Ⅰ. ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀର ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ବୃଦ୍ଧି କରନ୍ତୁ:

1. ପୃଥକ ଉଚ୍ଚ-ଉଚ୍ଚତା RNA:

ସଫଳ cDNA ସିନ୍ଥେସିସ୍ ଉଚ୍ଚ-ଉଚ୍ଚତା RNA ରୁ ଆସିଥାଏ |ଉଚ୍ଚ-କ୍ୱାଲିଟି RNA ଅତିକମରେ ସମୁଦାୟ ଅଧିକ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ଉଚିତ୍ ଏବଂ ଏଥିରେ ଇନିବିବିଟର ନାହିଁ ଯାହା ରେକର୍ଡିଂ ଏନଜାଇମ୍ ଧାରଣ କରେ ନାହିଁ, ଯେପରିକି EDTA କିମ୍ବା SDS |RNA ର ଗୁଣବତ୍ତା କ୍ରମ ସୂଚନାର ସର୍ବାଧିକ ମୂଲ୍ୟ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରେ ଯାହାକୁ ଆପଣ cDNA ରେ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ କରିପାରିବେ |ସାଧାରଣ RNA ଶୁଦ୍ଧକରଣ ପଦ୍ଧତି ହେଉଛି ଆଇସୋକିଆନେଟ୍ / ଏସିଡୋଫେନୋଲ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବାର ଏକ ପଦକ୍ଷେପ |RNase ର ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ, RNase ରେ ଭରପୂର ନମୁନାରୁ ପୃଥକ RNA (ଯେପରିକି ଅଗ୍ନାଶୟ) ଉଚ୍ଚମାନର RNA ସଂରକ୍ଷଣ କରିବା ପାଇଁ ଫର୍ମାଲଡିହାଇଡ୍ ସଂରକ୍ଷଣ ଆବଶ୍ୟକ କରେ, ଯାହାକି ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ସଂରକ୍ଷଣ ପାଇଁ ଅଧିକ |ମୂଷା ଯକୃତରୁ ବାହାର କରାଯାଇଥିବା RNA ମ ically ଳିକ ଭାବରେ ଏକ ସପ୍ତାହ ଜଳରେ ସଂରକ୍ଷଣ ପରେ ଖରାପ ହୋଇଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ମୂଷା କଫରୁ ବାହାର କରାଯାଇଥିବା RNA ତିନି ବର୍ଷ ପାଣିରେ ରଖିବା ପରେ ସ୍ଥିର ରହିଲା |ଏହା ସହିତ, 4kb ରୁ ବଡ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଛୋଟ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଅପେକ୍ଷା RNase ଅବକ୍ଷୟକୁ ଚିହ୍ନିବା ପାଇଁ ଅଧିକ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ |ଷ୍ଟୋରେଜ୍ RNA ନମୁନାର ସ୍ଥିରତା ବ order ାଇବାକୁ, RNA ଆୟନର ଏକ ମିଥାଲମାମାଇନ୍ରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ ହୋଇପାରେ ଏବଂ -70 ° C ଗଚ୍ଛିତ ହୁଏ |RNA ସଂରକ୍ଷଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ଥାଇଲାଇଡରେ ଏକ ବିବିଧ ବସ୍ତୁ ଧାରଣ କରିବା ଉଚିତ ନୁହେଁ ଯାହା RNA କୁ ଖରାପ କରିଥାଏ |ଅଗ୍ନାଶୟରୁ ଉତ୍ପନ୍ନ RNA, ଅନ୍ତତ least ପକ୍ଷେ ଏକ ବର୍ଷ ପାଇଁ ମିଥାଲମାମାଇନ୍ରେ ସଞ୍ଚୟ ହୋଇପାରିବ |ଯେତେବେଳେ ଆପଣ RNA ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପ୍ରସ୍ତୁତ, ଆପଣ RNA କୁ ପ୍ରବାହିତ କରିବା ପାଇଁ ନିମ୍ନଲିଖିତ ପଦ୍ଧତିଗୁଡିକ ବ୍ୟବହାର କରିପାରିବେ: NaCl କୁ 0.2 ମିଟରରେ ଏବଂ ଇଥାନଲ୍ର 4 ଗୁଣରେ ମିଶାନ୍ତୁ, ରୁମର ତାପମାତ୍ରା 3-5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ରଖନ୍ତୁ, ଏବଂ 10,000 × g ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗାଲ୍ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ |

2. RNaseH କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ (RNaseH-) ବିନା ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ ：

ସିଡିଏନ୍ଏ ସିନ୍ଥେସିସ୍ ର ଲମ୍ବ ଏବଂ ଅମଳ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ RNase ଇନହିବିଟରଗୁଡ଼ିକ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଯୋଗ କରାଯାଇଥାଏ |ପ୍ରଥମ ଚେନ୍ ସିନ୍ଥେସିସ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ବଫର୍ମାନଙ୍କ ଉପସ୍ଥିତିରେ ଏବଂ DTT ପରି ଏଜେଣ୍ଟଗୁଡିକ ହ୍ରାସ କରିବାରେ RNase ଇନହିବିଟର ଯୋଗ କରାଯାଇଥାଏ କାରଣ ପ୍ରି-ସିଡିଏନ୍ଏ ସିନ୍ଥେସିସ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟା ପ୍ରତିବନ୍ଧକକୁ ଦର୍ଶାଏ, ଯାହା ଦ୍ R ାରା RNA କୁ ଅବକ୍ଷୟ କରୁଥିବା ବନ୍ଧିତ RNases ମୁକ୍ତ ହୁଏ |ପ୍ରୋଟିନ୍ RNase ଇନହିବିଟର କେବଳ RNase A, B, C ଦ୍ R ାରା RNA ର ଅବକ୍ଷୟକୁ ରୋକିଥାଏ, ଏବଂ ଚର୍ମରେ ଥିବା RNases କୁ ପ୍ରତିରୋଧ କରେ ନାହିଁ, ତେଣୁ ଏହି ଇନହିବିଟର ବ୍ୟବହାର ସତ୍ତ୍ୱେ ଆଙ୍ଗୁଠିରୁ RNases ପ୍ରବେଶ ନକରିବାକୁ ଧ୍ୟାନ ଦେବା ଉଚିତ୍ |

ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ RNA ର cDNA ରେ ରୂପାନ୍ତର କରିଥାଏ |ଉଭୟ M-MLV ଏବଂ AMV ର ନିଜସ୍ୱ ପଲିମେରେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ବ୍ୟତୀତ ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ RNaseH କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଅଛି |RNaseH କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ, RNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଏବଂ DNA ପ୍ରାଇମର୍ କିମ୍ବା ସିଡିଏନ୍ଏ ଏକ୍ସଟେନ୍ସନ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ ମଧ୍ୟରେ ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ହେଟେରୋଜାଇଗସ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ ପାଇଁ ପଲିମେରେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ସହିତ ପ୍ରତିଦ୍ୱନ୍ଦ୍ୱିତା କରେ, ଏବଂ RNA କୁ ଡିଏନ୍ଏ କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସରେ ଖରାପ କରେ |RNaseH କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଦ୍ୱାରା ଖରାପ ହୋଇଥିବା RNA ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକ ଆଉ cDNA ସିନ୍ଥେସିସ୍ ପାଇଁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ, cDNA ସିନ୍ଥେସିସ୍ ର ଅମଳ ଏବଂ ଦ length ର୍ଘ୍ୟ ହ୍ରାସ କରେ |ଏହିପରି, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ର RNaseH କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ହଟାଇବା କିମ୍ବା ବହୁ ମାତ୍ରାରେ ହ୍ରାସ କରିବା ବହୁତ ଲାଭଦାୟକ ହେବ |

ସୁପରସ୍କ୍ରିପ୍ଟ Ⅱ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପେଟେଜ୍, RNaseH ର MMLV ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ଏବଂ ଥର୍ମୋସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍, RNaseH ର AMV- MMLV ଏବଂ AMV ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ ଦ length ର୍ଘ୍ୟ cDNA ଉତ୍ପାଦନ କଲା |ସିଡିଏନ୍ଏସ୍ ସିନ୍ଥାଇଜଡ୍ ପରିମାଣ ଦ୍ୱାରା RT-PCR ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ପ୍ରଭାବିତ ହୁଏ |ଥର୍ମୋସ୍କ୍ରିପ୍ଟ AMV ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ |RT-PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକର ଆକାର cDNA ସିନ୍ଥାଇଜ୍ କରିବା ପାଇଁ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ କ୍ଷମତା ଦ୍ୱାରା ସୀମିତ, ବିଶେଷତ larger ବଡ଼ Cdnas କ୍ଲୋନିଂ କରିବା ସମୟରେ |MMLV ତୁଳନାରେ, ସୁପରସ୍କ୍ରିପ୍ ଲମ୍ବା RT-PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକର ଅମଳକୁ ଯଥେଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି କଲା |RNaseH -'s ର ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ମଧ୍ୟ ତାପଜ ସ୍ଥିରତା ବ increases ାଇଥାଏ, ତେଣୁ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା 37-42 normal ଠାରୁ ଅଧିକ ତାପମାତ୍ରାରେ କରାଯାଇପାରିବ |ପରାମର୍ଶିତ ସିନ୍ଥେସିସ୍ ଅବସ୍ଥାରେ, ଅଲିଗୋ (dT) ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ 10μCi [ଆଲଫା- p] dCTP ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା |ପ୍ରଥମ ଶୃଙ୍ଖଳାର ସମୁଦାୟ ଉତ୍ପାଦନ TCA ବୃଷ୍ଟିପାତ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା |ଆକାର-ସଜାଯାଇଥିବା ଷ୍ଟ୍ରିପ୍ ଅପସାରଣ ଏବଂ ଏକ କ୍ଷାରୀୟ ଆଗରୋଜ୍ ଜେଲରେ ଗଣନା କରି ପୂର୍ଣ୍ଣ ଦ length ର୍ଘ୍ୟ cDNA ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |

3. ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ର ଉତ୍ତାପ ସଂରକ୍ଷଣ ତାପମାତ୍ରା ବୃଦ୍ଧି କରନ୍ତୁ ：

ଅଧିକ ଧାରଣ ତାପମାତ୍ରା RNA ର ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନ ଖୋଲିବାରେ ଏବଂ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ଅମଳ ବୃଦ୍ଧି କରିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରେ |ଅଧିକାଂଶ RNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ପାଇଁ, ବଫର୍ କିମ୍ବା ଲୁଣ ବିନା RNA ଏବଂ ପ୍ରାଇମର୍ କୁ 65 ° C ରେ ରଖିବା ଏବଂ ପରେ ବରଫରେ ଶୀଘ୍ର ଥଣ୍ଡା କରିବା ଦ୍ secondary ିତୀୟ ସଂରଚନାକୁ ଦୂର କରିଥାଏ ଏବଂ ପ୍ରାଇମର୍ଗୁଡ଼ିକୁ ବାନ୍ଧିବାକୁ ଦେଇଥାଏ |ତଥାପି, କିଛି ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକରେ ଥର୍ମାଲ୍ ଡେନାଟରେସନ୍ ପରେ ମଧ୍ୟ ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନ ଅଛି |ଥର୍ମୋସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପେଟେଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଏବଂ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଉନ୍ନତି ପାଇଁ ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରାରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ସ୍ଥାନିତ କରି ଏହି କଠିନ ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକର ବିସ୍ତାର କରାଯାଇପାରିବ |ଉଚ୍ଚ ଧାରଣର ତାପମାତ୍ରା ମଧ୍ୟ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ବ can ାଇପାରେ, ବିଶେଷତ when ଯେତେବେଳେ ଜିନ୍-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଇମର୍ (GSPS) ବ୍ୟବହାର କରି cDNA ସିନ୍ଥେସିସ୍ ସଂପାଦିତ ହୁଏ (ଅଧ୍ୟାୟ 3 ଦେଖନ୍ତୁ) |ଯଦି GSP ବ୍ୟବହାର କରୁଛନ୍ତି, ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଯେ ପ୍ରାଇମରର Tm ମୂଲ୍ୟ ଆଶା କରାଯାଉଥିବା ତାପମାତ୍ରା ସହିତ ସମାନ |60 than ରୁ ଅଧିକ ଅଲିଗୋ (dT) ଏବଂ ରାଣ୍ଡମ ପ୍ରାଇମର୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ ନାହିଁ |60 increasing କୁ ବୃଦ୍ଧି ହେବା ପୂର୍ବରୁ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ରାଣ୍ଡମ୍ ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକ 25 at ରେ ରଖିବା ଆବଶ୍ୟକ |ଉଚ୍ଚ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ତାପମାତ୍ରା ବ୍ୟବହାର କରିବା ସହିତ, RNA / ପ୍ରାଇମର୍ ମିଶ୍ରଣକୁ 65 ℃ denaturing ତାପମାତ୍ରାକୁ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଧାରଣ ତାପମାତ୍ରାକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ କରି ଏବଂ ଏକ ଉତ୍ତପ୍ତ 2 × ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମିଶ୍ରଣ (cDNA ଥର୍ମାଲ୍ ପ୍ରାରମ୍ଭ ସିନ୍ଥେସିସ୍) ଯୋଗ କରି ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଉନ୍ନତ ହୋଇପାରିବ |ଏହି ପଦ୍ଧତି କମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ ଘଟୁଥିବା ଇଣ୍ଟରମୋଲୋକୁଲାର ବେସ୍ ଯୋଡିକୁ ରୋକିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରେ |ଏକ PCR ଯନ୍ତ୍ର ବ୍ୟବହାର କରିବା RT-PCR ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ ହେଉଥିବା ଅନେକ ତାପମାତ୍ରା ସୁଇଚ୍ କୁ ସରଳ କରିଥାଏ |

ଦଶମ ଉତ୍ତାପ ସ୍ଥିର ପଲିମେରେଜ୍ Mg2 + ଏବଂ RNA ପଲିମେରେଜ୍ Mn2 + ଙ୍କ ଉପସ୍ଥିତିରେ DNA ପଲିମେରେଜ୍ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରେ |ଏହା 65 heat ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଉତ୍ତାପ ଧରିପାରେ |ତଥାପି, PCR ସମୟରେ Mn2 + ର ଉପସ୍ଥିତି ବିଶ୍ୱସ୍ତତାକୁ ହ୍ରାସ କରେ, ଯାହାକି ଉଚ୍ଚ ସଠିକତା ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ Tth ପଲିମେରେଜ୍କୁ କମ୍ ଉପଯୁକ୍ତ କରିଥାଏ, ଯେପରିକି cDNA କ୍ଲୋନିଂ |ଏହା ସହିତ, Tth ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ରେ କମ୍ ଦକ୍ଷ, ଯାହା ସମ୍ବେଦନଶୀଳତାକୁ ହ୍ରାସ କରିଥାଏ, ଏବଂ ଯେହେତୁ ଗୋଟିଏ ଏନ୍ଜାଇମ୍ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଏବଂ PCR କାର୍ଯ୍ୟ କରିପାରିବ, ତେଣୁ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ବିନା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରଦୂଷିତ ଜେନୋମିକ୍ DNA ର CDNA ର ବର୍ଦ୍ଧିତ ଉତ୍ପାଦକୁ ପୃଥକ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ |

4. ଯୋଗୀ ଯାହା ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ କୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ

ପ୍ରଥମ ଶୃଙ୍ଖଳା ସିନ୍ଥେସିସ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଗ୍ଲାଇସେରିନ୍ ଏବଂ DMSO ସହିତ ଯୋଗର ଯୋଗ, ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଡବଲ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡର ସ୍ଥିରତାକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରେ ଏବଂ RNA ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନକୁ ଖୋଲିପାରେ |SuperScriptⅡ କିମ୍ବା MMLV ର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପ୍ରଭାବିତ ନକରି 20% ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଗ୍ଲସେରିନ କିମ୍ବା 10% DMSO ଯୋଗ କରାଯାଇପାରିବ |କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ହ୍ରାସ ନକରି AMV 20% ଗ୍ଲାଇସେରୋଲକୁ ମଧ୍ୟ ସହ୍ୟ କରିପାରିବ |ସୁପରସ୍କ୍ରିପ୍ଟ Ⅱ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ RT-PCR ର ସମ୍ବେଦନଶୀଳତାକୁ ବ To ାଇବାକୁ, 10% ଗ୍ଲାଇସେରଲ୍ ଯୋଡି ହୋଇ 45 at ରେ ଇନସୁଲେଟ୍ ହୋଇପାରିବ |ଯଦି ରିଟ୍ରୋଟ୍ରାନ୍ସସ୍କ୍ରିପସନ୍-ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଉତ୍ପାଦର 1/10 PCR ରେ ଯୋଡା ଯାଇଥାଏ, ତେବେ ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଗ୍ଲସେରୋଲର ଏକାଗ୍ରତା 0.4% ଅଟେ, ଯାହା PCR ରୋକିବା ପାଇଁ ଯଥେଷ୍ଟ ନୁହେଁ |

5. RNaseH ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ：

PCR ପୂର୍ବରୁ RNaseH ସହିତ cDNA ସିନ୍ଥେସିସ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ଚିକିତ୍ସା କରି ସମ୍ବେଦନଶୀଳତାକୁ ଉନ୍ନତ କରାଯାଇପାରିବ |କିଛି ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ପାଇଁ, ଏହା ଚିନ୍ତା କରାଯାଏ ଯେ cDNA ସିନ୍ଥେସିସ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଥିବା RNA ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦ୍ରବ୍ୟର ବନ୍ଧନକୁ ରୋକିଥାଏ, ଯେଉଁ କ୍ଷେତ୍ରରେ RNaseH ଚିକିତ୍ସା ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ବ can ାଇପାରେ |ସାଧାରଣତ ,, ଅପେକ୍ଷାକୃତ ଲମ୍ବା ପୂର୍ଣ୍ଣ ଦ length ର୍ଘ୍ୟ ବିଶିଷ୍ଟ cDNA ଟାର୍ଗେଟ୍ ଟେମ୍ପଲେଟର ବିସ୍ତାର ପାଇଁ RNaseH ଚିକିତ୍ସା ଆବଶ୍ୟକ, ଯେପରିକି କମ୍ କପି ସହିତ ଟ୍ୟୁବର୍ସ ସ୍କେରୋସିସ୍ |ଏହି କଠିନ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ପାଇଁ, RNaseH ସୁପରସ୍କ୍ରିପ୍ଟ କିମ୍ବା AMV ଦ୍ୱାରା ସିନ୍ଥାଇଜ୍ ହୋଇଥିବା cDNA ଦ୍ୱାରା ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ସଙ୍କେତକୁ ବ anced ାଇଲା |ଅଧିକାଂଶ RT-PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ, RNaseH ଚିକିତ୍ସା ବ al କଳ୍ପିକ କାରଣ 95 ℃ ଇନସୁଲେଡ୍ PCR ଡେନାଟରେସନ୍ ଷ୍ଟେପ୍ ସାଧାରଣତ R RNA ରୁ DNA ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜ୍ କରେ: DNA କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ |

6. ଅଳ୍ପ ପରିମାଣର RNA ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ ଉନ୍ନତ ପଦ୍ଧତି ：

କେବଳ ଅଳ୍ପ ପରିମାଣର RNA ଉପଲବ୍ଧ ହେଲେ RT-PCR ବିଶେଷ ଆହ୍ .ାନ ଅଟେ |RNA ପୃଥକତା ସମୟରେ ବାହକ ଭାବରେ ଗ୍ଲାଇକୋଜେନର ଯୋଗ ଛୋଟ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକର ଅମଳ ବୃଦ୍ଧି କରିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରେ |ଟ୍ରାଇଜୋଲ ସହିତ ଏକ ସମୟରେ ଏକ RNase ମୁକ୍ତ ଗ୍ଲାଇକୋଜେନ ଯୋଗ କରାଯାଇପାରିବ |ଗ୍ଲାଇକୋଜେନ ଜଳ-ଦ୍ରବଣୀୟ ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ ବୃଷ୍ଟିପାତରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିବା ପାଇଁ RNA ସହିତ ଜଳ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ରହିପାରେ |RNase ମୁକ୍ତ ଗ୍ଲାଇକୋଜେନର ସୁପାରିଶ ହୋଇଥିବା ଏକାଗ୍ରତା 50mg ରୁ କମ୍ ଟିସୁ କିମ୍ବା 106 ସଂସ୍କୃତ କୋଷ ପାଇଁ ନମୁନା ପାଇଁ 250μg / ml ଅଟେ |

ସୁପରସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ବ୍ୟବହାର କରି ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଆସେଟିଲେଟେଡ୍ BSA ର ଯୋଗ, ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ବ increase ାଇପାରେ ଏବଂ ଅଳ୍ପ ପରିମାଣର RNA ପାଇଁ, ସୁପରସ୍କ୍ରିପ୍ଟର ପରିମାଣକୁ ହ୍ରାସ କରିଥାଏ ଏବଂ 40 ୟୁନିଟ୍ RnaseOut ନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ଇନହିବିଟର ଯୋଗ କରିବା ଚିହ୍ନଟ ସ୍ତରରେ ଉନ୍ନତି ଆଣିପାରେ |ଯଦି RNA ପୃଥକତାରେ ଗ୍ଲାଇକୋଜେନ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ତେବେ ସୁପରସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ବ୍ୟବହାର କରି ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ଓଲଟା କରିବା ପାଇଁ BSA କିମ୍ବା RNase ଇନହିବିଟରର ଯୋଗକୁ ସୁପାରିଶ କରାଯାଏ |

Ⅱ. RT-PCR ର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ବୃଦ୍ଧି କରନ୍ତୁ |

1. cNDA ସିନ୍ଥେସିସ୍ ：

ପ୍ରଥମ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ cDNA ସିନ୍ଥେସିସ୍ ଆରମ୍ଭ କରିବା ପାଇଁ ତିନୋଟି ଭିନ୍ନ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ପଦ୍ଧତିର ଆପେକ୍ଷିକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ସିଡିଏନ୍ଏସ୍ ହୋଇଥିବା ପରିମାଣ ଏବଂ ପ୍ରକାରକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିଥାଏ |

ରାଣ୍ଡମ ପ୍ରାଇମର୍ ପଦ୍ଧତି ତିନୋଟି ପଦ୍ଧତିର ସର୍ବନିମ୍ନ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଅଟେ |କ୍ଷୁଦ୍ର, ଆଂଶିକ ଦ length ର୍ଘ୍ୟ cDNA ଉତ୍ପାଦନ କରିବାକୁ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟରେ ଏକାଧିକ ସାଇଟରେ ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକ ଆନ୍ନାଲ୍ କରାଯାଏ |ଏହି ପଦ୍ଧତି ପ୍ରାୟତ secondary ସେକେଣ୍ଡାରୀ ଷ୍ଟ୍ରକଚରାଲ୍ ଅଞ୍ଚଳ ସହିତ RNA ଟେମ୍ପଲେଟରୁ 5 ′ ଟର୍ମିନାଲ୍ କ୍ରମ ଏବଂ cDNA ପାଇବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ ଯାହା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ନକଲ କରିପାରିବ ନାହିଁ |ଦୀର୍ଘତମ cDNA ପାଇବା ପାଇଁ, ପ୍ରତ୍ୟେକ RNA ନମୁନାରେ ପ୍ରାଥମିକତା RNA ସହିତ ଅନୁପାତ ସାମୟିକ ଭାବରେ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |ରାଣ୍ଡମ ପ୍ରାଇମରଗୁଡିକର ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଏକାଗ୍ରତା 20μl ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀରେ 50 ରୁ 250ng ମଧ୍ୟରେ ରହିଥାଏ |କାରଣ ରାଣ୍ଡମ ପ୍ରାଇମର୍ ବ୍ୟବହାର କରି ସମୁଦାୟ RNA ରୁ ସିନ୍ଥାଇଜ୍ ହୋଇଥିବା cDNA ମୁଖ୍ୟତ rib ରାଇବୋସୋମାଲ୍ RNA ଅଟେ, ପଲି (A) + RNA ସାଧାରଣତ the ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ ଚୟନ କରାଯାଇଥାଏ |

ଅନିୟମିତ ପ୍ରାଇମର୍ ଅପେକ୍ଷା ଅଲିଗୋ (dT) ଆରମ୍ଭ ଅଧିକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଅଟେ |ଅଧିକାଂଶ ଇଉକାରିଓଟିକ୍ କୋଷରେ mRNA ର ′ ′ ଶେଷରେ ମିଳୁଥିବା ପଲି (A) ଲାଞ୍ଜ ସହିତ ଏହା ହାଇବ୍ରିଡାଇଜ୍ ହୁଏ |କାରଣ ପଲି (A) + RNA ସମୁଦାୟ RNA ର ପ୍ରାୟ 1% ରୁ 2% ଅଟେ, ଅନିୟମିତ ପ୍ରାଇମର୍ ବ୍ୟବହାର କରାଯିବା ଅପେକ୍ଷା cDNA ର ପରିମାଣ ଏବଂ ଜଟିଳତା ବହୁତ କମ୍ ଅଟେ |ଏହାର ଉଚ୍ଚ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ହେତୁ, ଅଲିଗୋ (dT) ସାଧାରଣତ R RNA ପାଇଁ ପ୍ରାଥମିକ ଅନୁପାତ ଏବଂ ପଲି (A) + ଚୟନ ପାଇଁ ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ୍ ଆବଶ୍ୟକ କରେ ନାହିଁ |20μl ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀରେ 0.5μg ଅଲିଗୋ (dT) ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |oligo (dT) 12-18 ଅଧିକାଂଶ RT-PCR ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ |ଥର୍ମୋସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ଆରଟି- PCR ସିଷ୍ଟମ ଭଲ ଥର୍ମାଲ୍ ସ୍ଥିରତା ହେତୁ ଅଲିଗୋ (dT) 20 ପ୍ରଦାନ କରିଥାଏ ଏବଂ ଅଧିକ ତାପମାତ୍ରା ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ଅଟେ |

ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଷ୍ଟେପ୍ ପାଇଁ ଜିନ୍-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଇମର୍ (GSP) ହେଉଛି ସର୍ବୋତ୍ତମ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଇମର୍ |ଜିଏସପି ହେଉଛି ଏକ ଆଣ୍ଟିସେନ୍ସ ଅଲିଗ୍ନୁକ୍ଲାଏସାଇଡ୍ ଯାହା ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଭାବରେ RNA ଗନ୍ତବ୍ୟସ୍ଥଳ କ୍ରମ ସହିତ ହାଇବ୍ରିଡାଇଜ୍ ହୋଇପାରେ, ରାଣ୍ଡମ୍ ପ୍ରାଇମର୍ କିମ୍ବା ଅଲିଗୋ (dT) ପରି ସମସ୍ତ Rnas କୁ ଆନ୍ନାଲ୍ କରିବା ପରିବର୍ତ୍ତେ |PCR ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ନିୟମଗୁଡ଼ିକ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା GSP ର ଡିଜାଇନ୍ ପାଇଁ ମଧ୍ୟ ପ୍ରଯୁଜ୍ୟ |GSP ସମାନ କ୍ରମ ହୋଇପାରେ, mRNA3 ′ ଶେଷରେ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ପ୍ରାଇମର୍ ଆନ୍ନାଲିଡ୍ ହୋଇପାରେ, କିମ୍ବା GSP ରିଭର୍ସ ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ପ୍ରାଇମର୍ ସହିତ ଡାଉନ୍ଷ୍ଟ୍ରିମ୍ ସହିତ ଆନ୍ନାଲ୍ ହେବା ପାଇଁ ଡିଜାଇନ୍ କରାଯାଇପାରେ |କେତେକ ବର୍ଦ୍ଧିତ ବସ୍ତୁ ପାଇଁ, ସଫଳ RT-PCR ପାଇଁ ଏକରୁ ଅଧିକ ଆଣ୍ଟିସେନ୍ସ ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍ କରିବା ଆବଶ୍ୟକ କାରଣ ଲକ୍ଷ୍ୟ RNA ର ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନ ପ୍ରାଥମିକତାକୁ ବାନ୍ଧିବାରେ ରୋକିପାରେ |20μl ର ପ୍ରଥମ ଶୃଙ୍ଖଳା ସିନ୍ଥେସିସ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀରେ 1pmol ଆଣ୍ଟିସେନ୍ସ GSP ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |

2. ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ର ଉତ୍ତାପ ସଂରକ୍ଷଣ ତାପମାତ୍ରା ବୃଦ୍ଧି କରନ୍ତୁ ：

GSP ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତାର ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଲାଭ ଉଠାଇବାକୁ, ଉଚ୍ଚ ତାପଜ ସ୍ଥିରତା ସହିତ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରାଯିବା ଉଚିତ |ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କଠିନତା ବ to ାଇବା ପାଇଁ ଉତ୍ତାପ-ସ୍ଥିର ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ଅଧିକ ତାପମାତ୍ରାରେ ଇନସୁଲେଟ୍ ହୋଇପାରେ |ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଯଦି ଏକ ଜିଏସପି 55 ° C ରେ ଆନ୍ନାଡ୍ ହୁଏ, ତେବେ AMV କିମ୍ବା M-MLV ବ୍ୟବହାର କରି କମ୍ କଠୋରତା ସହିତ 37 ° C ରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ କରାଗଲେ GSP ର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ ନାହିଁ |ଅବଶ୍ୟ, ସୁପରସ୍କ୍ରିପ୍ ଏବଂ ଥର୍ମୋସ୍କ୍ରିପ୍ଟ 50 ℃ କିମ୍ବା ତଦୁର୍ଦ୍ଧ୍ୱରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରିପାରିବ, ଯାହା ନିମ୍ନ ତାପମାତ୍ରାରେ ଉତ୍ପାଦିତ ଅଜ୍ଞାତ ପଦାର୍ଥକୁ ଦୂର କରିଥାଏ |ସର୍ବାଧିକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ପାଇଁ, RNA / ପ୍ରାଇମର୍ ମିଶ୍ରଣକୁ 65 ℃ ଡେନାଟ୍ରେସନ୍ ତାପମାତ୍ରା ଠାରୁ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଧାରଣ ତାପମାତ୍ରାକୁ ସିଧାସଳଖ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ 2 x ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମିଶ୍ରଣ (cDNA ସିନ୍ଥେସିସ୍ ର ଥର୍ମାଲ୍ ପ୍ରାରମ୍ଭ) ସହିତ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରାଯାଇପାରିବ |ଏହା କମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକ ମଧ୍ୟରେ ମୂଳ ଯୋଡିକୁ ରୋକିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରେ |ଏକ PCR ଯନ୍ତ୍ର ବ୍ୟବହାର କରିବା RT-PCR ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ ହେଉଥିବା ଅନେକ ତାପମାତ୍ରା ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ସରଳ କରିଥାଏ |

3. ଜେନୋମିକ୍ DNA ପ୍ରଦୂଷଣ ହ୍ରାସ କରନ୍ତୁ ：

RT-PCR ସହିତ ଗୋଟିଏ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଅସୁବିଧା ହେଉଛି RNA ଜେନୋମିକ୍ DNA କୁ ଦୂଷିତ କରେ |ଉନ୍ନତ RNA ପୃଥକ ପଦ୍ଧତିର ବ୍ୟବହାର, ଯେପରିକି ଟ୍ରାଇଜୋଲ୍ ରିଜେଣ୍ଟ୍, RNA ପ୍ରସ୍ତୁତିରେ ଜେନୋମିକ୍ DNA ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ହ୍ରାସ କରିଥାଏ |ଜେନୋମିକ୍ ଡିଏନ୍ଏରୁ ଉତ୍ପାଦିତ ଦ୍ରବ୍ୟକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପୂର୍ବରୁ ଦୂଷିତ DNA ଅପସାରଣ କରିବାକୁ RNA କୁ ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଗ୍ରେଡ୍ DnasⅠ ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇପାରିବ |DNaseⅠ ହଜମକୁ ବନ୍ଦ କରିବା ପାଇଁ ନମୁନାଗୁଡିକ 2.0mM EDTA ରେ 65 at ରେ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ରଖାଯାଇଥିଲା |ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରାରେ ଘଟୁଥିବା ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ ଆୟନ ନିର୍ଭରଶୀଳ RNA ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ରୋକିବା ପାଇଁ EDTA ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ ଆୟନକୁ ଚେଲେଟ୍ କରେ |

ଜିନୋମ ଡିଏନ୍ଏ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଉତ୍ପାଦରୁ ବର୍ଦ୍ଧିତ cDNA କୁ ପୃଥକ କରିବାକୁ, ପ୍ରାଇମର୍ ଯାହା ପୃଥକ ଏକ୍ସନ୍ ସହିତ ପୃଥକ ଭାବରେ ଆନ୍ନାଲ୍ ଡିଜାଇନ୍ କରାଯାଇପାରେ |CDNA ରୁ ଉତ୍ପନ୍ନ PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ ଦୂଷିତ ଜେନୋମିକ୍ DNA ରୁ ଉତ୍ପାଦିତ ତୁଳନାରେ ଛୋଟ ହେବ |ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ବିନା ଏକ ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ପରୀକ୍ଷଣ ପ୍ରତ୍ୟେକ RNA ଟେମ୍ପଲେଟରେ ମଧ୍ୟ ଦିଆଯାଏ ଯାହା ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଖଣ୍ଡଟି ଜେନୋମିକ୍ DNA କିମ୍ବା cDNA ରୁ ଅଟେ କି ନାହିଁ ତାହା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଏ |ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଅନୁପସ୍ଥିତିରେ ପ୍ରାପ୍ତ PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ ଜିନୋମରୁ ଉତ୍ପନ୍ନ |

ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଉତ୍ପାଦ |

RT-PCR ସହଜ |^ᵀᴹମୁଁ (ଗୋଟିଏ ଷ୍ଟେପ୍)

-ଏହି ଷ୍ଟେପ୍ କିଟ୍ ସମାନ ଟ୍ୟୁବରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଏବଂ PCR କୁ ସକ୍ଷମ କରିଥାଏ |ଏହା କେବଳ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ RNA, ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ PCR ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ RNase-Free ddH ଯୋଡିବା ଆବଶ୍ୟକ କରେ |₂O.

- RNA ର ପ୍ରକୃତ ସମୟ ପରିମାଣିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଶୀଘ୍ର ଏବଂ ସଠିକ୍ ଭାବରେ କରାଯାଇପାରିବ |

-କିଟ୍ ଏକ ଅନନ୍ୟ ଫରେଜେନ୍ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ରିଜେଣ୍ଟ୍ ଏବଂ ଫୋରେଗେନ୍ ହଟଷ୍ଟାର୍ ଟ୍ୟାକ୍ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ ନିଆରା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ ସହିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ବର୍ଦ୍ଧନ ଦକ୍ଷତା ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତାକୁ ଉନ୍ନତ କରିଥାଏ |

- ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ଅଧିକ ଚିହ୍ନଟ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା, ଶକ୍ତିଶାଳୀ ତାପଜ ସ୍ଥିରତା ଏବଂ ଉତ୍ତମ ସହନଶୀଳତା କରିଥାଏ |

RT ସହଜ II (GDNase ସହିତ) GDNase ସହିତ ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ପାଇଁ ପ୍ରଥମ-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ CDNA ସିନ୍ଥେସିସ୍ ପାଇଁ ମାଷ୍ଟର ପ୍ରେମିକ୍ସ |

- gDNA ଅପସାରଣ କରିବାର ଯଥେଷ୍ଟ କ୍ଷମତା, ଯାହା ଟେମ୍ପଲେଟରେ gDNA କୁ 2 ମିନିଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ଅପସାରଣ କରିପାରିବ |

-ପ୍ରକାର ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ସିଷ୍ଟମ୍, ପ୍ରଥମ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ cDNA ର ସିନ୍ଥେସିସ୍ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ କରିବାକୁ ମାତ୍ର 15 ମିନିଟ୍ ସମୟ ଲାଗେ |

-କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକ: ଉଚ୍ଚ ଜିସି ବିଷୟବସ୍ତୁ ଏବଂ ଜଟିଳ ଦଳୀୟ ସଂରଚନା ସହିତ ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକ ମଧ୍ୟ ଉଚ୍ଚ ଦକ୍ଷତା ସହିତ ଓଲଟା ହୋଇପାରେ |

ଉଚ୍ଚ-ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ସିଷ୍ଟମ୍, pg- ସ୍ତରୀୟ ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକ ମଧ୍ୟ ଉଚ୍ଚମାନର cDNA ପାଇପାରିବେ |

- ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ସିଷ୍ଟମରେ ଉଚ୍ଚ ତାପଜ ସ୍ଥିରତା ଅଛି, ସର୍ବୋତ୍କୃଷ୍ଟ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ତାପମାତ୍ରା 42 and, ଏବଂ ଏଥିରେ 50 at ରେ ଭଲ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ଅଛି |