ପ୍ରାରମ୍ଭ ସାମଗ୍ରୀ: RNA |
ପରିମାଣିକ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ PCR (RT-qPCR) ହେଉଛି ଏକ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପଦ୍ଧତି ଯାହା PCR ପରୀକ୍ଷଣରେ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ପଦାର୍ଥ ଭାବରେ RNA ବ୍ୟବହାର କରିଥାଏ |ଏହି ପଦ୍ଧତିରେ, ମୋଟ RNA କିମ୍ବା ମେସେଞ୍ଜର RNA (mRNA) ପ୍ରଥମେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ଦ୍ୱାରା ସଂପୃକ୍ତ DNA (cDNA) ରେ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ସିତ |ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ, ଏକ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ cDNA ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ qPCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରାଯାଇଥିଲା |ଜିନ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ଆନାଲିସିସ୍, RNA ହସ୍ତକ୍ଷେପ ବ valid ଧତା, ମାଇକ୍ରୋଏରେ ବ valid ଧିକରଣ, ପାଥୋଜେନ ଚିହ୍ନଟ, ଜେନେଟିକ୍ ପରୀକ୍ଷଣ ଏବଂ ରୋଗ ଅନୁସନ୍ଧାନ ସହିତ RT-qPCR ବିଭିନ୍ନ ମଲିକୁଲାର ଜୀବବିଜ୍ଞାନ ପ୍ରୟୋଗରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଛି |
RT-qPCR ପାଇଁ ଗୋଟିଏ ସୋପାନ ଏବଂ ଦୁଇ-ସୋପାନ ପଦ୍ଧତି |
RT-qPCR ଗୋଟିଏ ସୋପାନ କିମ୍ବା ଦୁଇ-ସୋପାନ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା ସମ୍ପନ୍ନ ହୋଇପାରିବ |ଗୋଟିଏ ପର୍ଯ୍ୟାୟ RT-qPCR ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଏବଂ PCR ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ କୁ ଏକତ୍ର କରିଥାଏ, ଯାହା ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ଏବଂ DNA ପଲିମେରେଜ୍ କୁ ସମାନ ବଫର୍ ଅବସ୍ଥାରେ ସମାନ ଟ୍ୟୁବରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମାପ୍ତ କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦେଇଥାଏ |ଗୋଟିଏ ସୋପାନ RT-qPCR କେବଳ କ୍ରମ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଇମର୍ ବ୍ୟବହାର ଆବଶ୍ୟକ କରେ |ଦୁଇ-ପର୍ଯ୍ୟାୟ RT-qPCR ରେ, ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଏବଂ PCR ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଦୁଇଟି ଟ୍ୟୁବରେ କରାଯାଏ, ବିଭିନ୍ନ ଅପ୍ଟିମାଇଜଡ୍ ବଫର୍, ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅବସ୍ଥା ଏବଂ ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍ କ ies ଶଳ ବ୍ୟବହାର କରି |
| ସୁବିଧା | ଅସୁବିଧା | |
| ଗୋଟିଏ ସୋପାନ | | ଏହି ପଦ୍ଧତିରେ କମ୍ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ତ୍ରୁଟି ଅଛି କାରଣ ଉଭୟ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଗୋଟିଏ ଟ୍ୟୁବରେ କରାଯାଇଥାଏ |
କମ୍ ପାଇପେଟ୍ ଷ୍ଟେପ୍ ପ୍ରଦୂଷଣର ଆଶଙ୍କା ହ୍ରାସ କରେ |
ଉଚ୍ଚ-ଥ୍ରୋପଟ୍ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ / ସ୍କ୍ରିନିଂ, ଦ୍ରୁତ ଏବଂ ପୁନ oduc ପ୍ରବୃତ୍ତି ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ | | ଦୁଇ-ସୋପାନ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ପୃଥକ ଭାବରେ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରାଯାଇପାରିବ ନାହିଁ |
ଯେହେତୁ ଦୁଇ-ପଦକ୍ଷେପର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ମିଶ୍ରଣ କରି ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅବସ୍ଥା ସଙ୍କଟାପନ୍ନ ହୁଏ, ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଦୁଇ-ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପଦ୍ଧତି ପରି ଭଲ ନୁହେଁ |
ଗୋଟିଏ ନମୁନା ଦ୍ୱାରା ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଥିବା ଲକ୍ଷ୍ୟ ସଂଖ୍ୟା କମ୍ ଅଟେ | |
| ଦୁଇଟି ପଦକ୍ଷେପ | ସ୍ଥିର cDNA ଲାଇବ୍ରେରୀ ସୃଷ୍ଟି କରିବାର କ୍ଷମତା ଯାହା ଦୀର୍ଘ ସମୟ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇପାରିବ ଏବଂ ଏକାଧିକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରିବ |
ଏକାଧିକ cDNA ଲାଇବ୍ରେରୀଗୁଡ଼ିକର ଆବଶ୍ୟକତା ବିନା ସମାନ cDNA ଲାଇବ୍ରେରୀରୁ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ଏବଂ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇପାରିବ |
ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବଫର୍ ଏବଂ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅବସ୍ଥା ଯାହା ଏକକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ୍ ସକ୍ଷମ କରେ |
ଟ୍ରିଗର ଅବସ୍ଥାଗୁଡ଼ିକର ନମନୀୟ ଚୟନ | | ଏକାଧିକ ଟ୍ୟୁବ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବା, ଏବଂ ଅଧିକ ପାଇପେଟିଂ ଷ୍ଟେପ୍ DNA ପ୍ରଦୂଷଣର ଆଶଙ୍କା ବ increases ାଇଥାଏ, ଏବଂ ସମୟ ସାପେକ୍ଷ |
ଗୋଟିଏ ସୋପାନ ପଦ୍ଧତି ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ୍ ଆବଶ୍ୟକ କରେ | |
ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ:
RT-qPCR Easyᵀᴹ (ଗୋଟିଏ ଷ୍ଟେପ୍) -SYBR ସବୁଜ I |
RT-qPCR Easyᵀᴹ (ଗୋଟିଏ ଷ୍ଟେପ୍) -ଟାକମ୍ୟାନ୍ |
ପ୍ରଥମ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ CDNA ସିନ୍ଥେସିସ୍ ପାଇଁ RT Easyᵀᴹ I Master Premix |
ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR Easyᵀᴹ-SYBR ସବୁଜ I କିଟ୍ |
ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR Easyᵀᴹ-Taqman |
ସମୁଦାୟ RNA ଏବଂ mRNA ର ଚୟନ |
ଏକ RT-qPCR ପରୀକ୍ଷଣ ଡିଜାଇନ୍ କରିବାବେଳେ, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପାଇଁ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ ମୋଟ RNA କିମ୍ବା ଶୁଦ୍ଧ mRNA ବ୍ୟବହାର କରାଯିବ କି ନାହିଁ ତାହା ସ୍ଥିର କରିବା ଜରୁରୀ |ଯଦିଓ mRNA ସାମାନ୍ୟ ଅଧିକ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ପ୍ରଦାନ କରିବାରେ ସକ୍ଷମ ହୋଇପାରେ, ତଥାପି ମୋଟ RNA ବାରମ୍ବାର ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ଏହାର କାରଣ ହେଉଛି, mRNA ଅପେକ୍ଷା ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ପଦାର୍ଥ ଭାବରେ ମୋଟ RNA ର ଅଧିକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ସୁବିଧା ଅଛି |ପ୍ରଥମେ, ପ୍ରକ୍ରିୟା କମ୍ ଶୁଦ୍ଧକରଣ ପଦକ୍ଷେପ ଆବଶ୍ୟକ କରେ, ଯାହା ଟେମ୍ପଲେଟର ଉତ୍ତମ ପରିମାଣିକ ପୁନରୁଦ୍ଧାର ଏବଂ ସେଲ୍ ସଂଖ୍ୟା ଆରମ୍ଭ କରିବା ପାଇଁ ଫଳାଫଳର ଉତ୍ତମ ସ୍ ization ାଭାବିକତା ନିଶ୍ଚିତ କରେ |ଦ୍ୱିତୀୟତ it, ଏହା mRNA ସମୃଦ୍ଧ ପଦକ୍ଷେପକୁ ଏଡାଇଥାଏ, ଯାହା ବିଭିନ୍ନ mRNA ର ବିଭିନ୍ନ ପୁନରୁଦ୍ଧାର ହେତୁ ଖରାପ ଫଳାଫଳର ସମ୍ଭାବନାକୁ ଏଡାଇ ଦେଇପାରେ |ସାମଗ୍ରିକ ଭାବରେ, ଯେହେତୁ ଅଧିକାଂଶ ପ୍ରୟୋଗରେ ଲକ୍ଷ୍ୟର ଜିନ୍ ର ଆପେକ୍ଷିକ ପରିମାଣ ଚିହ୍ନଟର ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ, ଅଧିକାଂଶ କ୍ଷେତ୍ରରେ ମୋଟ RNA ଅଧିକ ଉପଯୁକ୍ତ ଅଟେ |
ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରାଇମର୍ |
ଦୁଇ-ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପଦ୍ଧତିରେ, cDNA ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ପ୍ରାଥମିକ କରିବା ପାଇଁ ତିନୋଟି ଭିନ୍ନ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ: ଅଲିଗୋ (dT) ପ୍ରାଇମର୍, ରାଣ୍ଡମ ପ୍ରାଇମର୍, କିମ୍ବା କ୍ରମ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଇମର୍ |ସାଧାରଣତ ,, ଅଲିଗୋ (dT) ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ରାଣ୍ଡମ୍ ପ୍ରାଇମର୍ ମିଶ୍ରଣରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ଏହି ପ୍ରାଇମର୍ଗୁଡ଼ିକ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ mRNA ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ ସହିତ ଆନ୍ନାଲ୍ ଏବଂ ସିନ୍ଥେସିସ୍ ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରାରମ୍ଭ ବିନ୍ଦୁ ସହିତ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ପ୍ରଦାନ କରେ |
| ପ୍ରାଥମିକ ଚୟନ | ଗଠନ ଏବଂ କାର୍ଯ୍ୟ | ସୁବିଧା | ଅସୁବିଧା |
| ଅଲିଗୋ (dT) ପ୍ରାଇମର୍ (କିମ୍ବା ଲଙ୍କିତ ଅଲିଗୋ (dT) ପ୍ରାଇମର୍) | MRNA ର ପଲି (A) ଲାଞ୍ଜରେ ଥିମାଇନ୍ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ ପାଇଁ ବିସ୍ତାରିତ ଆନ୍ଲିଙ୍ଗ୍;ଆଙ୍କର୍ ଅଲିଗୋ (dT) ପ୍ରାଇମର୍ 3 ′ ଶେଷରେ (ଆଙ୍କର୍ ସାଇଟ୍) ଏକ G, C, କିମ୍ବା A ଧାରଣ କରେ | | ପଲି (A) -ଟାଇଲ୍ mRNA ରୁ ପୂର୍ଣ୍ଣ-ଲମ୍ବ cDNA ର ସିନ୍ଥେସିସ୍ |
କମ୍ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ସାମଗ୍ରୀ ଉପଲବ୍ଧ ହେଲେ ପ୍ରଯୁଜ୍ୟ |
ଆଙ୍କରିଙ୍ଗ୍ ସାଇଟ୍ ନିଶ୍ଚିତ କରେ ଯେ mRNA ର 5 ′ ପଲି (A) ଲାଞ୍ଜ ସହିତ ଅଲିଗୋ (dT) ପ୍ରାଇମର୍ ବାନ୍ଧେ | | କେବଳ ପଲି (ଏ) ଲାଞ୍ଜ ସହିତ ଜିନ୍ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ |
ପଲି (A) ରେ ପ୍ରିମିଙ୍ଗ୍ ସାଇଟ୍ * 2 ରୁ ଛୋଟ CDNA ପ୍ରାପ୍ତ କରନ୍ତୁ |
3 ′ ଶେଷ * କୁ ବାନ୍ଧିବା ପାଇଁ ପକ୍ଷପାତ |
* ଯଦି ଲଙ୍କାଗୁଣ୍ଡ ଅଲିଗୋ (dT) ପ୍ରାଇମର୍ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ ତେବେ ଏହି ସମ୍ଭାବନାକୁ କମ୍ କରାଯାଇଥାଏ | |
| ରାଣ୍ଡମ୍ ପ୍ରାଇମର୍ |
| ଲମ୍ବ 6 ରୁ 9 ବେସ୍, ଯାହା RNA ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ସମୟରେ ଏକାଧିକ ସାଇଟ୍ ସହିତ ଆନ୍ନାଲ୍ ହୋଇପାରେ | | ସମସ୍ତ RNA (tRNA, rRNA, ଏବଂ mRNA) ପାଇଁ ଆନ୍ନାଲ୍ |
ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଦଳୀୟ ସଂରଚନା ସହିତ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ, କିମ୍ବା ଯେତେବେଳେ କମ୍ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ପଦାର୍ଥ ଉପଲବ୍ଧ |
ଉଚ୍ଚ cDNA ଅମଳ | | ସମସ୍ତ RNA ରୁ cDNA ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ହୋଇଛି, ଯାହା ସାଧାରଣତ desired ଇଚ୍ଛା ହୁଏ ନାହିଁ ଏବଂ ଲକ୍ଷ୍ୟ mRNA ର ସଙ୍କେତକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରେ |
ଛୋଟ cDNA ପ୍ରାପ୍ତ କରନ୍ତୁ | |
| କ୍ରମ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଇମର୍ | | ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ mRNA କ୍ରମକୁ ଲକ୍ଷ୍ୟ କରି କଷ୍ଟମ୍ ପ୍ରାଇମର୍ | | ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ cDNA ଲାଇବ୍ରେରୀ |
ସମ୍ବେଦନଶୀଳତାକୁ ଉନ୍ନତ କରନ୍ତୁ |
ଓଲଟା qPCR ପ୍ରାଇମର୍ ବ୍ୟବହାର କରି | | କେବଳ ଗୋଟିଏ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜିନ୍ ର ସିନ୍ଥେସିସ୍ ମଧ୍ୟରେ ସୀମିତ | |
ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ |
ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ହେଉଛି ଏକ ଏନଜାଇମ୍ ଯାହା DNA କୁ ସିନ୍ଥାଇଜ୍ କରିବା ପାଇଁ RNA ବ୍ୟବହାର କରେ |କେତେକ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ରେ RNase କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଅଛି ଏବଂ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପରେ RNA-DNA ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡରେ RNA ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡକୁ ଖରାପ କରିପାରେ |ଯଦି ଏଥିରେ RNase ଏନଜାଇମାଟିଭ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ନାହିଁ, ଅଧିକ qPCR ଦକ୍ଷତା ପାଇଁ RNaseH ଯୋଗ କରାଯାଇପାରିବ |ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ ଏନଜାଇମ୍ ଗୁଡିକରେ ମଲୋନି ମୁରିନ୍ ଲ୍ୟୁକେମିଆ ଭାଇରସ୍ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ଏବଂ ଏଭିଆନ୍ ମାଇଲୋବ୍ଲାଷ୍ଟୋମା ଭାଇରସ୍ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ |RT-qPCR ପାଇଁ, ଅଧିକ ଥର୍ମୋଷ୍ଟେବିଲିଟି ସହିତ ଏକ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ବାଛିବା ଆଦର୍ଶ ଅଟେ, ଯାହା ଦ୍ higher ାରା ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରାରେ ସିଡିଏନ୍ଏ ସିନ୍ଥେସିସ୍ କରାଯାଇପାରିବ, ଉଚ୍ଚ ମାଧ୍ୟମିକ ସଂରଚନା ସହିତ RNA ର ସଫଳ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ସହିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ସେମାନଙ୍କର ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ବଜାୟ ରଖିବ, ଫଳସ୍ୱରୂପ ଅଧିକ cDNA ଅମଳ ହେବ |
ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ:
ଫୋରେସି M-MLV ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ |
ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ର RNase H କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ |
RNaseH RNA-DNA ଡୁପ୍ଲେକ୍ସରୁ RNA ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡକୁ ଖରାପ କରିବାରେ ସକ୍ଷମ, ଯାହା ଦ୍ double ିଗୁଣିତ DNA ର ଦକ୍ଷତାର ସହିତ ସିନ୍ଥେସିସ୍ ଅନୁମତି ଦିଏ |ଯଦିଓ, ଲମ୍ବା mRNA କୁ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରିବାବେଳେ, RNA ଅକାଳରେ ଖରାପ ହୋଇପାରେ, ଫଳସ୍ୱରୂପ cDNA କଟିଯାଏ |ତେଣୁ, ଲମ୍ବା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟର ସିନ୍ଥେସିସ୍ ଚାହିଁଲେ cDNA କ୍ଲୋନିଂ ସମୟରେ RNaseH କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ କମ୍ କରିବା ପ୍ରାୟତ beneficial ଲାଭଦାୟକ |ଏହାର ବିପରୀତରେ, RNase H କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ସହିତ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ qPCR ପ୍ରୟୋଗଗୁଡ଼ିକ ପାଇଁ ଲାଭଦାୟକ ଅଟେ କାରଣ PCR ର ପ୍ରଥମ ଚକ୍ରରେ ସେମାନେ RNA-DNA ଡୁପ୍ଲେକ୍ସର ତରଳିବା ବୃଦ୍ଧି କରନ୍ତି |
ପ୍ରାଥମିକ ଡିଜାଇନ୍ |
RT-qPCR ରେ qPCR ଷ୍ଟେପ୍ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ PCR ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକ ଏକ ଏକ୍ସନ୍-ଏକ୍ସନ୍ ଜଙ୍କସନକୁ ବିସ୍ତାର କରିବା ପାଇଁ ଆଦର୍ଶ ଭାବରେ ଡିଜାଇନ୍ ହେବା ଉଚିତ, ଯେଉଁଠାରେ ଏକ ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ପ୍ରାଇମର୍ ଏକ ପ୍ରକୃତ ଏକ୍ସନ୍-ଇଣ୍ଟ୍ରନ୍ ସୀମା ବିସ୍ତାର କରିପାରେ |ଯେହେତୁ ଇଣ୍ଟ୍ରନ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ଜେନୋମିକ୍ DNA କ୍ରମଗୁଡିକ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇ ନାହିଁ, ଏହି ଡିଜାଇନ୍ ଜେନୋମିକ୍ DNA କୁ ଦୂଷିତ କରିବା ଦ୍ୱାରା ମିଥ୍ୟା ପଜିଟିଭ୍ ବିପଦକୁ ହ୍ରାସ କରିଥାଏ |
ଯଦି ଏକ୍ସନ୍ କିମ୍ବା ଏକ୍ସନ୍-ଏକ୍ସନ୍ ସୀମାକୁ ପୃଥକ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରାଥମିକଗୁଡିକ ଡିଜାଇନ୍ ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ, ତେବେ ଜେନୋମିକ୍ DNA ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ହଟାଇବା ପାଇଁ RNA ନମୁନାକୁ RNase ମୁକ୍ତ DNase I କିମ୍ବା dsDNase ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରିବା ଆବଶ୍ୟକ ହୋଇପାରେ |
RT-qPCR ନିୟନ୍ତ୍ରଣ |
ଡିଏନ୍ଏ ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ସମସ୍ତ RT-qPCR ପରୀକ୍ଷଣରେ ଏକ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ନେଗେଟିଭ୍ କଣ୍ଟ୍ରୋଲ୍ (-RT ନିୟନ୍ତ୍ରଣ) ଅନ୍ତର୍ଭୂକ୍ତ କରାଯିବା ଉଚିତ (ଯେପରିକି ପୂର୍ବ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରୁ ଜେନୋମିକ୍ DNA କିମ୍ବା PCR ଉତ୍ପାଦ) |ଏହି ନିୟନ୍ତ୍ରଣରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ବ୍ୟତୀତ ସମସ୍ତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଉପାଦାନ ରହିଥାଏ |ଯେହେତୁ ଏହି ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ସହିତ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ହୁଏ ନାହିଁ, ଯଦି PCR ବିସ୍ତାରଣ ପାଳନ କରାଯାଏ, DNA ରୁ ଦୂଷିତ ହେବାର ସମ୍ଭାବନା ଅଧିକ |
ପୋଷ୍ଟ ସମୟ: ଅଗଷ୍ଟ -02-2022 |
