ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR |

ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR, ଯାହାକି qPCR ଭାବରେ ମଧ୍ୟ ଜଣାଶୁଣା, ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପ୍ରୋବ ବ୍ୟବହାର କରେ ଯାହା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀର ଅଗ୍ରଗତି ସୂଚାଇପାରେ ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ ଜମା ମାଧ୍ୟମରେ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦ୍ରବ୍ୟର ଜମା ଉପରେ ନଜର ରଖେ ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ବକ୍ର ମାଧ୍ୟମରେ ଫଳାଫଳକୁ ବିଚାର କରେ |ଏହାକୁ Cq ମୂଲ୍ୟ ଏବଂ ମାନକ ବକ୍ର ସାହାଯ୍ୟରେ ପରିମାଣ କରାଯାଇପାରିବ |

ଯେହେତୁ qPCR ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ଏକ ବନ୍ଦ ସିଷ୍ଟମରେ କରାଯାଏ, ପ୍ରଦୂଷଣର ସମ୍ଭାବନା କମିଯାଏ, ଏବଂ ପରିମାଣିକ ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସଙ୍କେତ ଉପରେ ନଜର ରଖାଯାଇପାରିବ, ତେଣୁ ଏହା କ୍ଲିନିକାଲ ଅଭ୍ୟାସରେ ବହୁଳ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଛି ଏବଂ PCR ରେ ପ୍ରାଧାନ୍ୟ ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା ହୋଇପାରିଛି |

ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ରେ ବ୍ୟବହୃତ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପଦାର୍ଥକୁ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇପାରେ: ଟାକମ୍ୟାନ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପ୍ରୋବ, ମଲିକୁଲାର ବିକନ୍ ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗ |

1) ଟାକମ୍ୟାନ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଯାଞ୍ଚ:

PCR ବିସ୍ତାରଣ ସମୟରେ, ଏକ ଯୁଗଳ ପ୍ରାଇମର୍ ଯୋଡିବାବେଳେ ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପ୍ରୋବ୍ ଯୋଡା ଯାଇଥାଏ |ଅନୁସନ୍ଧାନ ହେଉଛି ଏକ ଅଲିଗ୍ନୁକ୍ଲାଏଟାଇଡ୍ ଏବଂ ଉଭୟ ମୁଣ୍ଡକୁ ଏକ ସାମ୍ବାଦିକ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ଏବଂ ଏକ କ୍ୱେଞ୍ଚର୍ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ସହିତ ଲେବଲ୍ କରାଯାଇଛି |

ଯେତେବେଳେ ଅନୁସନ୍ଧାନ ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ହୁଏ, ସାମ୍ବାଦିକ ଗୋଷ୍ଠୀ ଦ୍ itted ାରା ନିର୍ଗତ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ ଲିଭାଇବା ଗୋଷ୍ଠୀ ଦ୍ୱାରା ଶୋଷିତ ହୁଏ;PCR ବିସ୍ତାର ସମୟରେ, ଟ୍ୟାକ୍ ଏନଜାଇମର 5′-3 ′ ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଅନୁସନ୍ଧାନକୁ ଖରାପ କରି ଖରାପ କରିଥାଏ, ଯାହା ସାମ୍ବାଦିକ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ଏବଂ କ୍ୱେନଚର୍ କରିଥାଏ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ପୃଥକ ହୋଇଥାଏ, ଯାହାଫଳରେ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ମନିଟରିଂ ସିଷ୍ଟମ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସଙ୍କେତ ଗ୍ରହଣ କରିପାରିବ, ଅର୍ଥାତ୍ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଥର ଏକ ଡିଏନ୍ଏ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ ବ ified ଼ିବ, ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସିଗନାଲ୍ ସହିତ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସଙ୍କେତ ସୃଷ୍ଟି ହେବ |

2) SYBR ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗ:

PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀରେ, SYBR ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗର ଏକ ଅତିରିକ୍ତ ଯୋଗ କରାଯାଇଥାଏ |SYBR ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗ DNA ଡବଲ୍-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡରେ ଅଣ-ବିଶେଷ ଭାବରେ ଅନ୍ତର୍ଭୂକ୍ତ ହେବା ପରେ, ଏହା ଏକ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ ନିର୍ଗତ କରେ |SYBR ରଙ୍ଗର ଅଣୁ ଯାହା ଶୃଙ୍ଖଳରେ ଅନ୍ତର୍ଭୂକ୍ତ ହୋଇନଥାଏ, କ any ଣସି ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ ନିର୍ଗତ କରିବ ନାହିଁ, ଯାହାଦ୍ୱାରା ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ ସୁନିଶ୍ଚିତ ହେବ PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡ଼ିକର ବୃଦ୍ଧି PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡ଼ିକର ବୃଦ୍ଧି ସହିତ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ସିଙ୍କ୍ରୋନାଇଜ୍ ହେବ |SYBR କେବଳ ଦ୍ୱିଗୁଣିତ DNA ସହିତ ବାନ୍ଧେ, ତେଣୁ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କି ନୁହେଁ ତାହା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ତରଳିବା ବକ୍ର ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |

3) ମଲିକୁଲାର୍ ବିକନ୍:

ଏହା ଏକ ଷ୍ଟେମ୍-ଲୁପ୍ ଡବଲ୍-ଲେବଲ୍ ଅଲିଗ୍ନୁକ୍ଲାଏଟାଇଡ୍ ପ୍ରୋବ ଯାହା 5 ଏବଂ 3 ଶେଷରେ ପ୍ରାୟ 8 ଟି ବେସର ଏକ ହେୟାରପିନ ଗଠନ କରିଥାଏ |ଉଭୟ ମୁଣ୍ଡରେ ଥିବା ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ କ୍ରମଗୁଡ଼ିକ ପରସ୍ପର ସହିତ ଯୋଡି ହୋଇ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ଏବଂ ଲିଭାଇବା ଗୋଷ୍ଠୀକୁ କଠିନ କରିଦିଏ |ବନ୍ଦ, କ flu ଣସି ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଉତ୍ପନ୍ନ ହେବ ନାହିଁ |

PCR ଉତ୍ପାଦ ସୃଷ୍ଟି ହେବା ପରେ, ଆନ୍ନାଲିଂ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ, ମଲିକୁଲାର ବିକନର ମଧ୍ୟଭାଗ ଅଂଶ ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ DNA କ୍ରମ ସହିତ ଯୋଡି ହୋଇଯାଏ ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଜିନ୍ କ୍ଲୋଚର୍ ଜିନ୍ ଠାରୁ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ପୃଥକ ହୋଇଥାଏ |

ଦ୍ୱିତୀୟ ପି generation ଼ିର PCR ର ମୁଖ୍ୟ ଅସୁବିଧା:

ସମ୍ବେଦନଶୀଳତାର ଅଭାବ ରହିଛି, ଏବଂ କମ୍ କପି ନମୁନାଗୁଡିକର ଚିହ୍ନଟ ଭୁଲ ଅଟେ |

ପୃଷ୍ଠଭୂମି ମୂଲ୍ୟର ପ୍ରଭାବ ଅଛି, ଏବଂ ଫଳାଫଳ ଏଥିରେ ବାଧା ସୃଷ୍ଟି କରିଥାଏ |

ଯେତେବେଳେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀରେ PCR ଇନହିବିଟର ଥାଏ, ଚିହ୍ନଟ ଫଳାଫଳ ବାଧାପ୍ରାପ୍ତ ହେବାର ସମ୍ଭାବନା ଥାଏ |

ତୃତୀୟ ପି generation ଼ିର ଡିଜିଟାଲ୍ PCR |

ଡିଜିଟାଲ୍ PCR (DigitalPCR, dPCR, Dig-PCR) ଶେଷ-ପଏଣ୍ଟ ଚିହ୍ନଟ ମାଧ୍ୟମରେ ଲକ୍ଷ୍ୟ କ୍ରମର କପି ସଂଖ୍ୟା ଗଣନା କରେ, ଏବଂ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଏବଂ ମାନକ ବକ୍ର ବ୍ୟବହାର ନକରି ସଠିକ୍ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିମାଣିକ ଚିହ୍ନଟ କରିପାରିବ |

ଡିଜିଟାଲ୍ PCR ଶେଷ-ପଏଣ୍ଟ ଚିହ୍ନଟ ବ୍ୟବହାର କରେ ଏବଂ Ct ମୂଲ୍ୟ (ଚକ୍ର ସୀମା) ଉପରେ ନିର୍ଭର କରେ ନାହିଁ, ତେଣୁ ଡିଜିଟାଲ୍ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବିସ୍ତାର ଦକ୍ଷତା ଦ୍ୱାରା କମ୍ ପ୍ରଭାବିତ ହୁଏ, ଏବଂ ଉଚ୍ଚ ସଠିକତା ଏବଂ ପୁନ oduc ପ୍ରବୃତ୍ତି ସହିତ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ପ୍ରତି ସହନଶୀଳତା ଉନ୍ନତ ହୁଏ |

ଉଚ୍ଚ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଏବଂ ଉଚ୍ଚ ସଠିକତାର ବ characteristics ଶିଷ୍ଟ୍ୟ ହେତୁ, ଏହା PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ଦ୍ୱାରା ସହଜରେ ବାଧାପ୍ରାପ୍ତ ହୁଏ ନାହିଁ, ଏବଂ ଏହା ମାନକ ଉତ୍ପାଦ ବିନା ପ୍ରକୃତ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିମାଣ ହାସଲ କରିପାରିବ, ଯାହା ଏକ ଅନୁସନ୍ଧାନ ଏବଂ ପ୍ରୟୋଗ ହଟସ୍ପଟରେ ପରିଣତ ହୋଇଛି |

ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ୟୁନିଟ୍ ର ବିଭିନ୍ନ ଫର୍ମ ଅନୁଯାୟୀ, ଏହାକୁ ତିନୋଟି ମୁଖ୍ୟ ପ୍ରକାରରେ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇପାରେ: ମାଇକ୍ରୋଫ୍ଲାଇଡିକ୍, ଚିପ୍ ଏବଂ ଡ୍ରପଲେଟ୍ ସିଷ୍ଟମ୍ |

1) ମାଇକ୍ରୋଫ୍ଲାଇଡିକ୍ ଡିଜିଟାଲ୍ PCR, mdPCR:

ମାଇକ୍ରୋଫ୍ଲାଇଡିକ୍ ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ଉପରେ ଆଧାର କରି, ଡିଏନ୍ଏ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଅଲଗା ହୋଇଛି |ମାଇକ୍ରୋଫ୍ଲଏଡିକ୍ ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ନମୁନା ନାନୋ-ଅପଗ୍ରେଡ୍ କିମ୍ବା ଛୋଟ ବୁନ୍ଦା ଉତ୍ପାଦନକୁ ହୃଦୟଙ୍ଗମ କରିପାରିବ, କିନ୍ତୁ ବୁନ୍ଦା ଏକ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର ଆଡର୍ସପସନ୍ ପଦ୍ଧତି ଆବଶ୍ୟକ କରେ ଏବଂ ତା’ପରେ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ ସହିତ ମିଳିତ ହୁଏ |ଅନ୍ୟ ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକ ବଦଳାଇବା ଦ୍ୱାରା mdPCR ଧୀରେ ଧୀରେ ଗ୍ରହଣ କରାଯାଇଛି |

2) ଡ୍ରପଲେଟ୍-ଆଧାରିତ ଡିଜିଟାଲ୍ PCR, ddPCR:

ନମୁନାକୁ ଡ୍ରପଲେଟରେ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ପାଇଁ ୱାଟର-ଇନ୍-ତେଲ ଡ୍ରପଲେଟ୍ ଉତ୍ପାଦନ ପ୍ରଯୁକ୍ତିକୁ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ ଏବଂ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଅଣୁଗୁଡିକ ଧାରଣ କରିଥିବା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀକୁ ହଜାରେ ନାନୋସ୍କାଲ୍ ବୁନ୍ଦା ମଧ୍ୟରେ ବିଭକ୍ତ କରନ୍ତୁ, ଯାହାର ପ୍ରତ୍ୟେକଟି ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଅଣୁକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବାକୁ ଧାରଣ କରେ ନାହିଁ କିମ୍ବା ପରୀକ୍ଷଣ କରିବାକୁ ଗୋଟିଏରୁ ଅନେକ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଅଣୁ ଧାରଣ କରିଥାଏ |

3) ଚିପ୍ ଆଧାରିତ ଡିଜିଟାଲ୍ PCR, cdPCR:

ସିଲିକନ୍ ୱାଫର୍ କିମ୍ବା କ୍ୱାର୍ଟଜ୍ ଗ୍ଲାସରେ ଅନେକ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବ୍ ଏବଂ ମାଇକ୍ରୋକ୍ୟାଭିଟି ଖୋଦନ କରିବା ପାଇଁ ଇଣ୍ଟିଗ୍ରେଟେଡ୍ ଫ୍ଲୁଇଡ୍ ପାଥ୍ୱେ ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭଲଭ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ସମାଧାନର ପ୍ରବାହକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ନମୁନା PCR ତରଳ ପଦାର୍ଥକୁ ସମାନ ଆକାରର ନାନୋମିଟରରେ ବିଭକ୍ତ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିମାଣ ହାସଲ କରିବାକୁ ଡିଜିଟାଲ୍ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ |

ତୃତୀୟ ପି generation ଼ିର PCR ର ମୁଖ୍ୟ ଅସୁବିଧା:

ଯନ୍ତ୍ରପାତି ଏବଂ ରେଜେଣ୍ଟଗୁଡିକ ମହଙ୍ଗା |

ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଗୁଣବତ୍ତା ଆବଶ୍ୟକତା ଅଧିକ |ଯଦି ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ପରିମାଣ ମାଇକ୍ରୋ ସିଷ୍ଟମ୍ ପରିମାଣକୁ ଅତିକ୍ରମ କରେ, ତେବେ ପରିମାଣ କରିବା ଅସମ୍ଭବ ହେବ, ଏବଂ ଯଦି ଏହା ବହୁତ ଛୋଟ, ପରିମାଣ ସଠିକତା ହ୍ରାସ ପାଇବ |

ଯେତେବେଳେ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବର୍ଦ୍ଧନ ଥାଏ ସେତେବେଳେ ମିଥ୍ୟା ପଜିଟିଭ୍ ମଧ୍ୟ ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଇପାରେ |