1. ମ Basic ଳିକ ଜ୍ଞାନ (ଯଦି ଆପଣ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଅଂଶ ଦେଖିବାକୁ ଚାହାଁନ୍ତି, ଦୟାକରି ଦ୍ୱିତୀୟ ଭାଗକୁ ସିଧାସଳଖ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ)
ପାରମ୍ପାରିକ PCR ର ଏକ ଡେରିଭେଟିଭ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଭାବରେ, ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ମୁଖ୍ୟତ the ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସିଗ୍ନାଲ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନ ମାଧ୍ୟମରେ ପ୍ରକୃତ ସମୟରେ PCR ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ପ୍ରତ୍ୟେକ ଚକ୍ରରେ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଉତ୍ପାଦର ପରିମାଣ ଉପରେ ନଜର ରଖେ ଏବଂ ସିଟି ମୂଲ୍ୟ ଏବଂ ମାନକ ବକ୍ର ମଧ୍ୟରେ ସମ୍ପର୍କ ମାଧ୍ୟମରେ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଟେମ୍ପଲେଟକୁ ପରିମାଣିକ ଭାବରେ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରେ |
RT-PCR ର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ତଥ୍ୟ ହେଉଛି |ବେସ୍ ଲାଇନ୍ |, ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସୀମାଏବଂCt ମୂଲ୍ୟ
ଆଧାର: | ତୃତୀୟ -15 ଚକ୍ରର ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ମୂଲ୍ୟ ହେଉଛି ବେସ୍ ଲାଇନ୍ (ବେସ୍ ଲାଇନ୍), ଯାହା ମାପର ବେଳେବେଳେ ତ୍ରୁଟି ହେତୁ ହୋଇଥାଏ | |
ଥ୍ରେସହୋଲ୍ଡ (ଥ୍ରେସହୋଲ୍ଡ): | ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ରର ସୂକ୍ଷ୍ମ ଅଭିବୃଦ୍ଧି ଅଞ୍ଚଳରେ ଏକ ଉପଯୁକ୍ତ ସ୍ଥିତିରେ ନିର୍ମିତ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଚିହ୍ନଟ ସୀମାକୁ ସୂଚିତ କରେ, ସାଧାରଣତ the ବେସ୍ ଲାଇନ୍ ର ମାନକ ବିଘ୍ନର 10 ଗୁଣ | |
CT ମୂଲ୍ୟ: | ଏହା ହେଉଛି PCR ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା ଯେତେବେଳେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଟ୍ୟୁବରେ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ମୂଲ୍ୟ ସୀମାକୁ ପହଞ୍ଚେ | ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ପରିମାଣ ସହିତ Ct ମୂଲ୍ୟ ବିପରୀତ ଅନୁପଯୁକ୍ତ | |
RT-PCR ପାଇଁ ସାଧାରଣ ଲେବଲ୍ ପଦ୍ଧତି:
ପଦ୍ଧତି | ସୁବିଧା | ଅଭାବ | ପ୍ରୟୋଗର ପରିସର | |
SYBR GreenⅠ | ବ୍ୟାପକ ପ୍ରୟୋଗତା, ସମ୍ବେଦନଶୀଳ, ଶସ୍ତା ଏବଂ ସୁବିଧାଜନକ | | ପ୍ରାଥମିକ ଆବଶ୍ୟକତା ଅଧିକ, ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ପ୍ରତି ପ୍ରବୃତ୍ତ | | ଏହା ବିଭିନ୍ନ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ର ପରିମାଣିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ, ଜିନ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ଉପରେ ଗବେଷଣା ଏବଂ ଟ୍ରାନ୍ସଜେନିକ୍ ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ପ୍ରାଣୀ ଏବଂ ଉଦ୍ଭିଦ ଉପରେ ଗବେଷଣା ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ | |
TaqMan | ଭଲ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଏବଂ ଉଚ୍ଚ ପୁନରାବୃତ୍ତି | | ମୂଲ୍ୟ ଅଧିକ ଏବଂ କେବଳ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଲକ୍ଷ୍ୟ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ | | ପାଥୋଜେନ ଚିହ୍ନଟ, drug ଷଧ ପ୍ରତିରୋଧ ଜିନ୍ ଅନୁସନ୍ଧାନ, drug ଷଧର ଦକ୍ଷତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ, ଜେନେଟିକ୍ ରୋଗର ନିରାକରଣ | |
ମଲିକୁଲାର ବିକନ୍ | | ଉଚ୍ଚ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା, ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ, ନିମ୍ନ ପୃଷ୍ଠଭୂମି | | ମୂଲ୍ୟ ଅଧିକ, ଏହା କେବଳ ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ, ଡିଜାଇନ୍ କଷ୍ଟସାଧ୍ୟ ଏବଂ ମୂଲ୍ୟ ଅଧିକ | | ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଜିନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ, SNP ବିଶ୍ଳେଷଣ | |
2. ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପଦକ୍ଷେପ |
2.1 ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଗୋଷ୍ଠୀ ବିଷୟରେ |- ଗୋଷ୍ଠୀରେ ଏକାଧିକ କୂଅ ରହିବା ଆବଶ୍ୟକ, ଏବଂ ଜ bi ବିକ ପୁନରାବୃତ୍ତି ହେବା ଜରୁରୀ |
① | ଖାଲି ନିୟନ୍ତ୍ରଣ | | ପରୀକ୍ଷଣରେ କୋଷ ବୃଦ୍ଧି ସ୍ଥିତିକୁ ଚିହ୍ନିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ | |
② | ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ siRNA (ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ siRNA କ୍ରମ) | RNAi କାର୍ଯ୍ୟର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରନ୍ତୁ |siRNA 200nM ର ଏକାଗ୍ରତାରେ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଚାପ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ | |
③ | ଟ୍ରାନ୍ସଫେକ୍ସନ୍ ରିଜେଣ୍ଟ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ | | କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ଟ୍ରାନ୍ସଫେକ୍ସନ୍ ରିଜେଣ୍ଟର ବିଷାକ୍ତତା କିମ୍ବା ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜିନ୍ ର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ଉପରେ ପ୍ରଭାବକୁ ବାଦ ଦିଅନ୍ତୁ | |
④ | ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜିନ୍ ବିରୁଦ୍ଧରେ siRNA | | ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତିକୁ ଧକ୍କା ଦିଅ | |
⑤ (ବ al କଳ୍ପିକ) | ସକରାତ୍ମକ siRNA | | ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପ୍ରଣାଳୀ ଏବଂ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ସମସ୍ୟାର ସମାଧାନ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ | |
⑥ (ବ al କଳ୍ପିକ) | ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ siRNA | | ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ ସହିତ କୋଷ ସଂକ୍ରମଣର ଦକ୍ଷତା ପାଳନ କରାଯାଇପାରେ | |
2.2 ପ୍ରାଥମିକ ଡିଜାଇନ୍ ର ନୀତିଗୁଡିକ |
ବର୍ଦ୍ଧିତ ଖଣ୍ଡ ଆକାର | | 100-150bp ରେ ପସନ୍ଦ | |
ପ୍ରାଥମିକ ଦ Length ର୍ଘ୍ୟ | | 18-25bp |
GC ବିଷୟବସ୍ତୁ | | 30% -70%, ବିଶେଷତ 45 45% -55% | |
Tm ମୂଲ୍ୟ | 58-60 ℃ |
କ୍ରମ | | କ୍ରମାଗତ T / C ଠାରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ;A / G କ୍ରମାଗତ | |
3 ଶେଷ କ୍ରମ | | GC ଧନୀ କିମ୍ବା AT ଧନୀରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ;ଟର୍ମିନାଲ୍ ବେସ୍ ବିଶେଷତ G G କିମ୍ବା C ଅଟେ;T କୁ ଏଡ଼ାଇବା ଭଲ | |
ସଂପନ୍ନତା | ପ୍ରାଇମର୍ ମଧ୍ୟରେ କିମ୍ବା ଦୁଇଟି ପ୍ରାଇମର୍ ମଧ୍ୟରେ 3 ରୁ ଅଧିକ ବେସର ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ କ୍ରମରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ | |
ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା | ପ୍ରାଥମିକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ ବ୍ଲାଷ୍ଟ ସନ୍ଧାନ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ | |
SiRNA ପ୍ରଜାତି-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ, ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରଜାତିର କ୍ରମ ଭିନ୍ନ ହେବ |
SiRNA ଫ୍ରିଜ୍-ଶୁଖାଯାଇଥିବା ପାଉଡରରେ ପ୍ୟାକେଜ୍ ହୋଇଛି, ଯାହା ରୁମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ 2-4 ସପ୍ତାହ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ସ୍ଥିର ଭାବରେ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇପାରିବ |
3.3 ସାଧନ କିମ୍ବା ପୁନ ag ଯାହାକି ଆଗରୁ ପ୍ରସ୍ତୁତ ହେବା ଆବଶ୍ୟକ |
ପ୍ରାଥମିକ (ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ସନ୍ଦର୍ଭ) | ଆଗକୁ ଏବଂ ଓଲଟା ଦୁଇଟି ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରି | |
ପ୍ରାଥମିକ (ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜିନ୍) | ଆଗକୁ ଏବଂ ଓଲଟା ଦୁଇଟି ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରି | |
ଟାର୍ଗେଟ୍ ସି RNA (3 ଷ୍ଟ୍ରିପ୍) | ସାଧାରଣତ ,, କମ୍ପାନୀ 3 ଟି ଷ୍ଟ୍ରିପ୍ ସିନ୍ଥାଇଜ୍ କରିବ, ଏବଂ ତାପରେ RT-PCR ଦ୍ୱାରା ତିନୋଟି ମଧ୍ୟରୁ ଗୋଟିଏ ବାଛିବ | |
ଟ୍ରାନ୍ସଫେକ୍ସନ୍ କିଟ୍ | | Lipo2000 ଇତ୍ୟାଦି | |
RNA ରାପିଡ୍ ଏକ୍ସଟ୍ରାକସନ୍ କିଟ୍ | | ଟ୍ରାନ୍ସଫେକ୍ସନ୍ ପରେ RNA ନିଷ୍କାସନ ପାଇଁ | |
ଦ୍ରୁତ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ କିଟ୍ | | cDNA ସିନ୍ଥେସିସ୍ ପାଇଁ | |
PCR ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ କିଟ୍ | | 2 × ସୁପର SYBR ସବୁଜ | qPCR ମାଷ୍ଟର ମିକ୍ସ | |
2.4 ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପଦକ୍ଷେପଗୁଡ଼ିକରେ ଧ୍ୟାନ ଦେବା ଆବଶ୍ୟକ କରୁଥିବା ବିଷୟଗୁଡ଼ିକ ବିଷୟରେ:
①siRNA ସଂକ୍ରମଣ ପ୍ରକ୍ରିୟା |
1. ପ ingingে ଟିଂ ପାଇଁ, ଆପଣ 24-କୂଅ ପ୍ଲେଟ୍, 12-କୂଅ ପ୍ଲେଟ୍ କିମ୍ବା 6-କୂଅ ପ୍ଲେଟ୍ (24-କୂଅ ପ୍ଲେଟର ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ ପ୍ରସ୍ତାବିତ ହାରାହାରି RNA ଏକାଗ୍ରତା ପ୍ରାୟ 100-300 ng / uL) ବାଛିପାରିବେ, ଏବଂ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ସର୍ବୋଚ୍ଚ ସଂକ୍ରମଣ ଘନତା 60% -80% କିମ୍ବା ଅଧିକ |
2. ଟ୍ରାନ୍ସଫେକ୍ସନ୍ ଷ୍ଟେପ୍ ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଆବଶ୍ୟକତା ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ ଅନୁଯାୟୀ କଠୋର ଅଟେ |
3. ଟ୍ରାନ୍ସଫେକ୍ସନ୍ ପରେ, mRNA ଚିହ୍ନଟ (RT-PCR) କିମ୍ବା 48-96 ଘଣ୍ଟା ମଧ୍ୟରେ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ 24-72 ଘଣ୍ଟା ମଧ୍ୟରେ ନମୁନା ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇପାରିବ |
② RNA ନିଷ୍କାସନ ପ୍ରକ୍ରିୟା |
1. ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମ୍ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ରୋକନ୍ତୁ |ଏଥିରେ ମୁଖ୍ୟତ mas ମାସ୍କ ଏବଂ ଗ୍ଲୋଭସ୍ ପିନ୍ଧିବା ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ;ନିର୍ଜଳ ପାଇପେଟ୍ ଟିପ୍ସ ଏବଂ ଇପି ଟ୍ୟୁବ୍ ବ୍ୟବହାର କରି;ପରୀକ୍ଷଣରେ ବ୍ୟବହୃତ ଜଳ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ RNase ମୁକ୍ତ ଅଟେ |
2. ଶୀଘ୍ର ନିଷ୍କାସନ କିଟ୍ ରେ ପରାମର୍ଶ ଅନୁଯାୟୀ ଦୁଇଥର କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି, ଯାହା ପ୍ରକୃତରେ ଶୁଦ୍ଧତା ଏବଂ ଅମଳରେ ଉନ୍ନତି ଆଣିବ |
3. ବର୍ଜ୍ୟ ତରଳ RNA ସ୍ତମ୍ଭକୁ ସ୍ପର୍ଶ କରିବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ |
③ RNA ପରିମାଣ
RNA ବାହାର କରାଯିବା ପରେ, ଏହାକୁ ସିଧାସଳଖ ନାନୋଡ୍ରପ୍ ସହିତ ପରିମାଣ କରାଯାଇପାରିବ ଏବଂ ସର୍ବନିମ୍ନ ପଠନ 10ng / ul ପରି କମ୍ ହୋଇପାରେ |
ଓଂ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟା |
1. RT-qPCR ର ଉଚ୍ଚ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ହେତୁ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନା ପାଇଁ ଅତି କମରେ 3 ଟି ସମାନ୍ତରାଳ କୂଅ ତିଆରି କରାଯିବା ଉଚିତ ଯାହା ପରବର୍ତ୍ତୀ Ct କୁ ଭିନ୍ନ ନହେବା କିମ୍ବା ପରିସଂଖ୍ୟାନ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ SD ବହୁତ ବଡ ନହେବା ପାଇଁ |
2. ମାଷ୍ଟର ମିଶ୍ରଣକୁ ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍ କରନ୍ତୁ ନାହିଁ |
3. ପ୍ରତ୍ୟେକ ଟ୍ୟୁବ୍ / ଗର୍ତ୍ତକୁ ଏକ ନୂତନ ଟିପ୍ ସହିତ ବଦଳାଇବା ଜରୁରୀ!ନମୁନା ଯୋଡିବା ପାଇଁ କ୍ରମାଗତ ଭାବରେ ସମାନ ପାଇପେଟ୍ ଟିପ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ ନାହିଁ!
4. ନମୁନା ଯୋଡିବା ପରେ 96-କୂଅ ପ୍ଲେଟରେ ଲାଗିଥିବା ଚଳଚ୍ଚିତ୍ରକୁ ଏକ ପ୍ଲେଟ ସହିତ ସଫାସୁତୁରା କରିବା ଆବଶ୍ୟକ |ଏହାକୁ ମେସିନରେ ରଖିବା ପୂର୍ବରୁ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ କରିବା ଭଲ, ଯାହାଫଳରେ ଟ୍ୟୁବ୍ କାନ୍ଥରେ ଥିବା ତରଳ ପଦାର୍ଥ ପ୍ରବାହିତ ହୋଇ ବାୟୁ ବବୁଲଗୁଡିକ ବାହାର କରିପାରେ |
Om ସାଧାରଣ ବକ୍ର ବିଶ୍ଳେଷଣ |
ଲୋଗାରିଥମିକ୍ ଅଭିବୃଦ୍ଧିର କ period ଣସି ଅବଧି ନାହିଁ | | ସମ୍ଭବତ templ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ର ଏକାଗ୍ରତା | |
କ C ଣସି CT ମୂଲ୍ୟ ନାହିଁ | | ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ ଭୁଲ୍ ପଦକ୍ଷେପ; ପ୍ରାଇମର୍ କିମ୍ବା ପ୍ରୋବ୍ର ଅବକ୍ଷୟ - ଏହାର ଅଖଣ୍ଡତା PAGE ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ୱାରା ଚିହ୍ନଟ ହୋଇପାରେ | ଟେମ୍ପଲେଟର ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ପରିମାଣ; ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକର ଅବକ୍ଷୟ - ଅପରିଷ୍କାର ପରିଚୟକୁ ଏଡ଼ାଇବା ଏବଂ ନମୁନା ପ୍ରସ୍ତୁତିରେ ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍ ଏବଂ ଥୋଇଙ୍ଗ୍; |
Ct> 38 | କମ୍ ବିସ୍ତାର ଦକ୍ଷତା;PCR ଉତ୍ପାଦ ବହୁତ ଲମ୍ବା ଅଟେ;ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ ଖରାପ ହୋଇଯାଏ | |
ର Line ଖ୍ୟ ବିସ୍ତାର ବକ୍ର | | ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍-ଥ୍ ଚକ୍ର କିମ୍ବା ଆଲୋକର ଦୀର୍ଘ ସମୟ ଏକ୍ସପୋଜର୍ ଦ୍ Pro ାରା ପ୍ରୋବଗୁଡିକ ଆଂଶିକ ଖରାପ ହୋଇପାରେ | |
ନକଲି ଛିଦ୍ରଗୁଡ଼ିକର ପାର୍ଥକ୍ୟ ବିଶେଷ ଭାବରେ ବଡ଼ | | ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମାଧାନ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ତରଳାଯାଏ ନାହିଁ କିମ୍ବା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମାଧାନ ମିଶ୍ରିତ ହୁଏ ନାହିଁ;PCR ଯନ୍ତ୍ରର ତାପଜ ସ୍ନାନ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପଦାର୍ଥ ଦ୍ୱାରା ଦୂଷିତ | |
2.5 ଡାଟା ବିଶ୍ଳେଷଣ ବିଷୟରେ |
QPCR ର ତଥ୍ୟ ବିଶ୍ଳେଷଣକୁ ଆପେକ୍ଷିକ ପରିମାଣ ଏବଂ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିମାଣରେ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇପାରେ |ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀର କୋଷଗୁଡ଼ିକ ସହିତ ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀର କୋଷଗୁଡ଼ିକ,
X ଜିନ୍ ର mRNA କେତେ ଥର ପରିବର୍ତ୍ତନ ହୁଏ, ଏହା ଆପେକ୍ଷିକ ପରିମାଣ ଅଟେ;ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସଂଖ୍ୟକ କୋଷରେ, X ଜିନ୍ ର mRNA |
କେତେ କପି ଅଛି, ଏହା ହେଉଛି ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିମାଣ |ସାଧାରଣତ what ଆମେ ଲାବୋରେଟୋରୀରେ ଅଧିକ ବ୍ୟବହାର କରୁଥିବା ହେଉଛି ଆପେକ୍ଷିକ ପରିମାଣିକ ପଦ୍ଧତି |ସାଧାରଣତ ,,2-ΔΔct ପଦ୍ଧତି |ପରୀକ୍ଷଣରେ ସର୍ବାଧିକ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ତେଣୁ କେବଳ ଏହି ପଦ୍ଧତି ଏଠାରେ ବିସ୍ତୃତ ଭାବରେ ପରିଚିତ ହେବ |
2-ΔΔct ପଦ୍ଧତି: ପ୍ରାପ୍ତ ଫଳାଫଳ ହେଉଛି କଣ୍ଟ୍ରୋଲ୍ ଗ୍ରୁପରେ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ସହିତ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଗୋଷ୍ଠୀରେ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତିର ପାର୍ଥକ୍ୟ |ଏହା ଆବଶ୍ୟକ ଯେ ଉଭୟ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ଏବଂ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ର ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦକ୍ଷତା 100% ପାଖାପାଖି, ଏବଂ ଆପେକ୍ଷିକ ବିଚ୍ୟୁତି 5% ରୁ ଅଧିକ ହେବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ |
ଗଣନା ପଦ୍ଧତି ନିମ୍ନଲିଖିତ ଅଟେ:
Controlct କଣ୍ଟ୍ରୋଲ୍ ଗ୍ରୁପ୍ = କଣ୍ଟ୍ରୋଲ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ରେ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ର ct ମୂଲ୍ୟ - କଣ୍ଟ୍ରୋଲ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ରେ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ର ct ମୂଲ୍ୟ |
Δct ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଗୋଷ୍ଠୀ = ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଗୋଷ୍ଠୀରେ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜିନ୍ ର ct ମୂଲ୍ୟ - ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଗୋଷ୍ଠୀର ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ର ct ମୂଲ୍ୟ |
ΔΔct = Δct ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଗୋଷ୍ଠୀ- Δct ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ |
ଶେଷରେ, ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସ୍ତରରେ ପାର୍ଥକ୍ୟର ଏକାଧିକ ଗଣନା କରନ୍ତୁ:
ଫୋଲ୍ଡ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରନ୍ତୁ = 2-ΔΔct (ଏକ୍ସେଲ୍ ଫଙ୍କସନ୍ ସହିତ POWER)
ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ:
ପୋଷ୍ଟ ସମୟ: ମେ -20-2023 |