ସମ୍ପ୍ରତି, ମୁଁ କିଛି ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ଆବିଷ୍କାର କଲି!ତାଙ୍କ ଚାରିପାଖରେ ଅନେକ ଉନ୍ନତ ପରୀକ୍ଷଣ ପ୍ରଫେସନାଲମାନେ ମଧ୍ୟ କିଛି ମ basic ଳିକ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଜ୍ଞାନ ପଏଣ୍ଟ ଜାଣନ୍ତି ନାହିଁ |

ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଆପଣ ନିମ୍ନ ପ୍ରଶ୍ନର ଉତ୍ତର ଦେଇପାରିବେ କି?

OD260 ଏବଂ A260 ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ ଅଛି କି?ପ୍ରତ୍ୟେକର ଅର୍ଥ କ’ଣ?
OD ହେଉଛି ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତା (ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତା) ର ସଂକ୍ଷିପ୍ତକରଣ, A ହେଉଛି ଅବଶୋଷଣର ଅବକ୍ଷୟ (ଅବଶୋଷଣ), ଦୁଇଟି ଧାରଣା ପ୍ରକୃତରେ ସମାନ, “ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତା” ହେଉଛି “ଅବଶୋଷଣ”, କିନ୍ତୁ “ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତା” ଅଧିକାଂଶ ଜାତୀୟ ମାନକ ସହିତ ଅଧିକ ମାନକ ଅଟେ |

ସାଧାରଣତ the ଆମେ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏକାଗ୍ରତାକୁ ଗଣନା କରିବା ପାଇଁ OD ମୂଲ୍ୟ 260nm ରେ ମାପ କରୁ, ତେବେ 1OD କ’ଣ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ?
260nm ର ତରଙ୍ଗଦ eng ର୍ଘ୍ୟରେ ନ୍ୟୁକ୍ଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ର ସର୍ବାଧିକ ଅବଶୋଷଣ ଶିଖର ଅଛି, ଯେଉଁଥିରେ ଉଭୟ DNA ଏବଂ RNA, ଏବଂ ଖଣ୍ଡବିଖଣ୍ଡିତ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଖଣ୍ଡ (ଏହା ହେଉଛି ମୁଖ୍ୟ ବିନ୍ଦୁ) |
260 nm ର ତରଙ୍ଗଦ eng ର୍ଘ୍ୟରେ ମାପାଯାଇଥିବା OD ମୂଲ୍ୟ OD260 ଭାବରେ ରେକର୍ଡ କରାଯାଇଥିଲା |ଯଦି ନମୁନା ଶୁଦ୍ଧ, OD260 ମୂଲ୍ୟ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ନମୁନାର ଏକାଗ୍ରତାକୁ ଗଣନା କରିପାରିବ |
1 OD260 = 50 μg / ml dsDNA (ଦ୍ୱିଗୁଣିତ DNA)
= 37 μg / ml ssDNA (ଏକକ-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ DNA)
= 40 μg / ml RNA |
= 30 μg / ml dNTPs (oligonucleotides)
RT-PCR, Realtime-PCR ଏବଂ QPCR ମଧ୍ୟରେ କ connection ଣସି ସଂଯୋଗ ଏବଂ ପାର୍ଥକ୍ୟ ଅଛି କି?
ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ PCR ପାଇଁ RT-PCR କ୍ଷୁଦ୍ର ଅଟେ |
ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR = qPCR, ପରିମାଣିକ ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ପାଇଁ ଛୋଟ |
ଯଦିଓ ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR (ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR) ଏବଂ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ PCR (ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ PCR) ଉଭୟ RT-PCR ଭାବରେ ସଂକ୍ଷିପ୍ତ ହୋଇଥିବା ପରି ମନେହୁଏ |କିନ୍ତୁ ଆନ୍ତର୍ଜାତୀୟ ସମ୍ମିଳନୀ ହେଉଛି: RT-PCR ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଭାବରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ PCR କୁ ସୂଚିତ କରେ |

ଜୀବବିଜ୍ଞାନରେ DNA / RNA ର ଲମ୍ବ ବର୍ଣ୍ଣନା କରିବାକୁ ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ nt, bp, ଏବଂ kb କ’ଣ?
nt = ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ |
bp = ଆଧାର ଯୁଗଳ ଆଧାର ଯୁଗଳ |
kb = କିଲୋବାଜ୍ |

ଅବଶ୍ୟ, ଆପଣ କହିବେ ଯେ ଅନେକ ଲୋକ ଏହି ଛୋଟ ବିବରଣୀ ବିଷୟରେ ଚିନ୍ତା କରନ୍ତି ନାହିଁ!ସମସ୍ତେ ଏହା କରନ୍ତି, ଏବଂ ଏହା କ’ଣ ବୋଲି କେହି ଆପଣଙ୍କୁ ପଚାରିବେ ନାହିଁ |ଆପଣ ଜାଣନ୍ତି ଏହା ଅନାବଶ୍ୟକ, ଠିକ୍?

ନା, ନା, ନା, ଏହା ଜାଣିବା ଅତ୍ୟନ୍ତ ଆବଶ୍ୟକ!କେଉଁ କାରଣରୁ?
କାରଣ ଆପଣ ଏକ ଆର୍ଟିକିଲ୍ ପୋଷ୍ଟ କରିବାକୁ ଚାହୁଁଛନ୍ତି!ଭାଇ!ଆପଣ ସ୍ନାତକୋତ୍ତର ପାଇଁ ଲକ୍ଷ୍ୟ ରଖିଛନ୍ତି କିମ୍ବା ବ scientific ଜ୍ଞାନିକ ଅନୁସନ୍ଧାନ ସଫଳତା ଅନୁସରଣ କରୁଛନ୍ତି, ଆପଣ କହିବାକୁ ପ୍ରବନ୍ଧଗୁଡ଼ିକ ଉପରେ ନିର୍ଭର କରିବାକୁ ପଡିବ!

ନ୍ୟୁକ୍ଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ନିଷ୍କାସନ ସବୁଠାରୁ ସରଳ ଏବଂ ସବୁଠାରୁ ମ basic ଳିକ ପରୀକ୍ଷଣ ହେବା ଉଚିତ୍ |ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଉତ୍ତୋଳନର ଗୁଣ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷଣର ଫଳାଫଳକୁ ସିଧାସଳଖ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରେ |

ଯଦିଓ ମୁଁ ଏହାକୁ ଅନେକ ଥର କହିଛି, ତଥାପି ଅନେକ ବନ୍ଧୁ ଅଛନ୍ତି ଯେଉଁମାନେ ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତି ନାହିଁ |ଏଥର ମୁଁ ଆର୍ଟିକିଲରୁ ବାହାରକୁ ଯିବାକୁ ସ୍ଥିର କଲି!

ପରିମାଣିକ ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ PCR ପରୀକ୍ଷଣଗୁଡିକର ପ୍ରକାଶନ ପାଇଁ ସର୍ବନିମ୍ନ ସୂଚନା, ଯାହାକୁ MIQE କୁହାଯାଏ |, ଆନ୍ତର୍ଜାତୀୟ ସ୍ତରରେ ଆରମ୍ଭ ହୋଇଥିବା ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପରିମାଣିକ ପରୀକ୍ଷଣ ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀଗୁଡ଼ିକର ଏକ ସେଟ୍, ଯାହା ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପରିମାଣିକ PCR ପରୀକ୍ଷଣର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ଏବଂ ପ୍ରବନ୍ଧ ପ୍ରକାଶନ ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ସୂଚନା ପାଇଁ ସର୍ବନିମ୍ନ ମାନକ ପ୍ରସ୍ତାବ ଦେଇଥାଏ |ପରୀକ୍ଷକ ଦ୍ provided ାରା ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇଥିବା ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଅବସ୍ଥା ଏବଂ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପଦ୍ଧତି ମାଧ୍ୟମରେ, ସମୀକ୍ଷକମାନେ ଅନୁସନ୍ଧାନକାରୀଙ୍କ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଯୋଜନାର ବ ity ଧତାକୁ ଭଲ ଭାବରେ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିପାରିବେ |

ଏହା ଦେଖାଯାଇପାରେ ଯେ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଉତ୍ତୋଳନ ବିଭାଗରେ, ନିମ୍ନଲିଖିତ ଚିହ୍ନଟ ଆଇଟମଗୁଡିକ ପ୍ରସ୍ତାବ ଦିଆଯାଇଛି,

“E” ସୂଚନା ସୂଚାଇଥାଏ ଯାହା ପ୍ରଦାନ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ ଏବଂ “D” ସୂଚନା ସୂଚାଇଥାଏ ଯାହା ଆବଶ୍ୟକ ହେଲେ ପ୍ରଦାନ କରାଯିବା ଉଚିତ |

ଫର୍ମଟି ଅତ୍ୟନ୍ତ ଜଟିଳ, ବାସ୍ତବରେ, ମୁଁ କହିବାକୁ ଚାହେଁ ଯେ ସମସ୍ତେ ଆରମ୍ଭ କରିବା ଆବଶ୍ୟକ କରନ୍ତି |

ଶୁଦ୍ଧତା (D), ଅମଳ (D), ଅଖଣ୍ଡତା (E) ଏବଂ ସ୍ଥିରତା (E) ଏହି ଚାରୋଟି ଦିଗରେ ନ୍ୟୁକ୍ଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ଆକଳନ କରିବାକୁ |

ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଅଭ୍ୟାସ ଅନୁଯାୟୀ, ପ୍ରଥମେ ଶୁଦ୍ଧତା ଏବଂ ଏକାଗ୍ରତାର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ପଦ୍ଧତି ବିଷୟରେ କଥାବାର୍ତ୍ତା କର |

ପରୀକ୍ଷକମାନଙ୍କ ପାଇଁ OD ମାପ ହେଉଛି ପ୍ରିୟ ଏବଂ ସହଜ ଚିହ୍ନଟ ପଦ୍ଧତି |ନୀତି ପାଇଁ, ମୁଁ ଏଠାରେ ସବିଶେଷ ତଥ୍ୟକୁ ଯିବି ନାହିଁ |ଅନେକ ଲାବୋରେଟୋରୀ ବର୍ତ୍ତମାନ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ନମୁନାକୁ ସିଧାସଳଖ ପରିମାଣିକ ଭାବରେ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିବା ପାଇଁ ଅଲ୍ଟ୍ରା-ମାଇକ୍ରୋ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରଫୋଟୋମିଟର ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତି |ଅବଶୋଷଣ ମୂଲ୍ୟ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିବାବେଳେ, ପ୍ରୋଗ୍ରାମ ସିଧାସଳଖ ଏକାଗ୍ରତା ମୂଲ୍ୟ (ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍, ପ୍ରୋଟିନ୍ ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗ) ଏବଂ ଆନୁଷଙ୍ଗିକ ଅନୁପାତ ଦେଇଥାଏ |OD ମୂଲ୍ୟର ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ, ଏହି ଛବି ସ Save ୍ଚୟ କର ଏବଂ ତୁମେ ଭଲ ହେବ |

ୟୁନିଭର୍ସାଲ୍ OD ମୂଲ୍ୟ ସମାଧାନ ତାଲିକା |

ତଥାପି, ସେଠାରେ କିଛି ଗୁମ୍ଫା ଅଛି ଯାହା ଆପଣଙ୍କ ପାଇଁ ପୃଥକ ଭାବରେ ବାହାରକୁ ଆଣିବା ଆବଶ୍ୟକ |

(ସର୍ବଶେଷରେ, ମୁଁ ଜାଣେ ତୁମେ ହିଁ ସେହି ବ୍ୟକ୍ତି ଯିଏ ସଞ୍ଚୟ କର ଏବଂ ତୁମର ଆବଶ୍ୟକତା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଅପେକ୍ଷା କର!)

ଟିପ୍ପଣୀ 1 ଉପକରଣ

ବିଭିନ୍ନ ଉପକରଣ ଦ୍ୱାରା OD ମୂଲ୍ୟ ପ୍ରଭାବିତ ହେବ |ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ OD260 ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଅଛି, OD230 ଏବଂ OD280 ର ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ଅର୍ଥପୂର୍ଣ୍ଣ |ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, 260nm ରେ ସାଧାରଣ Eppendorf D30 ର ଅବଶୋଷଣ ପରିସର ହେଉଛି 0 ~ 3A, ଏବଂ ଥର୍ମୋ ର ନାନୋ ଡ୍ରପ୍ 260nm ରେ |0.5 ~ 62.5A ର ଅବଶୋଷଣ ପରିସର |

ଟିପ୍ପଣୀ 2 |ଦିଲ୍ୟୁସନ୍ ରିଜେଣ୍ଟ୍ |

ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକର ମିଶ୍ରଣ ଦ୍ୱାରା OD ମୂଲ୍ୟ ପ୍ରଭାବିତ ହୋଇପାରେ |ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, pH ରେ ଶୁଦ୍ଧ RNA ର OD260 / 280 ପଠନ |7.5 10 ମି ଟ୍ରାଇସ୍ଥିବାବେଳେ, ବଫର୍ 1.9-2.1 ମଧ୍ୟରେ ଅଛି |ନିରପେକ୍ଷ ଜଳୀୟ ସମାଧାନ |ଅନୁପାତ କମ୍ ହେବ, ବୋଧହୁଏ କେବଳ 1.8-2.0, କିନ୍ତୁ ଏହାର ଅର୍ଥ ନୁହେଁ ଯେ RNA ର ଗୁଣ ଭିନ୍ନତା ପରିବର୍ତ୍ତନ କରେ |

ଟିପ୍ପଣୀ 3ଅବଶିଷ୍ଟ ପଦାର୍ଥ |

ଅବଶିଷ୍ଟ ପଦାର୍ଥର ଅସ୍ତିତ୍ୱ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏକାଗ୍ରତା ମାପର ସଠିକତା ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଇବ, ତେଣୁ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ନମୁନାରେ ପ୍ରୋଟିନ୍, ଫେନୋଲ୍, ପଲିସାକାରାଇଡ୍ ଏବଂ ପଲିଫେନୋଲ୍ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶକୁ ଏଡ଼ାଇବା ଆବଶ୍ୟକ |

ଅବଶ୍ୟ, ବାସ୍ତବରେ, ଜ organic ବ ପୁନ ag ସହିତ ଉତ୍ତୋଳନ ଏକ ପୁରୁଣା ପଦ୍ଧତି |ବାଣିଜ୍ୟିକ କିଟ୍ ଗୁଡିକରେ, ଏକ ସିଲିକା-ଆଧାରିତ ଆଡସର୍ପସନ୍ ସ୍ତମ୍ଭ ମାଧ୍ୟମରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ସହିତ ମିଳିତ, ବିଷାକ୍ତ ଏବଂ କ୍ଷତିକାରକ ଜ organic ବ ପୁନ ag ବ୍ୟବହାରକୁ ଏଡାଇବା କଷ୍ଟକର ହୋଇପାରେ, ବାହାର କରିବା ପ୍ରଭାବ ଇତ୍ୟାଦି ଏହି ସମସ୍ୟା ଯେପରିକି |ଫରେଗେନର ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ନିଷ୍କାସନ କିଟ୍, DNase / RNase ଏବଂ ବିଷାକ୍ତ ଜ organic ବ ପୁନ ag ବ୍ୟବହାରକୁ ଶୀଘ୍ର ଏବଂ ନିରାପଦରେ ବ୍ୟବହାର କରେ ନାହିଁ |, ଏବଂପ୍ରଭାବ ହେଉଛିଭଲ(ହଠାତ୍ କହିଲା ଏହା ବାଳିଆ, କିନ୍ତୁ ମୁଁ ଜାଣେ ତୁମେ ଜାଣିବାକୁ ଚାହୁଁଛ) |

ଉଦାହରଣ 1: ଜେନୋମିକ୍ DNA ନିଷ୍କାସନ ଅମଳ ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧତା |

ଫୋରେଜେନ୍ ମୃତ୍ତିକା ଡିଏନ୍ଏ ଆଇସୋଲେସନ୍ କିଟ୍ (DE-05511) ବିଭିନ୍ନ ଉତ୍ସରୁ ମାଟି ନମୁନାକୁ ଚିକିତ୍ସା କରେ, ଏବଂ ମିଳିଥିବା ଜେନୋମିକ୍ ଡିଏନ୍ଏର ପରିମାଣ ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧତା ନିମ୍ନଲିଖିତ ସାରଣୀରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି:
ଉଦାହରଣ ୨: ଟିସୁ RNA ନିଷ୍କାସନ ଅମଳ ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧତା |

ପଶୁ ସମୁଦାୟ RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନତା କିଟ୍ (RE-03012) ବିଭିନ୍ନ ଟିସୁ ନମୁନା ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ କରିଥିଲା, ଏବଂ ପ୍ରାପ୍ତ RNA ର ପରିମାଣ ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧତା ନିମ୍ନ ସାରଣୀରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି (ମାଉସ୍ ଟିସୁ ପାଇଁ):
ତଥାପି, ଭାବ ନାହିଁ ଯେ ତୁମେ OD ମୂଲ୍ୟ ସହିତ ସମାପ୍ତ ହୋଇଛି |ସାମ୍ନାରେ ମୁଁ ତୁମ ପାଇଁ ଆଙ୍କିଥିବା ପ୍ରମୁଖ ପଏଣ୍ଟଗୁଡ଼ିକର ଯତ୍ନ ନେଉଛ କି?

ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ |

ଭଗ୍ନାଂଶିତ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଅଣୁଗୁଡିକ ମଧ୍ୟ ଅବଶୋଷଣରେ ଗଣନା କରାଯିବ |ମନେକର ଯେ ଆପଣଙ୍କର RNA ରେ ଜେନୋମିକ୍ DNA ଅବଶିଷ୍ଟ ଅଛି, ଆପଣଙ୍କର OD ମୂଲ୍ୟ ବହୁତ ଅଧିକ ଦେଖାଯିବ, କିନ୍ତୁ RNA ର ପ୍ରକୃତ ଏକାଗ୍ରତା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇପାରିବ ନାହିଁ |ଆପଣଙ୍କର RNA ଅଛି କି ନାହିଁ ଏହା ସ୍ପଷ୍ଟ ନୁହେଁ ଯେ ଅବନତି ଅଛି କି ନାହିଁ, ତେଣୁ ଆମକୁ ଅଧିକ ସଠିକ୍ ବିଚାର ଦେବା ପାଇଁ ଏକ ବିସ୍ତୃତ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ପଦ୍ଧତି ଆବଶ୍ୟକ, ଅର୍ଥାତ୍ MIQE ରେ ଉଲ୍ଲେଖିତ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଅଖଣ୍ଡତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ |