ପାରମ୍ପାରିକ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରାକୁ ସହ୍ୟ କରିପାରିବ ନାହିଁ (MMLV କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପାଇଁ ସର୍ବୋଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରା 37-50 ° C, ଏବଂ AMV ହେଉଛି 42-60 ° C) |ଅଧିକ ଜଟିଳ ଭାଇରାଲ୍ RNA କମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ cDNA ରେ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ଓଲଟା ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ, ଫଳସ୍ୱରୂପ ଚିହ୍ନଟ ଦକ୍ଷତା ହ୍ରାସ ହୁଏ |ପାରମ୍ପାରିକ RT-qPCR ସାଧାରଣତ two ଦୁଇଟି ମୁଖ୍ୟ ଏନଜାଇମ୍ (ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ଏବଂ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍) ର ଅଂଶଗ୍ରହଣ ଆବଶ୍ୟକ କରେ, ଯାହା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀର କାର୍ଯ୍ୟକୁ ସରଳ କରିବା ଏବଂ ମୂଲ୍ୟ ହ୍ରାସ କରିବା ଅସମ୍ଭବ କରିଥାଏ |ଏଠାରେ ଆମେ ଦୁଇଟି ଉଚ୍ଚ-ତାପମାତ୍ରା-ପ୍ରତିରୋଧୀ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍, TtH ଏବଂ RevTaq ଉପସ୍ଥାପନ କରିବୁ |ଏହି ଦୁଇଟି ଏନଜାଇମର ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ର କାର୍ଯ୍ୟ ମଧ୍ୟ ଅଛି, ତେଣୁ ସେମାନଙ୍କୁ ବାଇଫଙ୍କସନାଲ ଏନଜାଇମ୍ କୁହାଯାଏ |

TtH DNA ପଲିମେରେଜ୍ |

ଆପଣ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ TtH ବିଷୟରେ ଶୁଣିଥିବେ, ଯାହା ଥର୍ମୋଫିଲିକ୍ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ଥର୍ମସ୍ ଥର୍ମୋଫିଲସ୍ HB8 ରୁ ଉତ୍ପନ୍ନ |Mg2 + ପରି ବିଭାଜିତ କାଟେସନଗୁଡିକର ଉପସ୍ଥିତିରେ, ଏଥିରେ DNA ପଲିମେରେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଅଛି |ଏହା ଟ୍ୟାକ୍ ଏନଜାଇମ୍ ପରି PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ବହୁଳ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, କିନ୍ତୁ ଏହାର ଟ୍ୟାକ୍ ଏନଜାଇମ୍ ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ ଉତ୍ତାପ ପ୍ରତିରୋଧକତା ଅଛି, ତେଣୁ ଉଚ୍ଚ ଜିସି ବିଷୟବସ୍ତୁ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ସହିତ PCR ଉପରେ ଏହାର ଭଲ ପ୍ରଭାବ ମଧ୍ୟ ଥାଏ |

· ଏହି ଏନଜାଇମର ମୂଳତ no କ 3 ଣସି 3 ′ → 5 ′ ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ 5 ′ → 3 ′ ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ନାହିଁ, ତେଣୁ ଏହା ଡିଡୋକ୍ସି କ୍ରମରେ ମଧ୍ୟ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |

ଏହି ଏନଜାଇମରେ RTase କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଅଛି |Mn2 + ର ଉପସ୍ଥିତିରେ, RTase କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ବୃଦ୍ଧି ହେବ |ଏହି ବ feature ଶିଷ୍ଟ୍ୟ ବ୍ୟବହାର କରି, ଏହାକୁ ସମାନ ଟ୍ୟୁବରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଏବଂ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରିବାକୁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ, ଅର୍ଥାତ୍ ଗୋଟିଏ ସୋପାନ RT-PCR |ତଥାପି, Mn2 + ଙ୍କ ଉପସ୍ଥିତିରେ, RT-PCR ର ସଠିକତା ଅଧିକ ନୁହେଁ |Rnaase H କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ସହିତ RT କାର୍ଯ୍ୟକଳାପର କ do ଣସି ସମ୍ପର୍କ ନାହିଁ |

Tth-DNA ପଲିମେରେଜ୍ (pH9, ସର୍ବୋତ୍କୃଷ୍ଟ + 55 ℃ ～ + 70 ℃, ସର୍ବାଧିକ + 95 of) ର ବର୍ଦ୍ଧିତ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ RNA ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନ ଦ୍ୱାରା ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ସମସ୍ୟାକୁ ଅତିକ୍ରମ କରେ |ଫଳସ୍ୱରୂପ cDNA PCR ଦ୍ M ାରା Mg2 + ଆୟନର ଉପସ୍ଥିତିରେ ସମାନ ଏନଜାଇମ୍ ସହିତ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇପାରିବ |

ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରାରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଏବଂ ଡିଏନ୍ଏ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ କରିବା ପାଇଁ Tth-DNA ପଲିମେରେଜ୍ ର କ୍ଷମତା ଏହି ଏନଜାଇମକୁ ପରିମାଣିକ RT-PCR, କ୍ଲୋନିଂ ଏବଂ ସେଲୁଲାର୍ ଏବଂ ଭାଇରାଲ୍ RNA ର ଜିନ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ଉପଯୋଗୀ କରିଥାଏ |
R-kb ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ RNA କୁ ବୃଦ୍ଧି କରିବା ପାଇଁ RT-PCR ପାଇଁ Tth-DNA ପଲିମେରେଜ୍ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |

ବ Features ଶିଷ୍ଟ୍ୟ ଏବଂ ସୁବିଧା

ଦଶମ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍:

RT-PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଅତି କମରେ 1000 ବିପି ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ପଲିମେରେଜ୍ ଚେନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା (PCR) ଉତ୍ପାଦ ଆକାର ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ |

ପରିବର୍ତ୍ତିତ ଡିଓକ୍ସାଇରାଇବୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଓସାଇଡ୍ ଟ୍ରାଇଫୋସଫେଟ୍ କୁ ଏକ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଭାବରେ ଗ୍ରହଣ କରନ୍ତୁ |

• RNase H କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ସହିତ ଜଡିତ ନୁହେଁ |

ସମସ୍ୟାକୁ ଦୂର କରିବା ପାଇଁ ଉଚ୍ଚ ତାପଜ ସ୍ଥିରତା ଅଛି, ସାଧାରଣତ R RNA ରେ ଉପସ୍ଥିତ ଥିବା ଉଚ୍ଚ ମାଧ୍ୟମିକ ଗଠନ ସହିତ ଜଡିତ |

RevTaq RT - PCR DNA ପଲିମେରେଜ୍ |

ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ସହିତ ଏକ ଉତ୍ତାପ-ପ୍ରତିରୋଧକ DNA ପଲିମେରେଜ୍ |

RevTaq-RT-PCR-DNA ପଲିମେରେଜ୍ ହେଉଛି ଏକ ଇଞ୍ଜିନିୟରିଂ, ଅତ୍ୟଧିକ ଉତ୍ତାପ-ପ୍ରତିରୋଧୀ, ଡୁଆଲ୍-ଫଙ୍କସନାଲ ଏନଜାଇମ୍ ସହିତ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦେଶିତ ଏବଂ କୃତ୍ରିମ ବିବର୍ତ୍ତନ ମାଧ୍ୟମରେ ପ୍ରାପ୍ତ DNA ପଲିମେରେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ |

Rev 95 ° C ରେ RevTaq RT-PCR DNA ପଲିମେରେଜ୍ ର ଅଧା ଜୀବନ 40 ମିନିଟରୁ ଅଧିକ |

· RevTaq RT-PCR DNA ପଲିମେରେଜ୍ ସିଧାସଳଖ RNA ଟେମ୍ପଲେଟରୁ ଉଚ୍ଚ-ତାପମାତ୍ରା ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଅନୁମତି ଦିଏ, ଏବଂ ଅଧିକ cDNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିବାକୁ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଷ୍ଟେପ୍ ଏକାଧିକ ଥର ପୁନରାବୃତ୍ତି ହୋଇପାରେ |

Rev RevTaq RT-PCR DNA polymerase “ଶୂନ-ଷ୍ଟେପ୍” RT-PCR କୁ ଅନୁମତି ଦିଏ (କ is ଣସି ଆଇସୋଥର୍ମାଲ୍ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଷ୍ଟେପ୍ ନାହିଁ), କାରଣ ସାଇକ୍ଲିକ୍ PCR ବିସ୍ତାର ପଦକ୍ଷେପରେ, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଏବଂ DNA ବିସ୍ତାର ଏକ ସମୟରେ ଘଟେ |ଏହା ମଧ୍ୟ ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରାରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିଥାଏ, ଯାହାଦ୍ୱାରା ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରାରେ RNA ରେ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ଦଳୀୟ ସଂରଚନା ତରଳିବାରେ ସମ୍ମୁଖୀନ ହେଉଥିବା ସମସ୍ୟାକୁ କମ୍ କରାଯାଇଥାଏ |

ଆପ୍ଟାମେର୍-ଆଧାରିତ ହଟ-ଷ୍ଟାର୍ଟ ଫର୍ମୁଲା ଯୋଗୁଁ, ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ଏବଂ ବିସ୍ତାର ତାପମାତ୍ରା 57 ° C ରୁ ଅଧିକ ହେଲେ RevTaq RT-PCR DNA ପଲିମେରେଜ୍ ଭଲ ଫଳାଫଳ ଦେବ |

· ଯେହେତୁ ଏନଜାଇମ୍ ଉତ୍ତାପ-ପ୍ରତିରୋଧୀ, ଅତ୍ୟଧିକ ଉଚ୍ଚ ତରଳିବା ପଏଣ୍ଟ (> 60 ° C) ସହିତ ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ପ୍ରୋବ୍ ଡିଜାଇନ୍ କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |

ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସେଟଅପ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ ତାପମାତ୍ରା ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ / ଏକ୍ସଟେନ୍ସନ୍ ଷ୍ଟେପ୍ ର ତାପମାତ୍ରାକୁ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |

· ତାପମାତ୍ରା ଯେତେ ଅଧିକ, PCR ର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ସେତେ ଅଧିକ |ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଚକ୍ର ସାଧାରଣତ the PCR ଚକ୍ର ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ ତାପମାତ୍ରାରେ କରାଯାଏ, କାରଣ DNA ପ୍ରାଇମର୍: RNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ହାଇବ୍ରିଡାଇଜେସନ୍ ସାଧାରଣତ D DNA ପ୍ରାଇମର୍: cDNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଡୁପ୍ଲେକ୍ସ ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ ତରଳିବା ପଏଣ୍ଟ ପାଇଥାଏ |

RevTaq RT-PCR DNA ପଲିମେରେଜ୍ ଜେନେଟିକ୍ ଇଞ୍ଜିନିୟରିଂ ଏବଂ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୋଇଛି ଏବଂ ଆମ୍ପଲିକନ୍ ଆକାର 60-300 bp ମଧ୍ୟରେ ଅଛି |

RevTaq RT-PCR DNA ପଲିମେରେଜ୍ ଚିହ୍ନଟ ସୀମା 4 କପିରେ ପହଞ୍ଚେ /

ଚିତ୍ରରେ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ (ଉଚ୍ଚ ତରଳିବା ପଏଣ୍ଟ ପ୍ରାଇମର୍ ପ୍ରତିଷ୍ଠା) ପ୍ରଦର୍ଶିତ ହୋଇଛି |RevTaq RT-PCR DNA ପଲିମେରେଜ୍-ଚାଳିତ RT-PCR TaqPath 1-step RT-qPCR ମାଷ୍ଟର ମିଶ୍ରଣ ଅପେକ୍ଷା ଭଲ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଏବଂ ନିମ୍ନ ଚିହ୍ନଟ ନମୁନା ଦିଲ୍ୟୁସନ୍ ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ ଦେଖାଏ |

ଅଧିକ ସୁବିଧା:

ଦ୍ରୁତ ଆରମ୍ଭ କାର୍ଯ୍ୟ → ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଥର୍ମାଲ୍ ଡେନାଟ୍ରେସନ୍ ଷ୍ଟେପ୍ ଏଡ଼ାଇ ଦିଆଯାଇପାରେ |

ହଟ୍-ଷ୍ଟାର୍ଟ ଆପ୍ଟାମେର୍ ଫର୍ମୁଲା immediately ତୁରନ୍ତ 100% ଏନଜାଇମ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପ୍ରଦାନ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ନିମ୍ନ ତାପମାତ୍ରାରେ (<57 ° C) ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାରକୁ ରୋକନ୍ତୁ |

କ୍ଲିଭେଜ୍ ଫଙ୍କସନ୍ → RNA ନିଷ୍କାସନ ପଦକ୍ଷେପକୁ ବାଦ ଦିଆଯାଇଛି, କାରଣ RevTaq RT-PCR DNA polymerase ମଧ୍ୟ ଅଶୋଧିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ନମୁନା ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ କରିପାରିବ |ଏହା ତୁରନ୍ତ ଏକ ଗରମ RT-PCR ଚକ୍ରରେ ଇଉକାରିଓଟ୍, ଜୀବାଣୁ ଏବଂ ଜୀବାଣୁଙ୍କର କୋଷ br ାଞ୍ଚାକୁ ନଷ୍ଟ କରିପାରେ |

IVD କଞ୍ଚାମାଲ ସ୍ତର → ଉଚ୍ଚ ଗୁଣର ମାନ ଏବଂ ଅତ୍ୟଧିକ ପ୍ରତିଯୋଗୀ ମୂଲ୍ୟ |