ଆମେ ଅଭିଜ୍ଞ ଉତ୍ପାଦକ ହୋଇଛୁ |ବିଗ୍ ରିହାତି ପାଇଁ ଚାଇନାର ଉଚ୍ଚ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଏକ-ଷ୍ଟେପ୍ ପ୍ରୋବ Rt- ପାଇଁ ଏହାର ବଜାରର ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରମାଣପତ୍ରରେ ସଂଖ୍ୟାଗରିଷ୍ଠତା ହାସଲ କରିବା |Qpcrକିଟ୍ V2, ଗୁଣବତ୍ତା ହେଉଛି କାରଖାନାର ଜୀବନ, ​​ଗ୍ରାହକଙ୍କ ଚାହିଦା ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେବା ହେଉଛି କମ୍ପାନୀର ବଞ୍ଚିବା ଏବଂ ବିକାଶର ଉତ୍ସ, ଆମେ ସଚ୍ଚୋଟତା ଏବଂ ଉତ୍ତମ ବିଶ୍ୱାସ କାର୍ଯ୍ୟ ମନୋଭାବକୁ ପାଳନ କରୁ, ଆପଣଙ୍କ ଆଗମନକୁ ଅପେକ୍ଷା କରି!
ଆମେ ଅଭିଜ୍ଞ ଉତ୍ପାଦକ ହୋଇଛୁ |ଏହାର ବଜାରର ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରମାଣପତ୍ରରେ ସଂଖ୍ୟାଗରିଷ୍ଠତା ହାସଲ କରିବା |ଚାଇନା ଟ୍ୟାକ୍ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ |, Qpcr, ଆମର କମ୍ପାନୀ ପ୍ରତିଜ୍ଞା କରେ: ଯୁକ୍ତିଯୁକ୍ତ ମୂଲ୍ୟ, ସ୍ୱଳ୍ପ ଉତ୍ପାଦନ ସମୟ ଏବଂ ବିକ୍ରୟ ପରେ ସନ୍ତୋଷଜନକ ସେବା, ଆପଣ ଯେକ time ଣସି ସମୟରେ ଆମ କାରଖାନା ପରିଦର୍ଶନ କରିବାକୁ ଆପଣଙ୍କୁ ସ୍ୱାଗତ କରୁ |ଇଚ୍ଛା ବର୍ତ୍ତମାନ ଆମର ଏକତ୍ର ଏକ ସୁଖଦ ଏବଂ ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ବ୍ୟବସାୟ ହେଉ !!!

ବର୍ଣ୍ଣନା

ଏହି କିଟ୍ ଏକ ଅନନ୍ୟ ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ ସିଷ୍ଟମ୍ ବ୍ୟବହାର କରେ ଯାହା RT-qPCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ ସଂସ୍କୃତ କୋଷ ନମୁନାରୁ ଶୀଘ୍ର RNA ମୁକ୍ତ କରିପାରିବ, ଯାହାଦ୍ୱାରା ସମୟ ସାପେକ୍ଷ ଏବଂ ପରିଶ୍ରମୀ RNA ଶୁଦ୍ଧ ପ୍ରକ୍ରିୟା ଦୂର ହେବ |ମାତ୍ର 7 ମିନିଟରେ RNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ମିଳିପାରିବ |କିଟ୍ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଦତ୍ତ 5 × ସିଧାସଳଖ ଆରଟି ମିକ୍ସ ଏବଂ 2 × ସିଧାସଳଖ qPCR ମିକ୍ସ- SYBR ରେଜେଣ୍ଟଗୁଡିକ ଶୀଘ୍ର ଏବଂ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ପ୍ରକୃତ ସମୟର ପରିମାଣିକ PCR ଫଳାଫଳ ହାସଲ କରିପାରିବ |

5 × ସିଧାସଳଖ ଆରଟି ମିକ୍ସ ଏବଂ 2 × ସିଧାସଳଖ qPCR ମିକ୍ସ- SYBR ର ଦୃ strong ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ସହନଶୀଳତା ଅଛି, ଏବଂ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକର ଲାଇସେଟ୍ ସିଧାସଳଖ RT-qPCR ପାଇଁ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |ଏହି କିଟ୍ ରେ ଅନନ୍ୟ RNA ଉଚ୍ଚ-ଆଫିନିଟି ଫୋରେଜେନ୍ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ଏବଂ ହଟ୍ ଡି-ଟ୍ୟାକ୍ DNA ପଲିମେରେଜ୍, dNTP, MgCl ଧାରଣ କରେ |₂, ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବଫର୍, PCR ଅପ୍ଟିମାଇଜର୍ ଏବଂ ଷ୍ଟାବିଲାଇଜର୍ |

ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟକରଣ

200 × 20μl Rxns, 1000 × 20μl Rxns |

କିଟ୍ ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ |

ବ Features ଶିଷ୍ଟ୍ୟ ଏବଂ ସୁବିଧା

■ ସରଳ ଏବଂ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ: ସେଲ୍ ଡାଇରେକ୍ଟ୍ RT ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ସହିତ, RNA ନମୁନାଗୁଡିକ ମାତ୍ର 7 ମିନିଟରେ ମିଳିପାରିବ |

10 ନମୁନା ଚାହିଦା ଛୋଟ, ଯେହେତୁ 10 ଟି କୋଷ ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇପାରିବ |

■ ଉଚ୍ଚ ଥ୍ରୋପପୁଟ: ଏହା 384, 96, 24, 12, 6-କୂଅ ପ୍ଲେଟରେ ସଂସ୍କୃତ କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ଶୀଘ୍ର RNA ଚିହ୍ନଟ କରିପାରିବ |

■ ଡିଏନ୍ଏ ଇରେଜର ଶୀଘ୍ର ମୁକ୍ତ ହୋଇଥିବା ଜେନୋମଗୁଡ଼ିକୁ ଅପସାରଣ କରିପାରିବ, ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଫଳାଫଳ ଉପରେ ଏହାର ପ୍ରଭାବକୁ ବହୁ ମାତ୍ରାରେ ହ୍ରାସ କରିପାରିବ |

RT ଅପ୍ଟିମାଇଜଡ୍ RT ଏବଂ qPCR ସିଷ୍ଟମ୍ ଦୁଇ-ଷ୍ଟେପ୍ RT-PCR ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ କୁ ଅଧିକ କ୍ରିୟାଶୀଳ ଏବଂ PCR କୁ ଅଧିକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କରିଥାଏ ଏବଂ RT-qPCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରତିରୋଧକ ପାଇଁ ଅଧିକ ପ୍ରତିରୋଧୀ କରିଥାଏ |

କିଟ୍ ପ୍ରୟୋଗ |

ପ୍ରୟୋଗର ପରିସର: ସଂସ୍କୃତ କକ୍ଷ |

- ନମୁନା ଲାଇସିସ୍ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରକାଶିତ RNA: କେବଳ ଏହି କିଟ୍ ର RT-qPCR ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ପାଇଁ ପ୍ରଯୁଜ୍ୟ |

- କିଟ୍ ନିମ୍ନଲିଖିତ ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରିବ: ଜିନ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ଆନାଲିସିସ୍, siRNA- ମଧ୍ୟସ୍ଥ ଜିନ୍ ସିଲିଂ ପ୍ରଭାବର ଯାଞ୍ଚ, ଡ୍ରଗ୍ ସ୍କ୍ରିନିଂ ଇତ୍ୟାଦି |

ଚିତ୍ର

ସଂରକ୍ଷଣ ଏବଂ ସେଲଫ୍ ଲାଇଫ୍ |

ଏହି କିଟ୍ ର ଭାଗ I 4 ରେ ଗଚ୍ଛିତ ହେବା ଉଚିତ୍;ଭାଗ II -20 at ରେ ଗଚ୍ଛିତ ହେବା ଉଚିତ |

ଫୋରେଜେନ୍ ପ୍ରୋଟେଜ୍ ପ୍ଲସ୍ II 4 4 ରେ ଗଚ୍ଛିତ ହେବା ଉଚିତ, -20 at ରେ ଫ୍ରିଜ୍ କରନ୍ତୁ ନାହିଁ |

Reagent 2 × ସିଧାସଳଖ qPCR ମିକ୍ସ- SYBR ଅନ୍ଧାରରେ -20 at ରେ ଗଚ୍ଛିତ ହେବା ଉଚିତ;ଯଦି ବାରମ୍ବାର ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଏହାକୁ ସ୍ୱଳ୍ପ ମିଆଦି ଷ୍ଟୋରେଜ୍ ପାଇଁ 4 at ରେ ମଧ୍ୟ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇପାରିବ (10 ଦିନ ମଧ୍ୟରେ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ) .ଆପଣ ଅଭିଜ୍ଞ ଉତ୍ପାଦକ ହୋଇଛୁ |ବିଗ୍ ରିହାତି ପାଇଁ ଚାଇନାର ଉଚ୍ଚ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଏକ-ଷ୍ଟେପ୍ ପ୍ରୋବ Rt-Qpcr କିଟ୍ V2, ଗୁଣବତ୍ତା ହେଉଛି କାରଖାନାର ଜୀବନ, ​​ଗ୍ରାହକଙ୍କ ଚାହିଦା ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେବା ହେଉଛି କମ୍ପାନୀର ବଞ୍ଚିବା ଏବଂ ବିକାଶର ଉତ୍ସ, ଆମେ ସଚ୍ଚୋଟତା ଏବଂ ଉତ୍ତମ ବିଶ୍ୱାସ କାର୍ଯ୍ୟ ମନୋଭାବକୁ ପାଳନ କରୁଛୁ, ଆପଣଙ୍କ ଆଗମନକୁ ଅପେକ୍ଷା କରୁଛୁ!
ବଡ ରିହାତିଚାଇନା ଟ୍ୟାକ୍ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ |, Qpcr, ଆମର କମ୍ପାନୀ ପ୍ରତିଜ୍ଞା କରେ: ଯୁକ୍ତିଯୁକ୍ତ ମୂଲ୍ୟ, ସ୍ୱଳ୍ପ ଉତ୍ପାଦନ ସମୟ ଏବଂ ବିକ୍ରୟ ପରେ ସନ୍ତୋଷଜନକ ସେବା, ଆପଣ ଯେକ time ଣସି ସମୟରେ ଆମ କାରଖାନା ପରିଦର୍ଶନ କରିବାକୁ ଆପଣଙ୍କୁ ସ୍ୱାଗତ କରୁ |ଇଚ୍ଛା ବର୍ତ୍ତମାନ ଆମର ଏକତ୍ର ଏକ ସୁଖଦ ଏବଂ ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ବ୍ୟବସାୟ ହେଉ !!!

QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit -ତାକମ୍ |an

Cat.No.DRT-01021/01022

Cell 1000,000 ସେଲ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ସେଲ୍ ସିଧାସଳଖ RT-qPCR ପାଇଁ |

ଉତ୍ପାଦ ପରିଚୟ

ଏହି ଉତ୍ପାଦଟି RT-qPCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ ସଂସ୍କୃତ କୋଷ ନମୁନାରୁ ଶୀଘ୍ର RNA ମୁକ୍ତ କରିବା, ସମୟ ସାପେକ୍ଷ ତଥା ପରିଶ୍ରମୀ RNA ଶୁଦ୍ଧ ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ଦୂର କରିବା ପାଇଁ ଏବଂ ଆବଶ୍ୟକ RNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ପାଇବା ପାଇଁ ମାତ୍ର 7 ମିନିଟ୍, କିଟ୍ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇଥିବା 5 × ସିଧାସଳଖ ଆରଟି ମିକ୍ସ, 2 × ସିଧାସଳଖ qPCR ମିକ୍ସ-ଟାକମ୍ୟାନ୍ ଶୀଘ୍ର ଏବଂ ଦକ୍ଷତାର ସହିତ ପ୍ରକୃତ ସମୟ ପରିମାଣିକ PCR ଫଳାଫଳ ହାସଲ କରିପାରିବ |

5 × ସିଧାସଳଖ ଆରଟି ମିକ୍ସ ଏବଂ 2 × ସିଧାସଳଖ qPCR ମିକ୍ସ-ଟାକମ୍ୟାନ୍ଙ୍କର ଦୃ strong ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ସହନଶୀଳତା ଅଛି ଏବଂ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ ମାପ କରାଯିବାକୁ ଥିବା ନମୁନାର ଲାଇସେଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଦକ୍ଷ ରିଭର୍ସାଲ୍ ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବର୍ଦ୍ଧନ କାର୍ଯ୍ୟ କରିପାରିବ |ରେଜେଣ୍ଟରେ ଫୋରେଜେନ୍ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍, ହଟ୍ ଡି-ଟ୍ୟାକ୍ DNA ପଲିମେରେଜ୍, dNTP, MgCl ଥାଏ |₂, ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବଫର୍, PCR ଅପ୍ଟିମାଇଜର୍ ଏବଂ ଷ୍ଟାବିଲାଇଜର, ଯାହା ନମୁନାକୁ ଶୀଘ୍ର ଏବଂ ସହଜରେ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ ସହିତ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ ଏବଂ ଏହାର ଉଚ୍ଚ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା, ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଏବଂ ସ୍ଥିରତାର ଗୁଣ ରହିଛି |

ଉତ୍ପାଦ ବ features ଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡିକ

ସରଳ, ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ସେଲ୍ ସିଧାସଳଖ ଆରଟିଓ ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ଯାହା RNA ନମୁନା ପାଇବାକୁ 7 ମିନିଟ୍ ସମୟ ନେଇଥାଏ |

ନମୁନା ଆବଶ୍ୟକତା ଛୋଟ, ଏବଂ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ସର୍ବନିମ୍ନ 10 ଟି ସଂସ୍କୃତ କୋଷ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |

384, 96, 24, 12, ଏବଂ 6-କୂଅ ପ୍ଲେଟ୍ ପରି ସଂସ୍କୃତ କୋଷଗୁଡିକର ଦ୍ରୁତ RNA ଅଧିଗ୍ରହଣ ପାଇଁ ଉଚ୍ଚ ଥ୍ରୋପଟ୍ |

ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଫଳାଫଳ ଉପରେ ଏହାର ପ୍ରଭାବକୁ ବହୁ ମାତ୍ରାରେ ହ୍ରାସ କରି DNA ଏରେଜର ଶୀଘ୍ର ମୁକ୍ତ ହୋଇଥିବା ଜେନୋମଗୁଡ଼ିକୁ ଅପସାରଣ କରିବାରେ ସକ୍ଷମ ଅଟେ |

ଅପ୍ଟିମାଇଜଡ୍ RT ଏବଂ qPCR ସିଷ୍ଟମ୍ ଦୁଇ-ପର୍ଯ୍ୟାୟ RT-PCR କୁ ଅଧିକ ଦକ୍ଷ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍, ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଏବଂ ଶକ୍ତିଶାଳୀ RT-qPCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ସହନଶୀଳତା ସହିତ ସକ୍ଷମ କରିଥାଏ |

କିଟ୍ ପ୍ରୟୋଗ |

ପ୍ରୟୋଗର ପରିସର: ସଂସ୍କୃତ କକ୍ଷଗୁଡ଼ିକ |

ନମୁନା ଲାଇସିସ୍ RNA କୁ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କଲା: କେବଳ ଦୁଇ-ଷ୍ଟେପ୍ RT-qPCR ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ |

ନିମ୍ନଲିଖିତ ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟରେ କିଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ: ଜିନ୍ ନିୟାମକ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ବିଶ୍ଳେଷଣ, ଆଲେଲ୍ ପରୀକ୍ଷା, ଡ୍ରଗ୍ ସ୍କ୍ରିନିଂ ଇତ୍ୟାଦି |

କିଟ୍ ସୀମିତତା |

ବର୍ଦ୍ଧିତ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ≤ 300 ବିପି।

ସତେଜ ସଂସ୍କୃତି କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ କିଟ୍ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |

ଉତ୍ପାଦ ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ |

FOREGENE ର ଟୋଟାଲ୍ କ୍ୱାଲିଟି ମ୍ୟାନେଜମେଣ୍ଟ ସିଷ୍ଟମ୍ ଅନୁଯାୟୀ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ବ୍ୟାଚ୍ ସେଲ୍ ଡାଇରେକ୍ଟ୍ RT-qPCR ସିରିଜ୍ କିଟ୍ଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରତ୍ୟେକ ବ୍ୟାଚ୍ କିଟ୍ ଗୁଡିକର ଗୁଣର ବିଶ୍ୱସନୀୟତା ଏବଂ ସ୍ଥିରତା ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ ଏକାଧିକ ଥର କଠିନ ପରୀକ୍ଷଣ କରାଯାଏ |

କିଟ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ |

*:ସେଲ୍ ଲାଇସିସ୍, 5 × ସିଧାସଳଖ ଆରଟି ମିକ୍ସ, 2 × ସିଧାସଳଖ qPCR ମିକ୍ସ-ଟାକମ୍ୟାନ୍ ପୃଥକ ଭାବରେ କ୍ରୟ କରାଯାଇପାରିବ, ପରିଶିଷ୍ଠ 1 (ପୃଷ୍ଠା 13) ରେ ବିବରଣୀ ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇଛି |

ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା

1. ପରିବହନ ଅବସ୍ଥା

ନିମ୍ନ ତାପମାତ୍ରା ବରଫ ପ୍ୟାକ୍ ବାକ୍ସ ପରିବହନର ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରକ୍ରିୟା, କିଟ୍ <4 ° C ଅବସ୍ଥାରେ ଅଛି କି ନାହିଁ ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ |

2. ସଂରକ୍ଷଣ ଅବସ୍ଥା

ଅଂଶ I କୁ 4 ° C ଏବଂ ଭାଗ II -20 ° C ରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରନ୍ତୁ |

ଫୋରେଗେନ ପ୍ରୋଟେଜ୍ ପ୍ଲସ୍ II -20 ° C ରେ ଫ୍ରିଜ୍ ନୁହେଁ, 4 ° C ରେ ସ stored ୍ଚୟ ହେବା ଉଚିତ୍ |

Reagent 2 × ସିଧାସଳଖ qPCR ମିକ୍ସ-ଟାକମ୍ୟାନ୍ -20 ° C ରେ କିମ୍ବା 4 ° C ରେ ସ୍ୱଳ୍ପକାଳୀନ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ଗଚ୍ଛିତ ହୁଏ ଯଦି ବାରମ୍ବାର ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ (10 ଦିନ ମଧ୍ୟରେ) |

କିଟ୍ ଉପାଦାନ ସୂଚନା |

ବଫର୍ CL: ସେଲ୍ ଲାଇସିସ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ ପରିବେଶ ପ୍ରଦାନ କରେ |

ବଫର୍ ଏସଟି: ପରବର୍ତ୍ତୀ ଆରଟିଓ ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ନହେବା ପାଇଁ ଲାଇସେଟରେ ଥିବା ସକ୍ରିୟ ପଦାର୍ଥକୁ ସମାପ୍ତ କରେ |

DNA ଇରେଜର: DNA ଅପସାରଣ, ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷଣରେ ଜିନୋମ ଅପସାରଣର ପ୍ରଭାବ |

5 × ସିଧାସଳଖ ଆରଟି ମିକ୍ସ: ଉଚ୍ଚ ଆରଏନଏ ଆଫିନିଟି ଫୋରେଜେନ୍ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍, RNase ଇନହିବିଟର, dNTP, ଷ୍ଟାବିଲାଇଜର୍, ବର୍ଦ୍ଧକ, ଅପ୍ଟିମାଇଜର୍ ଏବଂ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରାଇମର୍ ଧାରଣ କରିଥାଏ (ରାଣ୍ଡମ ପ୍ରାଇମର୍, ଅଲିଗୋ (dT))₁₈ପ୍ରାଥମିକ)

ଫରେଜେନ୍ ପ୍ରୋଟେଜ୍ ପ୍ଲସ୍ ୨: ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ ପ୍ରସଙ୍ଗରେ, ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ମୁକ୍ତ କରିବାକୁ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ଲାଇସେଡ୍ |

2 × ସିଧାସଳଖ qPCR ମିକ୍ସ-ଟାକମ୍ୟାନ୍: ଏହି ରେଜେଣ୍ଟରେ ହଟ୍ ଡି-ଟ୍ୟାକ୍ DNA ପଲିମେରେଜ୍, dNTP, MgCl ଥାଏ |₂, ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବଫର୍, PCR ଅପ୍ଟିମାଇଜର୍, ଏବଂ ଷ୍ଟାବିଲାଇଜର୍ |

20 × ROX ରେଫରେନ୍ସ ରଙ୍ଗ: ସାଧାରଣତ AB ABI, ଷ୍ଟ୍ରାଟେଜେନ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ କମ୍ପାନୀର ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଉପକରଣରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, PCR ଡୋଜିଙ୍ଗ୍ ତ୍ରୁଟି ହେତୁ PCR ଟ୍ୟୁବ୍ ଏବଂ ଟ୍ୟୁବ୍ ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟକୁ ସଜାଡ଼ିବା ପାଇଁ ଏହା ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ବିଭିନ୍ନ ଯନ୍ତ୍ର ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ 20 × ROX ରେଫରେନ୍ସ ରଙ୍ଗର ଏକାଗ୍ରତା ଅଲଗା, ଏବଂ ଉପଭୋକ୍ତା ଏହାକୁ ଯନ୍ତ୍ରର ପରାମର୍ଶିତ ଏକାଗ୍ରତା ଅନୁଯାୟୀ ଯୋଗ କରିପାରିବେ |

RNase-free ddH₂O: ଦୁଇ-ପର୍ଯ୍ୟାୟ RT-qPCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ RNase-free sterilized ultra pure water |

ସତର୍କତା:(କିଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବା ପୂର୍ବରୁ ସାବଧାନତା ଅବଲମ୍ବନ କରିବାକୁ ନିଶ୍ଚିତ ହୁଅନ୍ତୁ)

ନମୁନା ମଧ୍ୟରେ କ୍ରସ୍-ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ ପରୀକ୍ଷଣର କାର୍ଯ୍ୟ ପ୍ରଣାଳୀ ପ୍ରତି ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ |

RNase ପ୍ରଦୂଷଣ ଏବଂ RNA ଅବକ୍ଷୟରୁ ରକ୍ଷା ପାଇବା ପାଇଁ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପରିବେଶ ଏବଂ ବାସନଗୁଡିକର ପରିଷ୍କାରତା ପ୍ରତି ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ |

ସତେଜ କିମ୍ବା ଭଲ-ସଂରକ୍ଷିତ କୋଷ ନମୁନା ନିଅ ଏବଂ ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍-ଥୱେଡ୍ କୋଷ ନମୁନା ବ୍ୟବହାର କର ନାହିଁ |

5 × ସିଧାସଳଖ qPCR ମିକ୍ସ, 2 × ସିଧାସଳଖ qPCR ମିକ୍ସ-ଟାକମ୍ୟାନ୍ ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍-ଥରୁ ଦୂରେଇ ରହିବା ଉଚିତ, ନଚେତ୍ ଏହା ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଏବଂ PCR ଦକ୍ଷତା ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଇବ |

ପ୍ରିପାରାସନପୂର୍ବରୁଅପରେସନ୍

ଏହି କିଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବା ପୂର୍ବରୁ ନିର୍ଦ୍ଦେଶଗୁଡ଼ିକୁ ଭଲଭାବେ ପ to ିବାକୁ ନିଶ୍ଚିତ ହୁଅନ୍ତୁ |ସେଲ୍ ସିଧାସଳଖ RT-qPCR କିଟ୍ କାର୍ଯ୍ୟ କରିବା ପାଇଁ ସରଳ, ସୁବିଧାଜନକ ଏବଂ ଦ୍ରୁତ ଅଟେ, ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦେଶଗୁଡ଼ିକ ସମଗ୍ର କିଟ୍ ଏବଂ ଏହାକୁ କିପରି ସଠିକ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯିବ ସେ ସମ୍ବନ୍ଧରେ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ସୂଚନା ପ୍ରଦାନ କରିଥାଏ |ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ଦୟାକରି ଆବଶ୍ୟକ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ସାମଗ୍ରୀ ଏବଂ ଯନ୍ତ୍ରପାତି ପ୍ରସ୍ତୁତ କରନ୍ତୁ |

ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ସାମଗ୍ରୀ ଏବଂ ଯନ୍ତ୍ରପାତି |

◆ ସଂସ୍କୃତି କକ୍ଷ |

◆ 1.5 ମିଲି କିମ୍ବା 2 ମି.ଲି.

◆ qPCR ମେସିନ୍, ପାଇପେଟ୍, ଟାବଲେଟ୍ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ (≥13,400×ଛ) (ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଆବଶ୍ୟକତା ଉପରେ ନିର୍ଭର କରି), ଇତ୍ୟାଦି |

ସୁରକ୍ଷା

Product ଏହି ଉତ୍ପାଦ କେବଳ ବ scientific ଜ୍ଞାନିକ ଅନୁସନ୍ଧାନ ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟରେ, ଦୟାକରି ଏହାକୁ ଫାର୍ମାସ୍ୟୁଟିକାଲ୍, କ୍ଲିନିକାଲ୍, ଖାଦ୍ୟ ଏବଂ ପ୍ରସାଧନ ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟରେ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ ନାହିଁ |

Chemical ରାସାୟନିକ ପଦାର୍ଥ ବ୍ୟବହାର କରିବା ସମୟରେ ଉପଯୁକ୍ତ ଲ୍ୟାବ ପୋଷାକ, ଗ୍ଲୋଭସ୍, ପ୍ରତିରକ୍ଷା ଚଷମା ଇତ୍ୟାଦି ପିନ୍ଧନ୍ତୁ |

ଅପରେସନ୍ଗାଇଡ୍

ପରିଶିଷ୍ଠ 1 (ପୃଷ୍ଠା 13) ରେ ସବିଶେଷ ତଥ୍ୟ ପାଇଁ ସେଲ୍ ଲାଇସିସ୍ ସିଷ୍ଟମ୍, ଆରଟି ସିଷ୍ଟମ୍ ଏବଂ qPCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମାଧାନ ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟ ପ୍ୟାକ୍ ଅଲଗା ଭାବରେ କ୍ରୟ କରାଯାଇପାରିବ |

ଅପରେସନ୍ ଗାଇଡ୍ |

ଉ: ନମୁନା RNA ପ୍ରକାଶନ |

1. କକ୍ଷଗୁଡିକ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା: କୋଷ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ଲେଟକୁ ଥଣ୍ଡା PBS ସହିତ ଧୋଇ ଦିଅ, ତାପରେ କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ଲାଇସ୍ କର (10-10) |⁶), 10⁶ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ପରିମାଣ ଅପେକ୍ଷା, RNA ଉତ୍ତୋଳନ ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧତା ପାଇଁ ସେଲ୍କୁ RNA ଆଇସୋଲେସନ୍ କିଟ୍ ଟୋଟାଲ୍ (DE-03111) କିମ୍ବା ଆନିମଲ୍ ଟୋଟାଲ୍ RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନତା କିଟ୍ (DE-03011) ପାଇଁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |

1.1।ଅନୁକରଣକାରୀ କୋଷଗୁଡିକ (ଏକ ଉଦାହରଣ ଭାବରେ 24- ଭଲ ପ୍ଲେଟ୍)

1.1.1।ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ କୋଷ ସଂଖ୍ୟା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କର, ସ୍ଥିର କର ଯେ କୋଷ ସଂଖ୍ୟା 1 × 10 ଅଟେ |⁵, ଏବଂ ସଂସ୍କୃତି ଥାଳିରୁ ସଂସ୍କୃତି ମାଧ୍ୟମକୁ ହଟାଇବା ପାଇଁ ଏକ ପାଇପେଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |

1.1.2।ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 200 μl ପ୍ରି-ଥଣ୍ଡା 1 × PBS ମିଶାନ୍ତୁ |ବାରମ୍ବାର ପାଇପେଟ୍ କରନ୍ତୁ ନାହିଁ ଏବଂ କୂଅରୁ PBS କା remove ନ୍ତୁ |ପ୍ଲେଟକୁ ଟିଲ୍ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଯଥାସମ୍ଭବ PBS ଅପସାରଣ କରନ୍ତୁ |ପଦାଙ୍କ 2 କୁ ଅଗ୍ରଗତି କରନ୍ତୁ |

1.1.3।ବିଭିନ୍ନ ସେଲ୍ ସଂସ୍କୃତି ଡିସ୍ କିମ୍ବା ଏକ ସେଲ୍ ସଂସ୍କୃତି ଥାଳିରେ ଏକ ରେଫରେନ୍ସ ନମ୍ବର ଟେବୁଲ୍ 1-1 ସେଲ୍ ଧୋଇବା ପାଇଁ ପୂର୍ବ × 1 PBS ଯୋଗ କରାଯାଇଥିଲା |

ସାରଣୀ 1-1: ବିଭିନ୍ନ ସଂଖ୍ୟକ କୋଷ ପାଇଁ PBS ର ମାତ୍ରା |

ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ：ଏକ ଦୃ firm ଅନୁକରଣକାରୀ କୋଷଗୁଡିକ ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ |，ଧୋଇବା ସମୟରେ ବହୁ ସଂଖ୍ୟକ କୋଷ କ୍ଷୟକୁ ଏଡାଇ ଦିଆଯାଏ |

1.2। 1.2।ସସପେନ୍ସନ୍ କୋଷ ବା ଅନୁକରଣକାରୀ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ଅଣ-ପୋରସ୍ ପ୍ଲେଟରେ ସଂସ୍କୃତ |

1.2.1।ଅଣ-ମଲ୍ଟି କୂଅ ପ୍ଲେଟଗୁଡିକରେ ସଂସ୍କୃତ ଅନୁକରଣକାରୀ କୋଷଗୁଡିକ (ନିଲମ୍ବନ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପଦକ୍ଷେପ 1.2.2 ରୁ ଆରମ୍ଭ ହୁଏ), ସାଧାରଣ କୋଷ ସଂଗ୍ରହ ପଦ୍ଧତି ଅନୁଯାୟୀ କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ସଂଗ୍ରହ କରି ଅଲଗା କରି ଏକ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ଲେଟ୍ କିମ୍ବା ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବରେ ରଖନ୍ତି |ଯଦି ଟ୍ରାଇପିସିନାଇଜେସନ୍ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, କୋଷଗୁଡିକ ସଂଗ୍ରହ କରିବା ଏବଂ ଅବଶିଷ୍ଟ ଟ୍ରାଇପିସିନ୍ ଅପସାରଣ କରିବା ପାଇଁ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ଆବଶ୍ୟକ କରେ, କୋଷଗୁଡିକ ବିସର୍ଜନ କରିବା ପାଇଁ PBS ପୁନ us ପ୍ରକାଶିତ କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ପୃଥକ କୋଷରେ ଯୋଡିଥାଏ |

1.2.2।କକ୍ଷ ସଂଖ୍ୟା ଗଣିବା ପରେ, ଆଲିକୋଟେଡ୍ କୋଷଗୁଡିକ 1 × 10 |⁵ ଗୋଟିଏ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍, 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 1000 × g ରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ଦ୍ୱାରା କୋଷ ସଂଗ୍ରହ କରନ୍ତୁ |

1.2.3।ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବରେ 200 μl PBS ଯୋଡନ୍ତୁ, ବାରମ୍ବାର ପାଇପେଟ୍ କରନ୍ତୁ ନାହିଁ ଏବଂ ସିଧାସଳଖ PBS କୁ ଆକାଂକ୍ଷା କରନ୍ତୁ |ପଦାଙ୍କ 2 କୁ ଅଗ୍ରସର ହୁଅନ୍ତୁ (ଯଦି ବର୍ଷା ହେବା କଷ୍ଟକର ଏବଂ କୋଷଗୁଡିକ ପୁନ us ପଠାଯାଇଥିଲା, ଅଲ ern କିକ ତ୍ୟାଗ କରିବା ପରେ 1000 × g ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗଡ୍ 10 ମିନିଟ୍ କରାଯାଇପାରେ, ସେଲ୍ ପେଲେଟ୍ ଷ୍ଟେପ୍ 2 କୁ ଅଗ୍ରସର ହୁଏ)

2. ସେଲ୍ ଲାଇସିସ୍: ବଫର୍ CL କୁ ହଟାନ୍ତୁ, ଏହାର ତାପମାତ୍ରା ରୁମ୍ ତାପମାତ୍ରା, ଡିଏନ୍ଏ ଏରେଜର ଏବଂ ଫୋରେଜେନ୍ ପ୍ରୋଟେଜ୍ ପ୍ଲସ୍ II ସହିତ ସମାନ ହୋଇଛି, ନିମ୍ନଲିଖିତ ସାରଣୀ 1-2 ଅନୁଯାୟୀ ପ୍ରସ୍ତୁତ ଲାଇସିସ୍ ସିଷ୍ଟମ୍: (ଲାଇସିସ୍ ସମାଧାନ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ପ୍ରସ୍ତୁତ) |

ସାରଣୀ 1-2: ଖଣ୍ଡ ଖଣ୍ଡ | ସିଷ୍ଟମ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତି (ଟିପ୍ପଣୀ: ବରଫ ଉପରେ ପ୍ରସ୍ତୁତିରେ)

(।

ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ：ବୁବୁଲ ଗଠନକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ, ଦୟାକରି ଯେତେବେଳେ ପାଇପେଟ୍ ସ୍କେଲ୍ 200μl କିମ୍ବା ତା’ଠାରୁ କମ୍ ଆଡଜଷ୍ଟ୍ ହେଲା |ଲାଇସିସ୍ ପରେ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ମେଘୁଆ ଦେଖାଯାଏ, ଯାହା ସାଧାରଣ ଅଟେ |

(।

ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ：ପାଇପେଟ୍ ଟିପ୍ ଭୂପୃଷ୍ଠ ତଳେ ନିଷ୍କାସିତ ହେଲା, ନିଶ୍ଚିତ କରେ ଯେ ଲାଇସେଟ୍ ଯୋଡି ହୋଇଛି |，ବୁବୁଲ ଗଠନକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ, ଦୟାକରି ଯେତେବେଳେ ପାଇପେଟ୍ ସ୍କେଲ୍ 200μl କିମ୍ବା ତା’ଠାରୁ କମ୍ ଆଡଜଷ୍ଟ ହୋଇଗଲା |

ସାରଣୀ 1-3：ବଫର୍ ST ଯୋଡନ୍ତୁ |

5. ପରବର୍ତ୍ତୀ RT-qPCR ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ଲାଇସେଟ୍ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ଯଦି ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷଣଗୁଡିକ ଠିକ୍ ସମୟରେ କରାଯାଇପାରିବ ନାହିଁ, ଦୟାକରି ଏହାକୁ ବରଫରେ 2 ଘଣ୍ଟାରୁ ଅଧିକ ରଖନ୍ତୁ ନାହିଁ, ଏବଂ -20 ℃ କିମ୍ବା -80 at ରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରନ୍ତୁ (ତିନି ମାସରୁ ଅଧିକ ନୁହେଁ) |

ବି: ଆରଟିଓ ସିଷ୍ଟମ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତି |

1. × ସିଧାସଳଖ ଆରଟି ମିକ୍ସ ବାହାର କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଏହାକୁ ଏକ ବରଫ ସ୍ନାନରେ ରଖନ୍ତୁ, ଏହାକୁ ପ୍ରାକୃତିକ ଭାବରେ ତରଳିବାକୁ ଦିଅନ୍ତୁ ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ଏହାକୁ ଧୀରେ ଧୀରେ ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ;RNase-free ddH2O ବାହାର କରି ଏହାକୁ ତରଳାଇ ପରବର୍ତ୍ତୀ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ଏକ ବରଫ ସ୍ନାନରେ ରଖ |ନିମ୍ନରେ ସାରଣୀ 2-1 ଅନୁଯାୟୀ ବରଫ ଉପରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରନ୍ତୁ |

ସାରଣୀ 2-1: RT ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀର ପ୍ରସ୍ତୁତି |

2. ସିଷ୍ଟମ୍ ଫର୍ମୁଲେସନ୍ ସମାପ୍ତ ହେବା ପରେ, ନିମ୍ନ ଟେବୁଲ୍ 2 -2 ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅବସ୍ଥାରେ RT ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଧୀରେ ଧୀରେ ମିଶ୍ରିତ ଏବଂ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ |

ସାରଣୀ 2-2: RT ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସ୍ଥିତି ସେଟିଂ |

3. ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମାପ୍ତ ହେବା ପରେ, ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଉତ୍ପାଦକୁ qPCR ପାଇଁ ସିଧାସଳଖ ବରଫ ଉପରେ ରଖାଗଲା, ଦୟାକରି ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ସଂରକ୍ଷଣ -20 ℃ କିମ୍ବା -80 put ରଖନ୍ତୁ |

ଟିପ୍ପଣୀ: ଶୁଦ୍ଧ ହୋଇନଥିବା ଟେମ୍ପଲେଟର ବ୍ୟବହାର ହେତୁ, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଉତ୍ପାଦରେ ଧଳା ରଙ୍ଗର ପରିମାଣ ଦେଖାଯାଏ |ଏହା ଏକ ସାଧାରଣ ଘଟଣା |ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ତୁରନ୍ତ ଅଲ ern କିକ ତତ୍ତ୍ Cent କୁ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ କରନ୍ତୁ |

ଫଳସ୍ୱରୂପ RT ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମାଧାନ ପରବର୍ତ୍ତୀ ଷ୍ଟେପ୍ ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀରେ ଯୋଡା ଯାଇଛି, ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀର 10-30% ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ପରିମାଣ ଯୋଡିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |

C: qPCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ ପ୍ରସ୍ତୁତି |

1. ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବାକୁ ନିମ୍ନଲିଖିତ ସାରଣୀ 3-1 ଅନୁଯାୟୀ ଷ୍ଟେପ୍ cDNA ଟେମ୍ପଲେଟରେ ଉପଯୁକ୍ତ B ର ଉପଯୁକ୍ତ ପରିମାଣ |

ଟିପନ୍ତୁ: cDNA ଟେମ୍ପଲେଟର ପରିମାଣ qPCR ସିଷ୍ଟମର 10-30% ଅଟେ |ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, 20μl qPCR ସିଷ୍ଟମରେ, 2-6 μl ଲାଇସିସ୍ ବଫର୍ ଯୋଗ କରନ୍ତୁ, କିନ୍ତୁ 6 μl ରୁ ଅଧିକ ନୁହେଁ |

2. qPCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ୍ ଭଲ qPCR ଅବସ୍ଥା (ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ， ଇତ୍ୟାଦି) (ସାରଣୀ 3-2 ରେ ଦିଆଯାଇଥିବା ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅବସ୍ଥା) |

ଟିପନ୍ତୁ: ଉତ୍ତମ ଫଳାଫଳ ପାଇବା ପାଇଁ qPCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପାଇଁ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ସର୍ତ୍ତ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ଚେଷ୍ଟା କରନ୍ତୁ |

ସାରଣୀ 3-1: PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀର ପ୍ରସ୍ତୁତି |

1 *: ପ୍ରାଥମିକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଦର୍ଶନ ଖରାପ ଥିବାବେଳେ ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା 50-900 nM ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଆଡଜଷ୍ଟ ହୋଇପାରେ |

ଟିପନ୍ତୁ: ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଆବଶ୍ୟକତା ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସାଇକ୍ଲର ମଡେଲ ଅନୁଯାୟୀ qPCR ସିଷ୍ଟମ ଆଡଜଷ୍ଟ ହୋଇପାରିବ |50 ରେ qPCR ପାଇଁ |μl ସିଷ୍ଟମ୍, 20 ଅନୁଯାୟୀ ଆନୁପାତିକ ଭାବରେ ରିଜେଣ୍ଟ୍ ଡୋଜ୍ ଆଡଜଷ୍ଟ୍ କରନ୍ତୁ |μl ସିଷ୍ଟମ୍

2 *: ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପରିମାଣିକ ଥର୍ମାଲ୍ ସାଇକ୍ଲର୍ ଅନୁଯାୟୀ ROX ରେଫରେନ୍ସ ରଙ୍ଗର ଉପଯୁକ୍ତ ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ରତା ଚୟନ କରନ୍ତୁ |ସାଧାରଣ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପରିମାଣିକ ସାଇକେଲ ଚାଳକଙ୍କ ପାଇଁ ସବୁଠାରୁ ଉପଯୁକ୍ତ ROX ରେଫରେନ୍ସ ରଙ୍ଗର ଏକାଗ୍ରତା ନିମ୍ନ ସାରଣୀରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି:

ସାରଣୀ 3-2: qPCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅବସ୍ଥା ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇଛି |

ଟିପନ୍ତୁ: ସର୍ବୋତ୍ତମ qPCR ପ୍ରଭାବ ପାଇବାକୁ, ବିଭିନ୍ନ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରାଇମର୍ ପାଇଁ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅବସ୍ଥାକୁ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରିବା ପାଇଁ ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ PCR ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଆନାଲିଜର, ଟେମ୍ପଲେଟ୍, ପ୍ରାଇମର୍ ଇତ୍ୟାଦି ଉପରେ ନିର୍ଭର କରି PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅବସ୍ଥା ଭିନ୍ନ ହୋଇଥାଏ, ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟରେ, ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପରିମାଣିକ ଥର୍ମାଲ୍ ସାଇକ୍ଲର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସର୍ତ୍ତ ଅନୁଯାୟୀ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ପ୍ରକାର, ଆଗ୍ରହର ଖଣ୍ଡର ଆକାର, ବର୍ଦ୍ଧିତ ଖଣ୍ଡର ମୂଳ କ୍ରମ ଏବଂ ଜିସି ବିଷୟବସ୍ତୁ ଏବଂ ପ୍ରାଇମର ଦ length ର୍ଘ୍ୟ, ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା, ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମୟ ଇତ୍ୟାଦି ଉପରେ ନିର୍ଭର କରେ |

ପ୍ରକୃତ ସମୟ PCR ପ୍ରାଥମିକ ଡିଜାଇନ୍ ନୀତି |

ଫରୱାର୍ଡ ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ରିଭର୍ସ ପ୍ରାଇମର୍ |

ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ପାଇଁ, ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍ ବହୁତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ |ପ୍ରାଥମିକଗୁଡିକ PCR ବିସ୍ତାରର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଏବଂ କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ସହିତ ଜଡିତ, ଏବଂ ନିମ୍ନଲିଖିତ ନୀତିଗୁଡିକ ସହିତ ଡିଜାଇନ୍ କରାଯାଇପାରିବ:

◆ ପ୍ରାଥମିକ ଦ length ର୍ଘ୍ୟ: 18-30bp |

◆ GC ବିଷୟବସ୍ତୁ: 40-60% |

◆ Tm ମୂଲ୍ୟ: ପ୍ରାଥମିକ ଡିଜାଇନ୍ ସଫ୍ଟୱେର୍, ଯେପରିକି ପ୍ରାଇମର୍ 5, ପ୍ରାଇମରର Tm ମୂଲ୍ୟ ଦେଇପାରେ |ଅପଷ୍ଟ୍ରିମ୍ ଏବଂ ଡାଉନ୍ଷ୍ଟ୍ରିମ୍ ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକର Tm ମୂଲ୍ୟ ଯଥାସମ୍ଭବ ନିକଟତର ହେବା ଉଚିତ |Tm ଗଣନା ସୂତ୍ର ମଧ୍ୟ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T) |PCR କାର୍ଯ୍ୟ କରିବାବେଳେ, 5 ° C ର ପ୍ରାଥମିକ Tm ମୂଲ୍ୟରୁ ଏକ ତାପମାତ୍ରା ସାଧାରଣତ the ଆନ୍ଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ଭାବରେ ମନୋନୀତ ହୁଏ (ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରାର ଅନୁରୂପ ବୃଦ୍ଧି PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ବ increase ାଇପାରେ) |

◆ ପ୍ରାଥମିକ ଏବଂ PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ:

Primer ଡିଜାଇନ୍ ପ୍ରାଇମର୍ PCR ବିସ୍ତାରଣ ଉତ୍ପାଦର ଦ length ର୍ଘ୍ୟ 100-150bp ଅଟେ |

The ଟେମ୍ପଲେଟର ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନମୂଳକ କ୍ଷେତ୍ରରେ ଡିଜାଇନ୍ ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକ ଯଥାସମ୍ଭବ ଏଡ଼ାଇବା ଉଚିତ୍ |

Up ଅପଷ୍ଟ୍ରିମ୍ ଏବଂ ଡାଉନ୍ଷ୍ଟ୍ରିମ୍ ପ୍ରାଇମରଗୁଡିକର 3 ′ ଶେଷ ମଧ୍ୟରେ 2 କିମ୍ବା ଅଧିକ ସଂପୃକ୍ତ ଆଧାର ଗଠନରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ |

◆ ପ୍ରାଇମର୍ 3 ′ ଟର୍ମିନାଲ୍ ବେସ୍ କ୍ରମାଗତ 3 ଅତିରିକ୍ତ G କିମ୍ବା C ସହିତ ଉପସ୍ଥିତ ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ |

◆ ପ୍ରାଥମିକମାନେ ନିଜେ ସଂପୃକ୍ତ ସଂରଚନା ପାଇପାରିବେ ନାହିଁ, ନଚେତ୍ ଏକ ହେୟାରପିନ ଗଠନ ସୃଷ୍ଟି ହେବ, ଯାହା PCR ବିସ୍ତାରକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିବ |

◆ ATCG କୁ ପ୍ରାଥମିକ କ୍ରମରେ ଯଥାସମ୍ଭବ ବଣ୍ଟନ କରାଯିବା ଉଚିତ ଏବଂ 3 ′ ଟର୍ମିନାଲ୍ ଆଧାରକୁ T ଭାବରେ ଏଡାଇବା ଉଚିତ୍ |

ପରିଶିଷ୍ଠ1：Cell DirectRT-qPCR | କିଟ୍ କମ୍ପୋନେନ୍ |t ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟ ପ୍ୟାକ୍ |

1. ଲାଇସିସ୍ ସମାଧାନକୁ ସେଲ୍ କରନ୍ତୁ |