ଏହା ସମସ୍ତଙ୍କୁ ଜଣା ଯେ କେନ୍ଦ୍ରୀୟ ଡଗମାରେ, RNA ହେଉଛି DNA ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ମଧ୍ୟରେ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ମଧ୍ୟସ୍ଥି |ଡିଏନଏର ଚିହ୍ନଟ ସହିତ ତୁଳନା କରାଯାଏ, ଆରଏନଏର ଚିହ୍ନଟ ଜୀବଜଗତରେ ଜେନ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତିକୁ ଅଧିକ ବ object ଷୟିକ ଭାବରେ ପ୍ରତିଫଳିତ କରିପାରେ |RNA ସହିତ ଜଡିତ ପରୀକ୍ଷଣଗୁଡିକ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରେ: qRT-PCR, RNA-Seq, ଏବଂ ଫ୍ୟୁଜନ୍ ଜିନ୍ ଚିହ୍ନଟ, ଇତ୍ୟାଦି RNA ର ବ characteristics ଶିଷ୍ଟ୍ୟ ଉପରେ ଆଧାର କରି (RNA ର ଚିନି ରିଙ୍ଗରେ DNA ର ଚିନି ରିଙ୍ଗ ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ ମାଗଣା ହାଇଡ୍ରକ୍ସିଲ୍ ଗୋଷ୍ଠୀ ଅଛି), ପରିବେଶରେ ବହୁ ସଂଖ୍ୟକ RNase ସହିତ ମିଶି, RNA ଅଧିକ ଅସ୍ଥିର ଏବଂ DNA ଅପେକ୍ଷା ଖରାପ ହେବା ସହଜ |ଅଳିଆ ଆବର୍ଜନା, ଅଳିଆ ବାହାର, ଯଦି RNA ର ଗୁଣ ଭଲ ନୁହେଁ, ତେବେ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଫଳାଫଳ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ ସନ୍ତୋଷଜନକ ନୁହେଁ, ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଭାବରେ ଭୁଲ ତଥ୍ୟ କିମ୍ବା ଖରାପ ପୁନରାବୃତ୍ତି ଭାବରେ ପ୍ରକାଶିତ ହେବ |ତେଣୁ, RNA ର ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ପ୍ରତି ଅଧିକ ଧ୍ୟାନ ଦିଆଯିବା ଉଚିତ ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ତଥ୍ୟର ସଠିକତା ଏବଂ ସଠିକତାକୁ ନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ ଗୁଣାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣର ଲିଙ୍କ ମଧ୍ୟ ଅଧିକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ |

RNA ର ଗୁଣାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପାଇଁ, ସାଧାରଣତ the ନିମ୍ନଲିଖିତ ସାଧାରଣ ବ୍ୟବହୃତ ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକ ଅଛି:

• ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରଫୋଟୋମିଟ୍ରି |
• ଅଗରୋଜ୍ ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ |
• ଆଜିଲିଣ୍ଟ ବାୟୋନାଲିଜର |
• ବାସ୍ତବ ସମୟ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR |
• କ୍ୟୁବିଟ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗ ପଦ୍ଧତି |

01 ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରଫୋଟୋମିଟ୍ରି |

RNA ଡବଲ୍ ବଣ୍ଡ୍ ଗଠନ କରିଛି ଏବଂ 260nm ର ତରଙ୍ଗଦ eng ର୍ଘ୍ୟରେ ଏକ ଅବଶୋଷଣ ଶିଖର |ଲାମବର୍ଟ-ବିୟର ନିୟମ ଅନୁଯାୟୀ, ଆମେ 260nm ରେ ଅବଶୋଷଣ ଶିଖରରୁ RNA ଏକାଗ୍ରତାକୁ ଗଣନା କରିପାରିବା |ଏହା ସହିତ, ଆମେ 260nm, 280nm ଏବଂ 230nm ଅବଶୋଷଣ ଶିଖର ଅନୁପାତ ଅନୁଯାୟୀ RNA ର ଶୁଦ୍ଧତାକୁ ମଧ୍ୟ ଗଣନା କରିପାରିବା |280nm ଏବଂ 230nm ଯଥାକ୍ରମେ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଏବଂ ଛୋଟ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକର ଅବଶୋଷଣ ଶିଖର |ଯୋଗ୍ୟ RNA ଶୁଦ୍ଧତାର A260 / A280 ଏବଂ A260 / A230 ର ଅନୁପାତ 2 ରୁ ଅଧିକ ହେବା ଉଚିତ୍ ଯଦି ଏହା 2 ରୁ କମ୍, ଏହାର ଅର୍ଥ ହେଉଛି RNA ନମୁନାରେ ପ୍ରୋଟିନ୍ କିମ୍ବା ଛୋଟ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରଦୂଷଣ ଅଛି ଏବଂ ପୁନର୍ବାର ଶୁଦ୍ଧ ହେବା ଆବଶ୍ୟକ |ପ୍ରଦୂଷଣ ଉତ୍ସଗୁଡିକ ଡାଉନ୍ଷ୍ଟ୍ରିମ୍ ପରୀକ୍ଷଣକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିବ, ଯେପରିକି PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦକ୍ଷତାକୁ ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ କରିବା, ଯାହାଫଳରେ ଭୁଲ୍ ପରିମାଣିକ ଫଳାଫଳ |ପରବର୍ତ୍ତୀ ଫଳାଫଳ ଉପରେ RNA ର ଶୁଦ୍ଧତା ବହୁତ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ, ତେଣୁ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ପରୀକ୍ଷଣର ପ୍ରଥମ ସୋପାନରେ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରଫୋଟୋମିଟ୍ରି ସାଧାରଣତ a ଏକ ଅପରିହାର୍ଯ୍ୟ ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଲିଙ୍କ |

ଚିତ୍ର 1. ସାଧାରଣ RNA / DNA ଅବଶୋଷଣ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରମ୍ |

02 ଆଗରୋଜ୍ ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ |

ଶୁଦ୍ଧତା ବ୍ୟତୀତ, RNA ର ଅଖଣ୍ଡତା ମଧ୍ୟ RNA ର ଗୁଣବତ୍ତା ବିଚାର କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ସୂଚକ |RNA ର ଅବକ୍ଷୟ ନମୁନାରେ ବହୁ ସଂଖ୍ୟକ କ୍ଷୁଦ୍ର ଖଣ୍ଡକୁ ଆଣିବ, ତେଣୁ RNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ସଂଖ୍ୟା ଯାହାକି ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇପାରିବ ଏବଂ ରେଫରେନ୍ସ କ୍ରମ ଦ୍ୱାରା ଆବୃତ ହୋଇପାରିବ |% ୦% ଆଗରୋଜ୍ ଜେଲରେ ସମୁଦାୟ RNA ର ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ୱାରା RNA ଅଖଣ୍ଡତା ଯାଞ୍ଚ କରାଯାଇପାରିବ |ଏହି ପଦ୍ଧତି ନିଜେ ଜେଲକୁ ବିନ୍ୟାସ କରିପାରିବ, କିମ୍ବା ଅଖଣ୍ଡତା ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ପ୍ରିଫ୍ରେକେଟେଡ୍ ଇ-ଜେଲ୍ ™ ସିଷ୍ଟମ୍ ବ୍ୟବହାର କରିପାରିବ |ସମୁଦାୟ RNA ର 80% ରୁ ଅଧିକ ହେଉଛି ରାଇବୋସୋମାଲ୍ RNA, ଯାହା ମଧ୍ୟରୁ ଅଧିକାଂଶ 28S ଏବଂ 18S rRNA (ସ୍ତନ୍ୟପାୟୀ ପ୍ରଣାଳୀରେ) ଗଠିତ |ଉତ୍ତମ ଗୁଣବତ୍ତା RNA ଦୁଇଟି ସ୍ପଷ୍ଟ ଉଜ୍ଜ୍ୱଳ ଦଣ୍ଡ ଦେଖାଇବ, ଯାହାକି 28S ଏବଂ 18S ଉଜ୍ଜ୍ୱଳ ଦଣ୍ଡ ଯଥାକ୍ରମେ 5 Kb ଏବଂ 2 Kb ରେ, ଏବଂ ଅନୁପାତ 2: 1 ପାଖାପାଖି ରହିବ |ଯଦି ଏହା ଏକ ବିସ୍ତାର ଅବସ୍ଥାରେ ଅଛି, ଏହାର ଅର୍ଥ ହେଉଛି RNA ନମୁନା ଅବକ୍ଷୟ ହୋଇଥାଇପାରେ, ଏବଂ RNA ର ଗୁଣବତ୍ତା ପରୀକ୍ଷା କରିବା ପାଇଁ ପରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ ପଦ୍ଧତିକୁ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |

ଚିତ୍ର 2. ଅଗରୋଜ୍ ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଉପରେ ଖରାପ (ଗାଡ଼ି 2) ଏବଂ ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ RNA (ଗାଡ଼ି 3) ର ତୁଳନା

03 ଆଜିଲିଣ୍ଟ୍ ବାୟୋନାଲିଜର୍ |

ଉପରୋକ୍ତ ବର୍ଣ୍ଣିତ ଆଗରୋଜ୍ ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ପଦ୍ଧତି ସହିତ, ଯାହା ଆମକୁ RNA ର ଅଖଣ୍ଡତାକୁ ସରଳ ଏବଂ ଶୀଘ୍ର ଚିହ୍ନଟ କରିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିଥାଏ, ଆମେ ମଧ୍ୟ RNA ର ଅଖଣ୍ଡତା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ଆଜିଲିଣ୍ଟ ବାୟୋନାଲିଜର ବ୍ୟବହାର କରିପାରିବା |ଏହା RNA ର ଏକାଗ୍ରତା ଏବଂ ଅଖଣ୍ଡତାକୁ ଆକଳନ କରିବା ପାଇଁ ମାଇକ୍ରୋଫ୍ଲାଇଡିକ୍ସ, କ୍ୟାପିଲାରୀ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସର ଏକ ମିଶ୍ରଣ ବ୍ୟବହାର କରେ |RNA ନମୁନାର ପ୍ରୋଫାଇଲ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିବା ପାଇଁ ବିଲ୍ଟ-ଇନ୍ ଆଲଗୋରିଦମ ବ୍ୟବହାର କରି, ଆଜିଲିଣ୍ଟ ବାୟୋନାଲିଜର୍ ଏକ ରେଫରେନ୍ସ RNA ଅଖଣ୍ଡତା ମୂଲ୍ୟ, RNA ଅଖଣ୍ଡତା ସଂଖ୍ୟା (ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ RIN ଭାବରେ କୁହାଯାଏ) ଗଣନା କରିପାରିବ |RIN ର ମୂଲ୍ୟ ଯେତେ ଅଧିକ, RNA ର ଅଖଣ୍ଡତା ସେତେ ଅଧିକ (1 ଅତ୍ୟଧିକ ଖରାପ, 10 ହେଉଛି ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ) |RNA ସହିତ ଜଡିତ କିଛି ପରୀକ୍ଷଣ ଗୁଣାତ୍ମକ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ପାଇଁ RIN କୁ ପାରାମିଟର ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦେଇଥାଏ |ଏକ ଉଦାହରଣ ଭାବରେ ହାଇ-ଥ୍ରୋପଟ୍ ସିକ୍ୱେନ୍ସିଙ୍ଗ୍ ପରୀକ୍ଷଣଗୁଡିକ (ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ NGS ଭାବରେ କୁହାଯାଏ), ଅନ୍‌କୋମାଇନ୍ ™ ହ୍ୟୁମାନ୍ ଇମ୍ୟୁନ ରେପର୍ଟୋରିର ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ, ଯାହା ଥର୍ମୋ ଫିସରର ଅନ୍‌କୋମାଇନ୍ ପ୍ୟାନେଲ ସିରିଜରେ ବି ସେଲ୍ ଏବଂ ଟି ସେଲ୍ ଆଣ୍ଟିଜେନ୍ ରିସେପ୍ଟର ଚିହ୍ନଟ କରିବାରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, RIN ମୂଲ୍ୟ 4 ରୁ ଅଧିକ, ଅଧିକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ପଠନ ଏବଂ କ୍ଲୋନ ମାପ କରାଯାଇପାରେ (ଚିତ୍ର 3) |ବିଭିନ୍ନ ପ୍ୟାନେଲଗୁଡିକ ପାଇଁ ବିଭିନ୍ନ ସୁପାରିଶ କରାଯାଇଥିବା ରେଞ୍ଜ ଅଛି, ଏବଂ ପ୍ରାୟତ a ଏକ ଉଚ୍ଚ RIN ଅଧିକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ତଥ୍ୟ ଆଣିପାରେ |

ଚିତ୍ର 3, ଅଙ୍କୋମାଇନ୍ ™ ହ୍ୟୁମାନ୍ ଇମ୍ୟୁନ ରେପର୍ଟୋରି ପରୀକ୍ଷଣରେ, 4 ରୁ ଅଧିକ RIN ସହିତ ନମୁନା ଅଧିକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ପଠନ ଏବଂ ଟି ସେଲ୍ କ୍ଲୋନ୍ ଚିହ୍ନଟ କରିପାରିବ |【2】

ତଥାପି, RIN ମୂଲ୍ୟରେ ମଧ୍ୟ କିଛି ସୀମା ଅଛି |ଯଦିଓ NGS ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ତଥ୍ୟର ଗୁଣବତ୍ତା ସହିତ RIN ର ଉଚ୍ଚ ସମ୍ପର୍କ ଅଛି, ଏହା FFPE ନମୁନା ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ନୁହେଁ |FFPE ନମୁନାଗୁଡିକ ଦୀର୍ଘ ସମୟ ଧରି ରାସାୟନିକ ଭାବରେ ଚିକିତ୍ସିତ ହୋଇଆସୁଥିଲା, ଏବଂ ବାହାର କରାଯାଇଥିବା RNA ର ସାଧାରଣତ relatively ଅପେକ୍ଷାକୃତ କମ୍ RIN ମୂଲ୍ୟ ଥାଏ |ତଥାପି, ଏହାର ଅର୍ଥ ନୁହେଁ ଯେ ପରୀକ୍ଷଣର ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ତଥ୍ୟ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ ସନ୍ତୋଷଜନକ ନୁହେଁ |FFPE ନମୁନାଗୁଡିକର ଗୁଣବତ୍ତାକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ଆକଳନ କରିବାକୁ, ଆମକୁ RIN ବ୍ୟତୀତ ମାପ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପଡିବ |RIN ସହିତ, ଆଜିଲିଣ୍ଟ୍ ବାୟୋନାଲିଜର୍ ମଧ୍ୟ RNA ଗୁଣର ଏକ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ପାରାମିଟର ଭାବରେ DV200 ମୂଲ୍ୟ ଗଣନା କରିପାରିବ |DV200 ହେଉଛି ଏକ ପାରାମିଟର ଯାହା RNA ନମୁନାରେ 200 ବିପିରୁ ଅଧିକ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଅନୁପାତ ଗଣନା କରେ |RIN ଅପେକ୍ଷା DV200 ହେଉଛି FFPE ନମୁନା ଗୁଣର ଏକ ଉତ୍ତମ ସୂଚକ |FFPE ଦ୍ extract ାରା ବାହାର କରାଯାଇଥିବା RNA ପାଇଁ, ଏହାର ଜିନ୍ ସଂଖ୍ୟା ସହିତ ଏହାର ବହୁତ ଉଚ୍ଚ ସମ୍ପର୍କ ଅଛି ଯାହା ଫଳପ୍ରଦ ଭାବରେ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇପାରିବ ଏବଂ ଜିନ୍ ର ବିବିଧତା [3] |ଯଦିଓ DV200 FFPE ର ଗୁଣାତ୍ମକ ଚିହ୍ନଟରେ ଥିବା ତ୍ରୁଟିଗୁଡିକ ପାଇଁ ପୂରଣ କରିପାରିବ, ତଥାପି ଆଜିଲିଣ୍ଟ ବାୟୋନାଲିଜର RNA ନମୁନାରେ ଗୁଣାତ୍ମକ ସମସ୍ୟାକୁ ବିସ୍ତୃତ ଭାବରେ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିପାରିବ ନାହିଁ, ନମୁନାରେ ଇନହିବିଟର ଅଛି କି ନାହିଁ |ଇନହିବିଟରମାନେ ନିଜେ ଡାଉନ୍ଷ୍ଟ୍ରିମ ପରୀକ୍ଷଣର ଏମ୍ପ୍ଲାଇସିଙ୍ଗ୍ ଦକ୍ଷତାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିପାରେ ଏବଂ ଉପଯୋଗୀ ତଥ୍ୟର ପରିମାଣକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରେ |ନମୁନାରେ ଏକ ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ଅଛି କି ନାହିଁ ଜାଣିବା ପାଇଁ, ଆମେ ପରବର୍ତ୍ତୀ ବର୍ଣ୍ଣିତ ପ୍ରକୃତ-ସମୟ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ ପରିମାଣିକ PCR ପଦ୍ଧତି ଗ୍ରହଣ କରିପାରିବା |

04 ବାସ୍ତବ ସମୟ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR |

ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ପଦ୍ଧତି କେବଳ ନମୁନାରେ ଥିବା ପ୍ରତିବନ୍ଧକକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିପାରିବ ନାହିଁ, ବରଂ FFPE ନମୁନାରେ RNA ର ଗୁଣକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ପ୍ରତିଫଳିତ କରିପାରିବ |ଆଜିଲିଣ୍ଟ ଜ bi ବିକ ବିଶ୍ଳେଷଣକାରୀଙ୍କ ତୁଳନାରେ, ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପରିମାଣିକ ଉପକରଣଗୁଡ଼ିକ ଏହାର ବ୍ୟାପକ ପ୍ରୟୋଗ ହେତୁ ପ୍ରମୁଖ ଜ ological ବ ଲାବୋରେଟୋରୀଗୁଡିକରେ ଅଧିକ ଲୋକପ୍ରିୟ |RNA ନମୁନାଗୁଡିକର ଗୁଣବତ୍ତା ପରୀକ୍ଷା କରିବାକୁ, ଆମକୁ କେବଳ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ପାଇଁ ପ୍ରାଇମର୍ ପ୍ରୋବ କ୍ରୟ କିମ୍ବା ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବାକୁ ପଡିବ, ଯେପରିକି GUSB (ବିଲେଇ ନଂ। Hs00939627) |ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିମାଣିକ ପରୀକ୍ଷଣ କରିବା ପାଇଁ ଏହି ପ୍ରାଇମର୍, ପ୍ରୋବ ଏବଂ ମାନକ (ଜଣାଶୁଣା ଏକାଗ୍ରତାର ମୋଟ RNA) ବ୍ୟବହାର କରି, ପ୍ରଭାବଶାଳୀ RNA ଖଣ୍ଡ ଏକାଗ୍ରତାକୁ RNA ଗୁଣର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ମାନକ ଭାବରେ ଗଣନା କରାଯାଇପାରେ (କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ RNA ପରିମାଣ (FRQ)) |ଏକ NGS ପରୀକ୍ଷଣରେ, ଆମେ ଜାଣିଲୁ ଯେ RNA ନମୁନାଗୁଡ଼ିକର FRQ ର ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ତଥ୍ୟ ପରିମାଣ ସହିତ ବହୁତ ଉଚ୍ଚ ସମ୍ପର୍କ ଅଛି |0.2ng / uL FRQ ରୁ ଅଧିକ ସମସ୍ତ ନମୁନା ପାଇଁ, ଅତିକମରେ 70% ପଠନ ରେଫରେନ୍ସ କ୍ରମକୁ ଫଳପ୍ରଦ ଭାବରେ କଭର୍ କରିପାରିବ (ଚିତ୍ର 4) |

ଚିତ୍ର 4, ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପରିମାଣିକ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଥିବା FRQ ମୂଲ୍ୟରେ NGS ପରୀକ୍ଷଣରେ ପ୍ରାପ୍ତ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ତଥ୍ୟ ସହିତ ବହୁତ ଉଚ୍ଚ ସମ୍ପର୍କ (R2> 0.9) ଅଛି |ଲାଲ୍ ରେଖା ହେଉଛି FRQ ମୂଲ୍ୟ 0.2 ng / uL (log10 = -0.7) ସହିତ ସମାନ |【4】

FFPE ନମୁନା ପାଇଁ ପ୍ରଯୁଜ୍ୟ ହେବା ସହିତ, ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ ପରିମାଣିକ PCR ପଦ୍ଧତି ମଧ୍ୟ ନମୁନାରେ ଇନହିବିଟରଗୁଡ଼ିକୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ନୀରିକ୍ଷଣ କରିପାରିବ |ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ପଜିଟିଭ୍ କଣ୍ଟ୍ରୋଲ୍ (ଆଇପିସି) ଏବଂ ଏହାର ଆସେ ସହିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀରେ ଚିହ୍ନଟ ହେବାକୁ ଥିବା ନମୁନାକୁ ଆମେ ଯୋଡିପାରିବା, ଏବଂ ତା’ପରେ Ct ମୂଲ୍ୟ ପାଇବା ପାଇଁ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପରିମାଣ କାର୍ଯ୍ୟ କରିପାରିବା |ନୋ-ନମୁନା ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଯଦି Ct ମୂଲ୍ୟ Ct ମୂଲ୍ୟଠାରୁ ପଛରେ ଥାଏ, ତେବେ ଏହା ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ନମୁନାରେ ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ଉପସ୍ଥିତ ଅଛି ଏବଂ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦକ୍ଷତାକୁ ପ୍ରତିରୋଧ କରିଥାଏ |

05 କ୍ୟୁବିଟ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗ ପଦ୍ଧତି |

କ୍ୟୁବିଟ୍ ଫ୍ଲୋରୋମିଟର ହେଉଛି ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏକାଗ୍ରତା ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧତା ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ ଛୋଟ ଉପକରଣ, ଯାହା କାର୍ଯ୍ୟ କରିବା ସହଜ ଏବଂ ପ୍ରାୟ ପ୍ରତ୍ୟେକ ମଲିକୁଲାର ବାୟୋଲୋଜି ଲାବୋରେଟୋରୀରେ ବିଦ୍ୟମାନ |ଏହା ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ର ଏକାଗ୍ରତାକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ଗଣନା କରେ ଏବଂ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍-ବାଇଣ୍ଡ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗ (କ୍ୟୁବିଟ୍ ଚିହ୍ନଟ ରିଜେଣ୍ଟ୍) ଚିହ୍ନଟ କରେ |କ୍ୟୁବିଟ୍ ର ଉଚ୍ଚ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଅଛି, ଏବଂ ସଠିକ୍ ଭାବରେ RNA କୁ pg / µL ଏକାଗ୍ରତା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ପରିମାଣ କରିପାରିବ |ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏକାଗ୍ରତାକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ପରିମାଣ କରିବାର ଜଣାଶୁଣା କ୍ଷମତା ସହିତ, ଥର୍ମୋ ଫିସରର ନୂତନତମ ମଡେଲ୍ କ୍ୟୁବିଟ୍ 4.0 ମଧ୍ୟ RNA ର ଅଖଣ୍ଡତା ଚିହ୍ନଟ କରିପାରିବ |କ୍ୟୁବିଟ୍ 4.0′s RNA ଚିହ୍ନଟ ପ୍ରଣାଳୀ (RNA IQ Assay) ଏକାସାଙ୍ଗରେ ଦୁଇଟି ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗ ଚିହ୍ନଟ କରି RNA ର ଅଖଣ୍ଡତାକୁ ଚିହ୍ନଟ କରେ |ଏହି ଦୁଇଟି ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗ ଯଥାକ୍ରମେ ବଡ଼ ଖଣ୍ଡ ଏବଂ RNA ର ଛୋଟ ଖଣ୍ଡ ସହିତ ବାନ୍ଧି ହୋଇପାରେ |ଏହି ଦୁଇଟି ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗ ନମୁନାରେ RNA ର ବଡ଼ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଅନୁପାତ ସୂଚାଇଥାଏ, ଏବଂ ଏଥିରୁ RNA ଗୁଣକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରୁଥିବା IQ (ଅଖଣ୍ଡତା ଏବଂ ଗୁଣବତ୍ତା) ମୂଲ୍ୟ ଗଣନା କରାଯାଇପାରେ |IQ ମୂଲ୍ୟ ଉଭୟ FFPE ଏବଂ ଅଣ- FFPE ନମୁନା ପାଇଁ ପ୍ରଯୁଜ୍ୟ, ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ କ୍ରମିକ ଗୁଣ ଉପରେ ଏହାର ବହୁତ ପ୍ରଭାବ ଅଛି |ଏକ ଉଦାହରଣ ଭାବରେ NGS ପରୀକ୍ଷଣକୁ ଗ୍ରହଣ କରି, Ion torrent ™ ପ୍ଲାଟଫର୍ମରେ କରାଯାଇଥିବା RNA-Seq ପରୀକ୍ଷଣ ପରୀକ୍ଷଣରେ, IQ ମୂଲ୍ୟ 4 ରୁ ଅଧିକ ଥିବା ଅଧିକାଂଶ ନମୁନାରେ ଅତି କମରେ 50% ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ପଠନ ରହିଥିଲା ​​(ଚିତ୍ର 5) |ଉପରୋକ୍ତ ଚିହ୍ନଟ ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକ ସହିତ ତୁଳନା କରାଯାଏ, କ୍ୟୁବିଟ୍ ଆଇକ୍ୟୁ ଆସେ କେବଳ କାର୍ଯ୍ୟ କରିବା ପାଇଁ ଅଧିକ ସୁବିଧାଜନକ ନୁହେଁ ଏବଂ କମ୍ ସମୟ ନେଇଥାଏ (ପା minutes ୍ଚ ମିନିଟ୍ ମଧ୍ୟରେ), କିନ୍ତୁ ମାପାଯାଇଥିବା ପାରାମିଟର IQ ମୂଲ୍ୟ ଏବଂ ଡାଉନ୍ଷ୍ଟ୍ରିମ ପରୀକ୍ଷଣର ଡାଟା ଗୁଣବତ୍ତା ମଧ୍ୟରେ ମଧ୍ୟ ବହୁତ ଭଲ ସମ୍ପର୍କ ଅଛି |

ଚିତ୍ର 5, କ୍ୟୁବିଟ୍ RNA IQ ମୂଲ୍ୟ ଏବଂ RNA-Seq ର ମ୍ୟାପ୍ ହୋଇଥିବା ପଠନ ମଧ୍ୟରେ ଏକ ବଡ଼ ସମ୍ପର୍କ ଅଛି |【5】

ଉପରୋକ୍ତ ପରିଚୟ ମାଧ୍ୟମରେ, ମୁଁ ବିଶ୍ୱାସ କରେ ଯେ ବିଭିନ୍ନ RNA ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପଦ୍ଧତି ବିଷୟରେ ସମସ୍ତଙ୍କର ଯଥେଷ୍ଟ ବୁ understanding ାମଣା ଅଛି |ଅଭ୍ୟାସରେ, ଆପଣ ବାଛିପାରିବେ |ନମୁନା ପ୍ରକାର ଏବଂ ବିଦ୍ୟମାନ ଯନ୍ତ୍ର ଅନୁଯାୟୀ ଅନୁରୂପ ପଦ୍ଧତି |କେବଳ RNA ର ଗୁଣବତ୍ତାକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରି ଆମେ ଖରାପ ନମୁନା ଗୁଣ ଦ୍ୱାରା ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷଣଗୁଡିକର ବିଫଳତାକୁ ଏଡାଇ ପାରିବା, ଯାହାଦ୍ୱାରା ମୂଲ୍ୟବାନ ସମୟ, ଶକ୍ତି ଏବଂ ମୂଲ୍ୟ ସଞ୍ଚୟ ହୁଏ |

ସନ୍ଦର୍ଭ ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ:

ପଶୁ ସମୁଦାୟ RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନ କିଟ୍ |

ସେଲ୍ ସମୁଦାୟ RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନ କିଟ୍ |

ସନ୍ଦର୍ଭ

【1】 ସ୍କ୍ରୋଡର୍, ଏ।, ମୁଲେର, ଓ।, ଷ୍ଟକର୍, ଏସ୍ ଇତ୍ୟାଦି |RIN: RNA ମାପରେ ଅଖଣ୍ଡତା ମୂଲ୍ୟ ନ୍ୟସ୍ତ କରିବା ପାଇଁ ଏକ RNA ଅଖଣ୍ଡତା ସଂଖ୍ୟା |BMC Molecular Biol 7, 3 (2006) |https:// doi .org / 10.1186 / 1471-21 99-7-3

【2】 ଅଙ୍କୋମାଇନ୍ ହ୍ୟୁମାନ୍ ଇମ୍ୟୁନ ରେପର୍ଟୋୟର ୟୁଜର୍ ଗାଇଡ୍ (ପବ୍। ନମ୍ବର MAN0017438 Rev. C.0) |

【3 ah Leah C Wehmas, Charles E Wood, Brian N Chorley, Carole L Yauk, Gail M Nelson, Susan D Hester, ଆରକାଇଭ୍ ଫର୍ମାଲିନ୍-ଫିକ୍ସଡ୍ ପାରାଫିନ୍-ଏମ୍ବେଡ୍ ଟିସୁ ନମୁନା, ବିଷାକ୍ତ ବିଜ୍ଞାନ, ଭଲ୍ୟୁମ୍ 170, ଇସୁ 2, ଅଗଷ୍ଟ 20193, ପୃଷ୍ଠା 357https://doi.org/10.1093/toxsci/