1. ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ବୁ understanding ାମଣା

ଏହି ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ, ଆମକୁ କିଛି ଧାରଣା ଏବଂ ପରିଭାଷା ବୁ to ିବାକୁ ପଡିବ, ଯାହା ଦ୍ our ାରା ଆମର ବୟସ୍କମାନଙ୍କ ସାମ୍ନାରେ ଭୁଲ୍ ନକରିବାକୁ, ଯେପରିକି:

ପ୍ର: RT-PCR, qPCR, Real-time PCR, ଏବଂ real-time RT-PCR ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ କ’ଣ?

ଉତ୍ତର: RT-PCR ହେଉଛି ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ PCR |(ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ PCR, RT-PCR), ଯାହା ପଲିମେରେଜ୍ ଚେନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା (PCR) ର ବହୁଳ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ପ୍ରକାର |RT-PCR ରେ, ଏକ RNA ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡକୁ ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ DNA ରେ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ସିତ କରାଯାଏ, ଯାହା ପରେ PCR ଦ୍ୱାରା DNA ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ଏକ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |
ପ୍ରକୃତ-ସମୟ- PCR ଏବଂ qPCR |(ପରିମାଣିକ Rea-ltime-PCR) ସମାନ ଜିନିଷ, ଉଭୟ ହେଉଛି ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ ପରିମାଣିକ PCR, ଯାହାର ଅର୍ଥ ହେଉଛି PCR ର ପ୍ରତ୍ୟେକ ଚକ୍ରରେ ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ ଡାଟା ରେକର୍ଡ ଅଛି, ତେଣୁ ଟେମ୍ପଲେଟଗୁଡିକର ସଂଖ୍ୟା ସଠିକ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣରେ ସଜାଡି ହୋଇପାରିବ |

ଯଦିଓ ଉଭୟ ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ PCR (ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR) ଏବଂ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ PCR (ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ PCR) କୁ RT-PCR ଭାବରେ ସଂକ୍ଷିପ୍ତ କରାଯାଉଥିବା ପରି ମନେହୁଏ, ଆନ୍ତର୍ଜାତୀୟ ସମ୍ମିଳନୀ ହେଉଛି: RT-PCR ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଭାବରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ କୁ ସୂଚିତ କରେ |PCR, ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ସାଧାରଣତ q qPCR ଭାବରେ ସଂକ୍ଷିପ୍ତ ହୋଇଛି (ପରିମାଣିକ ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR) |.

ଏବଂ ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ RT-PCR (RT-qPCR), ଏହା ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା ସହିତ ମିଳିତ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ PCR |: ପ୍ରଥମେ RNA ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ରୁ cDNA (RT) ପ୍ରାପ୍ତ କର, ଏବଂ ପରିମାଣିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ (qPCR) ପାଇଁ ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ବ୍ୟବହାର କର |ଅଧିକାଂଶ ଲାବୋରେଟୋରୀଗୁଡିକ RT-qPCR କରନ୍ତି, ଅର୍ଥାତ୍ RNA ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ଡାଉନ୍-ରେଗୁଲେସନ୍ ଉପରେ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରନ୍ତି, ତେଣୁ qPCR ଯାହା ସମସ୍ତେ ଲାବୋରେଟୋରୀରେ କଥାବାର୍ତ୍ତା କରନ୍ତି ତାହା ପ୍ରକୃତରେ RT-qPCR କୁ ସୂଚିତ କରେ, କିନ୍ତୁ ଭୁଲନ୍ତୁ ନାହିଁ ଯେ କ୍ଲିନିକାଲ୍ ପ୍ରୟୋଗରେ ଅନେକ DNA ପରୀକ୍ଷା ଅଛି |ପରିମାଣିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ, ଯେପରିକି ହେପାଟାଇଟିସ୍ ବି ଜୀବାଣୁ HBV ଚିହ୍ନଟ |

ପ୍ରଶ୍ନ: ଅନେକ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ପ reading ିବା ପରେ, ବର୍ଦ୍ଧିତ ଖଣ୍ଡକୁ 80-300bp ପରିସର ମଧ୍ୟରେ କାହିଁକି ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରାଯିବା ଉଚିତ୍?

ଉତ୍ତର: ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜିନ୍ କ୍ରମର ଦ length ର୍ଘ୍ୟ ଅଲଗା, କିଛି ଅନେକ kb, କିଛି ଶହ ଶହ ବିପି, କିନ୍ତୁ ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍ କରିବାବେଳେ ଆମକୁ କେବଳ ଉତ୍ପାଦର ଦ length ର୍ଘ୍ୟ 80-300bp ହେବା ଆବଶ୍ୟକ, ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ ପରିମାଣିକ PCR ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ ଅତ୍ୟଧିକ ଛୋଟ କିମ୍ବା ବହୁତ ଲମ୍ବା ନୁହେଁ |ପ୍ରାଇମର୍-ଡାଇମର୍ ଠାରୁ ଅଲଗା ହେବା ପାଇଁ ଉତ୍ପାଦ ଖଣ୍ଡ ବହୁତ ଛୋଟ |ପ୍ରାଇମର୍-ଡାଇମରର ଦ length ର୍ଘ୍ୟ ପ୍ରାୟ 30-40bp ଅଟେ, ଏବଂ ଏହା 80bp ରୁ କମ୍ ହେଲେ ଏହା ଏକ ପ୍ରାଇମର୍-ଡାଇମର୍ କିମ୍ବା ଏକ ଉତ୍ପାଦ ବୋଲି ଜାଣିବା କଷ୍ଟକର |ଯଦି ଉତ୍ପାଦର ଖଣ୍ଡ ବହୁତ ଲମ୍ବା, 300bp ଅତିକ୍ରମ କରେ, ଏହା ସହଜରେ କମ୍ ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଦକ୍ଷତାକୁ ଆଣିବ ଏବଂ ଜିନ୍ ର ପରିମାଣକୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ଚିହ୍ନଟ କରିପାରିବ ନାହିଁ |

ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଯେତେବେଳେ ତୁମେ ଗଣନା କର ଯେ ଶ୍ରେଣୀଗୃହରେ କେତେ ଲୋକ ଅଛନ୍ତି, ତୁମକୁ କେବଳ ଗଣିବାକୁ ପଡିବ କେତେ ମୁଖ ଅଛି |ଯେତେବେଳେ ତୁମେ ଜିନ୍ ଚିହ୍ନଟ କର, ସମାନ କଥା, ତୁମକୁ କେବଳ ଏକ ଜିନ୍ ର ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କ୍ରମ ଚିହ୍ନଟ କରିବାକୁ ପଡିବ, ସମଗ୍ର କ୍ରମଟି ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରିବ |ଯଦି ଆପଣ ଲୋକମାନଙ୍କୁ ଗଣିବାକୁ ଚାହାଁନ୍ତି, ତେବେ ଆପଣଙ୍କୁ ଉଭୟ ପାଟି, ନାକ, କାନ, ଏବଂ ଚଷମା ଗଣିବାକୁ ପଡିବ, ଏବଂ ଭୁଲ୍ କରିବା ସହଜ |

ବିସ୍ତାର କରିବାକୁ, ଜ ological ବିକ ଅନୁସନ୍ଧାନରେ, ବିଭିନ୍ନ ସ୍ଥାନରୁ କ୍ଷେତ୍ର ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଅନେକ ଗବେଷଣା ମାମଲା ଅଛି, କାରଣ କ species ଣସି ପ୍ରଜାତିର ଜିନ୍ କ୍ରମ ବହୁତ ଲମ୍ବା, ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ 16S ସିକ୍ୱେନ୍ସିଙ୍ଗ୍ ଭଳି ସମସ୍ତ ଖଣ୍ଡକୁ ମାପିବା ଅନାବଶ୍ୟକ ଏବଂ ଅସମ୍ଭବ, ଯାହା ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆର ରକ୍ଷଣଶୀଳ କ୍ରମକୁ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆର ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଜନସଂଖ୍ୟାକୁ ଆକଳନ କରିବା |

ପ୍ର: qPCR ପ୍ରାଥମିକ ଡିଜାଇନ୍ ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ ଲମ୍ବ କ’ଣ?

ଉତ୍ତର: ସାଧାରଣତ speaking କହିବାକୁ ଗଲେ, ପ୍ରାଥମିକ ଦ length ର୍ଘ୍ୟ ପ୍ରାୟ 20-24bp, ଯାହା ଭଲ ଅଟେ |ଅବଶ୍ୟ, ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍ କରିବାବେଳେ ଆମକୁ ପ୍ରାଇମରର ଟିଏମ୍ ମୂଲ୍ୟ ପ୍ରତି ଧ୍ୟାନ ଦେବାକୁ ପଡିବ, କାରଣ ଏହା ସର୍ବୋଚ୍ଚ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ସହିତ ଜଡିତ |ଅନେକ ପରୀକ୍ଷଣ ପରେ, ଏହା ପ୍ରମାଣିତ ହୋଇଛି ଯେ 60 ° C ଏକ ଉତ୍ତମ TM ମୂଲ୍ୟ ଅଟେ |ଯଦି ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ଅତ୍ୟଧିକ କମ୍, ଏହା ସହଜରେ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାରକୁ ନେଇଥାଏ |ଯଦି ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ଅତ୍ୟଧିକ ଅଧିକ ହୁଏ, ତେବେ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦକ୍ଷତା ଅପେକ୍ଷାକୃତ କମ୍ ହେବ, ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ରର ଶିଖର ପରେ ଆରମ୍ଭ ହେବ ଏବଂ CT ମୂଲ୍ୟ ବିଳମ୍ବ ହେବ |

ପ୍ର: ରଙ୍ଗ ପଦ୍ଧତି ଅନୁସନ୍ଧାନ ପ୍ରଣାଳୀଠାରୁ କିପରି ଭିନ୍ନ?

ଉତ୍ତର: ରଙ୍ଗ ପଦ୍ଧତି |କେତେକ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗ, ଯେପରିକି SYBR ଗ୍ରୀନ୍ Ⅰ, ପିକୋ ଗ୍ରୀନ୍, BEBO ଇତ୍ୟାଦି, ନିଜେ ଆଲୋକ ନିର୍ଗତ କରନ୍ତି ନାହିଁ, କିନ୍ତୁ ଦ୍ୱିଗୁଣିତ DNA ର ଛୋଟ ଖୋଲାରେ ବାନ୍ଧିବା ପରେ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ନିର୍ଗତ କରିବେ |ତେଣୁ, PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଆରମ୍ଭରେ, ମେସିନ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ ଚିହ୍ନଟ କରିପାରିବ ନାହିଁ |ଯେତେବେଳେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍-ଏକ୍ସଟେନ୍ସନ୍ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ପହ reaches ୍ଚେ, ଡବଲ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ ଖୋଲାଯାଏ, ଏବଂ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରିଜ୍ କ୍ରିୟାରେ ଏକ ନୂତନ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ ସିନ୍ଥାଇଜ୍ ହୁଏ, ଏବଂ ଫ୍ଲୋରେସେଣ୍ଟ୍ ମଲିକ୍ୟୁଲ dsDNA ଛୋଟ ଗଭୀରରେ ବାନ୍ଧି ହୋଇଯାଏ |PCR ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା ବ As ିବା ସହିତ ଅଧିକରୁ ଅଧିକ ରଙ୍ଗ ଦୁଇଗୁଣ ବିଶିଷ୍ଟ DNA ସହିତ ମିଳିତ ହୁଏ ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ ମଧ୍ୟ କ୍ରମାଗତ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥାଏ |ରଙ୍ଗ ପଦ୍ଧତି ମୁଖ୍ୟତ scientific ବ scientific ଜ୍ଞାନିକ ଅନୁସନ୍ଧାନରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |
PS: ପରୀକ୍ଷଣ କରିବା ସମୟରେ ସାବଧାନ ରୁହନ୍ତୁ, ରଙ୍ଗକୁ ମାନବ DNA ସହିତ ମିଶ୍ରଣ କରିବାକୁ ପଡିବ, ଏହାକୁ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ବ୍ୟକ୍ତିରେ ପରିଣତ କରିବାକୁ ସାବଧାନ |

ରଙ୍ଗ ପଦ୍ଧତି (ବାମ) ଅନୁସନ୍ଧାନ ପଦ୍ଧତି (ଡାହାଣ)
PS: ପରୀକ୍ଷଣ କରିବା ସମୟରେ ସାବଧାନ ରୁହନ୍ତୁ, ରଙ୍ଗକୁ ମାନବ DNA ସହିତ ମିଶ୍ରଣ କରିବାକୁ ପଡିବ, ଏହାକୁ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ବ୍ୟକ୍ତିରେ ପରିଣତ କରିବାକୁ ସାବଧାନ |

SYBR ସବୁଜ DNA DNA ର ଛୋଟ ଖୋଲା ସହିତ ବାନ୍ଧେ |

ଅନୁସନ୍ଧାନ ପଦ୍ଧତି |ଟାକମ୍ୟାନ୍ ପ୍ରୋବ ହେଉଛି ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ପ୍ରୋବ |ଅନୁସନ୍ଧାନର 5 ′ ଶେଷରେ ଏକ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଗୋଷ୍ଠୀ ଅଛି, ସାଧାରଣତ F FAM, ଏବଂ ଅନୁସନ୍ଧାନ ନିଜେ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜିନ୍ ପାଇଁ ଏକ କ୍ରମ ପରିପକ୍ୱ |′ ′ ଶେଷରେ ଏକ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ କ୍ୱିଞ୍ଚିଂ ଗୋଷ୍ଠୀ ଅଛି |ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ରିଜୋନାନ୍ସ ଶକ୍ତି ସ୍ଥାନାନ୍ତରର ନୀତି ଅନୁଯାୟୀ (ଫରଷ୍ଟର ରିଜୋନାନ୍ସ ଶକ୍ତି ସ୍ଥାନାନ୍ତର, FRET), ଯେତେବେଳେ ସାମ୍ବାଦିକ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଗ୍ରୁପ୍ (ଦାତା ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଅଣୁ) ଏବଂ କ୍ୱିଞ୍ଚିଙ୍ଗ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଗ୍ରୁପ୍ (ଗ୍ରହଣକାରୀ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଅଣୁ) ଉତ୍ସାହିତ ହୁଅନ୍ତି ଯେତେବେଳେ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରା ଓଭରଲେପ୍ ଏବଂ ଦୂରତା ଅତି ନିକଟତର ହୁଏ (7-10nm), ଦାତା ଅଣୁଗୁଡ଼ିକର ଉତ୍ତେଜନା ସ୍ the ୀକୃତିପ୍ରାପ୍ତ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକର ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସୃଷ୍ଟି କରିଥାଏ |ତେଣୁ, PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ଆରମ୍ଭରେ, ଯେତେବେଳେ ପ୍ରୋବଟି ସିଷ୍ଟମରେ ମୁକ୍ତ ଏବଂ ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ, ସାମ୍ବାଦିକ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଗୋଷ୍ଠୀ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ନିର୍ଗତ କରିବେ ନାହିଁ |ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ କଲାବେଳେ, ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ପ୍ରୋବ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ସହିତ ବାନ୍ଧେ |ସମ୍ପ୍ରସାରଣ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ, ପଲିମେରେଜ୍ କ୍ରମାଗତ ଭାବରେ ନୂତନ ଶୃଙ୍ଖଳାକୁ ସିନ୍ଥାଇଜ୍ କରେ |ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ର 5′-3 ′ ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଅଛି |ଅନୁସନ୍ଧାନରେ ପହଞ୍ଚିବାବେଳେ, ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ଟେମ୍ପଲେଟରୁ ଅନୁସନ୍ଧାନକୁ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜ୍ କରିବ, ଖବରଦାତା ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଗୋଷ୍ଠୀକୁ କ୍ୱେଞ୍ଚର୍ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ଠାରୁ ପୃଥକ କରିବ ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ସିଗନାଲ୍ ମୁକ୍ତ କରିବ |ଯେହେତୁ ପ୍ରୋବ ଏବଂ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ଗୋଟିଏ ପରେ ଗୋଟିଏ ସମ୍ପର୍କ ଅଛି, ପରୀକ୍ଷଣର ସଠିକତା ଏବଂ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଦୃଷ୍ଟିରୁ ଅନୁସନ୍ଧାନ ପଦ୍ଧତି ରଙ୍ଗ ପଦ୍ଧତିଠାରୁ ଉନ୍ନତ ଅଟେ |ଅନୁସନ୍ଧାନ ପ୍ରଣାଳୀ ମୁଖ୍ୟତ diagn ନିରାକରଣରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |

ପ୍ର: ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିମାଣ କ’ଣ?ଆପେକ୍ଷିକ ପରିମାଣ କ’ଣ?

ଉତ୍ତର: ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିମାଣ qPCR ଦ୍ tested ାରା ପରୀକ୍ଷା ହେବାକୁ ଥିବା ନମୁନାର ପ୍ରାରମ୍ଭିକ କପି ସଂଖ୍ୟାର ଗଣନାକୁ ବୁ refers ାଏ, ଯେପରିକି 1ml ରକ୍ତରେ କେତେ HBV ଜୀବାଣୁ ଅଛି |ଆପେକ୍ଷିକ ପରିମାଣ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରାପ୍ତ ଫଳାଫଳ ହେଉଛି ଅନ୍ୟ ଏକ ରେଫରେନ୍ସ ନମୁନା ସହିତ ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ନମୁନାରେ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ପରିମାଣର ପରିବର୍ତ୍ତନ, ଏବଂ ଜିନ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ଅପ୍-ରେଗୁଲେଡ୍ କିମ୍ବା ଡାଉନ୍-ରେଗୁଲେଟେଡ୍ |

ପ୍ର: RNA ନିଷ୍କାସନ ପରିମାଣ, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଦକ୍ଷତା, ଏବଂ ବିସ୍ତାର ଦକ୍ଷତା ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଫଳାଫଳକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିବ କି?
ପ୍ର: ନମୁନା ସଂରକ୍ଷଣ, ନିଷ୍କାସନ ରେଜେଣ୍ଟସ୍, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ରିଜେଣ୍ଟସ୍ ଏବଂ ହାଲୁକା ପ୍ରସାରଣକାରୀ ସାମଗ୍ରୀଗୁଡିକ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଫଳାଫଳକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିବ କି?
ପ୍ର: କେଉଁ ପଦ୍ଧତି ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ତଥ୍ୟକୁ ସଂଶୋଧନ କରିପାରିବ?

ଏହି ସମସ୍ୟାଗୁଡିକ ବିଷୟରେ, ଆମେ ନିମ୍ନରେ ଉନ୍ନତ ଏବଂ ଉନ୍ନତ ବିଭାଗରେ ବିସ୍ତୃତ ଭାବରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରିବୁ |
2. ଉନ୍ନତ ଜ୍ଞାନ

ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ବିଷୟରେ, ଆମକୁ ବାସ୍ତବତାକୁ ସ୍ୱୀକାର କରିବାକୁ ହେବ ଯେ ପ୍ରତିବର୍ଷ ହଜାର ହଜାର ବ scientific ଜ୍ଞାନିକ ଅନୁସନ୍ଧାନ କାଗଜ ପ୍ରକାଶିତ ହୁଏ, ଯାହା ମଧ୍ୟରେ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ଅଳ୍ପ ସଂଖ୍ୟା ନୁହେଁ |

ଯଦି ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ପରୀକ୍ଷଣ ମାପିବା ପାଇଁ କ common ଣସି ସାଧାରଣ ମାନକ ନାହିଁ, ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ବ୍ୟାପକ ଭାବରେ ଭିନ୍ନ ହୋଇପାରେ |ସମାନ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ପଦ୍ଧତି ସହିତ ସମାନ ପ୍ରଜାତିର ସମାନ ଜିନ୍ ପାଇଁ, ଚିହ୍ନଟ ଫଳାଫଳ ମଧ୍ୟ ବ୍ୟାପକ ଭାବରେ ଭିନ୍ନ ହେବ, ଏବଂ ବିଳମ୍ବିତ ବ୍ୟକ୍ତିଙ୍କ ପାଇଁ ସମାନ ଫଳାଫଳ ପୁନରାବୃତ୍ତି କରିବା କଷ୍ଟକର ହେବ |କେଉଁଟି ଠିକ୍ ଏବଂ କେଉଁଟି ଭୁଲ୍ ତାହା ଆପଣ କେହି ଜାଣନ୍ତି ନାହିଁ |

ଏହାର ଅର୍ଥ କ’ଣ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ ପରିମାଣିକ PCR ହେଉଛି ଏକ ଠକ ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା କିମ୍ବା ଏକ ଅବିଶ୍ୱସନୀୟ ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା?ନା, ଏହାର କାରଣ ହେଉଛି ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ଅଧିକ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ଏବଂ ଅଧିକ ସଠିକ୍, ଏବଂ ଟିକିଏ ଭୁଲ୍ ଅପରେସନ୍ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ବିପରୀତ ଫଳାଫଳ ସୃଷ୍ଟି କରିବ |ଏକ ଛୋଟ କ୍ଷତି ହେଉଛି ଏକ ହଜାର ମାଇଲ ଦୂରରେ |।ସମୀକ୍ଷକଙ୍କ ଦ୍ article ାରା ପ୍ରବନ୍ଧର ଲେଖକ ବାରମ୍ବାର ନିର୍ଯାତିତ ହୋଇପାରନ୍ତି।ଏଥି ସହିତ, ପତ୍ରିକାର ସମୀକ୍ଷକମାନେ ମଧ୍ୟ ବିଭିନ୍ନ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଫଳାଫଳରୁ ବାଛିବା କଷ୍ଟକର |

ମୋଟାମୋଟି, ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ PCR ପରୀକ୍ଷଣରେ ସହମତି ଅଭାବକୁ ସୂଚାଇଥାଏ |ଏଥିପାଇଁ ଶିଳ୍ପରେ ବରିଷ୍ଠ ବ scientists ଜ୍ଞାନିକମାନେ ମାନକ ଗଠନ କରିବାକୁ ଲାଗିଲେ,ଏହି ମାନକ ପୂରଣ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରବନ୍ଧରେ କିଛି ଆବଶ୍ୟକୀୟ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଏବଂ ତଥ୍ୟ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ବିବରଣୀ (ଆବଶ୍ୟକ ତଥ୍ୟ ଅନ୍ତର୍ଭୂକ୍ତ କରି) ପ୍ରଦାନ କରିବାକୁ ଅବଦାନକାରୀ ଆବଶ୍ୟକ କରନ୍ତି |

ସମୀକ୍ଷକମାନେ ଏହି ବିବରଣୀ ପ reading ି ପରୀକ୍ଷଣର ଗୁଣର ବିଚାର କରିପାରିବେ;ଭବିଷ୍ୟତର ପାଠକମାନେ ମଧ୍ୟ ପରୀକ୍ଷଣର ପୁନରାବୃତ୍ତି କିମ୍ବା ପରୀକ୍ଷଣର ଉନ୍ନତି ପାଇଁ ଏହାକୁ ବ୍ୟବହାର କରିପାରିବେ |ତା’ପରେ ଏହି ଉପାୟରେ ପ୍ରାପ୍ତ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚନା, ଉଚ୍ଚ ଗୁଣବତ୍ତା ଏବଂ ବ୍ୟବହାରରେ ପରିପୂର୍ଣ୍ଣ |

MIBBI (ଜ Bi ବିକ ଏବଂ ଜ omed ବ ଚିକିତ୍ସା ଅନୁସନ୍ଧାନ ପାଇଁ ସର୍ବନିମ୍ନ ସୂଚନା -http: // www।mibbi.org) ସୃଷ୍ଟି ହେଲା |MIBBI ହେଉଛି ଏକ ପ୍ରୋଜେକ୍ଟ ଯାହା ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ମାନ ପ୍ରଦାନ କରିଥାଏ |।ଏହା ପ୍ରକୃତିରେ ପ୍ରକାଶିତ |ଏହି ପ୍ରକଳ୍ପଟି ବିଭିନ୍ନ ଜ ological ବିକ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ଉଦ୍ଦିଷ୍ଟ, ସେଲ୍ ବାୟୋଲୋଜି, ମାଇକ୍ରୋଏରେ, qPCR ଆମେ ବର୍ତ୍ତମାନ ଆଲୋଚନା କରିବାକୁ ଯାଉଛୁ ଇତ୍ୟାଦି, ଏବଂ ପାଣ୍ଡୁଲିପି ଦାଖଲ କରିବା ସମୟରେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ପ୍ରକାରର ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ପ୍ରଦାନ କରିଥାଏ |ସେହି ସୂଚନା ସବୁବେଳେ ପ୍ରଦାନ କରାଯିବା ଉଚିତ୍ |

MIBBI ପ୍ରୋଜେକ୍ଟରେ, ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ସହିତ ଜଡିତ ଦୁଇଟି ପ୍ରବନ୍ଧ ଅଛି, ଯଥା |:
· RDML (ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ PCR ଡାଟା ମାର୍କଅପ୍ ଭାଷା) - ପ୍ରକୃତ ସମୟର ପରିମାଣିକ PCR ତଥ୍ୟ ପାଇଁ ଏକ ସଂରଚନା ଭାଷା ଏବଂ ରିପୋର୍ଟ ଗାଇଡ୍;
· MIQE (ପରିମାଣିକ ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ PCR ପରୀକ୍ଷଣର ପ୍ରକାଶନ ପାଇଁ ସର୍ବନିମ୍ନ ସୂଚନା) - ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ ପରିମାଣିକ PCR ପରୀକ୍ଷଣ ବିଷୟରେ ପ୍ରବନ୍ଧ ପ୍ରକାଶନ ପାଇଁ ସର୍ବନିମ୍ନ ସୂଚନା |
ପ୍ରଥମେ, ଆସନ୍ତୁ RDML, ଟର୍ମିନୋଲୋଜି ସ୍ପେସିଫିକେସନ୍ ବିଷୟରେ ଆଲୋଚନା କରିବା |

ଯଦି ସବୁକିଛି ପାଇଁ କ standard ଣସି ମାନକ ସଂଜ୍ଞା ନାହିଁ, ତେବେ ଆଲୋଚନା ଜାରି ରଖିବା ଅସମ୍ଭବ, ଯେଉଁଥିପାଇଁ ପରୀକ୍ଷାରେ ଶବ୍ଦର ବ୍ୟାଖ୍ୟା ଏତେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ |
ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ ପରିମାଣିକ PCR ପରୀକ୍ଷଣରେ ବ୍ୟବହୃତ ଶବ୍ଦଗୁଡ଼ିକ ନିମ୍ନଲିଖିତ ବିଷୟବସ୍ତୁ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରେ |QIAGEN ଆମ ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ ସାରାଂଶ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିଛି |ନିମ୍ନଲିଖିତଗୁଡ଼ିକ ସବୁ ଶୁଖିଲା |ଦ୍ରବ୍ୟ .

ବିସ୍ତାର ବକ୍ର
ବିସ୍ତାରଣ ବକ୍ର PCR ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ ନିର୍ମିତ ବକ୍ରକୁ ବୁ refers ାଏ, ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା ସହିତ ଅବସିସା ଏବଂ ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ତୀବ୍ରତା ଅର୍ଡିନେଟ୍ ଭାବରେ |

ଏକ ଉତ୍କୃଷ୍ଟ ବର୍ଦ୍ଧନ ବକ୍ରରେ ନିମ୍ନଲିଖିତ ଗୁଣ ରହିବା ଉଚିତ |: ବେସ୍ ଲାଇନ୍ ସମତଳ କିମ୍ବା ସାମାନ୍ୟ ହ୍ରାସ ହୋଇଛି, ଏବଂ କ obvious ଣସି ସ୍ପଷ୍ଟ ଉପର ଧାରା ନାହିଁ;ବକ୍ରର ଇନଫ୍ଲେକ୍ସନ୍ ପଏଣ୍ଟ ସ୍ପଷ୍ଟ, ଏବଂ ଏକ୍ସପେନ୍ସିନାଲ୍ ପର୍ଯ୍ୟାୟର ope ୁଲା ବିସ୍ତାର ଦକ୍ଷତା ସହିତ ଆନୁପାତିକ |ଖାଲ ଯେତେ ଅଧିକ, ବିସ୍ତାର ଦକ୍ଷତା ଅଧିକ ହେବ;ସାମଗ୍ରିକ ବିସ୍ତାର ବକ୍ର ସମାନ୍ତରାଳତା ଭଲ, ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଟ୍ୟୁବ୍ ର ବିସ୍ତାର ଦକ୍ଷତା ସମାନ ଅଟେ;ନିମ୍ନ-ଏକାଗ୍ରତା ନମୁନାଗୁଡିକର ବିସ୍ତାର ବକ୍ରର ସୂକ୍ଷ୍ମ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ସ୍ପଷ୍ଟ |

ବେସ୍ ଲାଇନ୍ (ବେସ୍ ଲାଇନ୍)
ପ୍ରାଥମିକ ଚକ୍ରର ଶବ୍ଦ ସ୍ତର ହେଉଛି ବେସ୍ ଲାଇନ୍ |, ସାଧାରଣତ the ତୃତୀୟ ଏବଂ 15 ତମ ଚକ୍ର ମଧ୍ୟରେ ମାପ କରାଯାଏ, କାରଣ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଉତ୍ପାଦ ଦ୍ caused ାରା ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ମୂଲ୍ୟ ବୃଦ୍ଧି ଏହି ସମୟ ମଧ୍ୟରେ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ |ବେସ୍ ଲାଇନ୍ ଗଣନା କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା ବିଭିନ୍ନ ହୋଇପାରେ ଏବଂ ଯଦି ଉଚ୍ଚ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ପରିମାଣ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ କିମ୍ବା ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସ୍ତର ଅଧିକ ହୁଏ ତେବେ ଏହାକୁ ହ୍ରାସ କରିବାକୁ ପଡିପାରେ |

ବେସ୍ ଲାଇନ୍ ସେଟ୍ କରିବା ପାଇଁ ର ar ଖିକ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ରରୁ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଡାଟା ଦେଖିବା ଆବଶ୍ୟକ |ବେସ୍ ଲାଇନ୍ ସେଟ୍ ହୋଇଛି ଯାହା ଦ୍ the ାରା ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ରର ଅଭିବୃଦ୍ଧି ବେସ୍ ଲାଇନ୍ ଚକ୍ର ଟପ୍ ନମ୍ବର ଅପେକ୍ଷା ଏକ ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା ସହିତ ଆରମ୍ଭ ହୁଏ |ପ୍ରତ୍ୟେକ ଲକ୍ଷ୍ୟ କ୍ରମ ପାଇଁ ବେସଲାଇନଗୁଡିକ ପୃଥକ ଭାବରେ ସେଟ୍ ହେବା ଆବଶ୍ୟକ |ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଚକ୍ରରେ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଥିବା ହାରାହାରି ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ମୂଲ୍ୟଗୁଡିକ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦ୍ରବ୍ୟରେ ପ୍ରାପ୍ତ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ମୂଲ୍ୟରୁ ବାହାର କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |ବିଭିନ୍ନ ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ PCR ସଫ୍ଟୱେର୍ ର ସର୍ବଶେଷ ସଂସ୍କରଣ ବ୍ୟକ୍ତିଗତ ନମୁନା ପାଇଁ ବେସ୍ ଲାଇନ୍ ସେଟିଂସମୂହର ସ୍ୱୟଂଚାଳିତ ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ୍ କୁ ଅନୁମତି ଦିଏ |

PCR ବିସ୍ତାର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ପ୍ରଥମ କିଛି ଚକ୍ର ସମୟରେ, ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସିଗ୍ନାଲ୍ ଅଧିକ ପରିବର୍ତ୍ତନ ହୁଏ ନାହିଁ |ଏକ ସିଧା ଲାଇନକୁ ଆସିବା ବେସ୍ ଲାଇନ୍ କୁହାଯାଏ, କିନ୍ତୁ ଯଦି ଆମେ ପ୍ରଥମ କିଛି ଚକ୍ରକୁ ଭଲ ଭାବରେ ଦେଖିବା, ତେବେ ଦେଖିବା ଯେ ବେସ୍ ଲାଇନ୍ ଭିତରେ ନିମ୍ନ ଚିତ୍ରରେ କ’ଣ ଘଟୁଛି |

ପୃଷ୍ଠଭୂମି ପୃଷ୍ଠଭୂମି ଦର୍ଶାଏ |
ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ମୂଲ୍ୟ |ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ: ଅପାରଗ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଲିଭାଇବା;କିମ୍ବା SYBR ଗ୍ରୀନ୍ ବ୍ୟବହାର ହେତୁ ବହୁ ସଂଖ୍ୟକ ଡବଲ୍-ଷ୍ଟ୍ରେଡ୍ DNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ |ସଙ୍କେତର ପୃଷ୍ଠଭୂମି ଉପାଦାନଗୁଡିକ ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ PCR ସଫ୍ଟୱେର୍ ଆଲଗୋରିଦମ ଦ୍ୱାରା ଗାଣିତିକ ଭାବରେ ଅପସାରିତ ହୋଇଛି |

ସାମ୍ବାଦିକ ସଙ୍କେତ |
ରିପୋଟର୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ SYBR ଗ୍ରୀନ୍ ଦ୍ ated ାରା ଉତ୍ପନ୍ନ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ କୁ ବୁ Real ାଏ କିମ୍ବା ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ PCR ସମୟରେ ଫ୍ଲୋରୋସ୍କେନ୍ ଲେବଲ୍ କ୍ରମ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରୋବକୁ ସୂଚିତ କରେ |

ସାଧାରଣ ରିପୋର୍ଟର ସଙ୍କେତ (RN)
ପ୍ରତ୍ୟେକ ଚକ୍ରରେ ମାପ କରାଯାଉଥିବା ପାସିଭ୍ ରେଫରେନ୍ସ ରଙ୍ଗର ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ତୀବ୍ରତା ଦ୍ divided ାରା ବିଭକ୍ତ ହୋଇଥିବା ସାମ୍ବାଦିକ ରଙ୍ଗର ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ତୀବ୍ରତାକୁ RN ସୂଚିତ କରେ |

ପାସିଭ୍ ରେଫରେନ୍ସ ରଙ୍ଗ |
କିଛି ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ରେ,ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗ ROX ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ କୁ ସ୍ ize ାଭାବିକ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |।ଭୁଲ୍ ପାଇପେଟିଂ, ଭଲ ସ୍ଥିତି, ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଫ୍ଲେକଚ୍ୟୁସନ ହେତୁ ଏହା ପରିବର୍ତ୍ତନ ପାଇଁ ସଂଶୋଧନ କରେ |

ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସୀମା (ସୀମା)
ପୃଷ୍ଠଭୂମି ମୂଲ୍ୟ ଉପରେ ଏବଂ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ରର ମାଳଭୂମି ମୂଲ୍ୟଠାରୁ ଯଥେଷ୍ଟ ତଳେ ସଜାଡି ଦିଆଗଲା |ଏହା PCR ଚିହ୍ନଟର ଲଗ୍-ଲାଇନ୍ ପରିସରକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ the କରି ବର୍ଦ୍ଧନ ବକ୍ରର ର ar ଖ୍ୟ ଅଞ୍ଚଳରେ ରହିବା ଆବଶ୍ୟକ |ଥ୍ରେସହୋଲ୍ଡଗୁଡିକ ଲଗ୍-ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ର ଦୃଶ୍ୟରେ ସେଟ୍ ହେବା ଉଚିତ ଯାହା ଦ୍ PCR ାରା PCR ର ଲଗ୍-ଲାଇନ୍ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ସହଜରେ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇପାରିବ |ଯଦି ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ PCR ରେ ଏକାଧିକ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ଅଛି, ପ୍ରତ୍ୟେକ ଟାର୍ଗେଟ୍ ପାଇଁ ଥ୍ରେଶୋଲ୍ଡ ସେଟ୍ ହେବା ଜରୁରୀ |ସାଧାରଣତ ,, PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ପ୍ରଥମ 15 ଚକ୍ରର ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସିଗ୍ନାଲ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପୃଷ୍ଠଭୂମି ସଙ୍କେତ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଥ୍ରେସହୋଲ୍ଡ PCR ର ପ୍ରଥମ 3 ରୁ 15 ଚକ୍ରର ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସଙ୍କେତର ମାନକ ବିଘ୍ନର 10 ଗୁଣ ଅଟେ, ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସୀମା PCR ବିସ୍ତାରର ସୂକ୍ଷ୍ମ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ସେଟ୍ ହୋଇଛି |ସାଧାରଣତ ,, ପ୍ରତ୍ୟେକ ଯନ୍ତ୍ରର ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ଏହାର ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଥ୍ରେଶୋଲ୍ଡ ସେଟ୍ ଥାଏ |

ଚକ୍ର ଥ୍ରେସହୋଲ୍ଡ (CT) କିମ୍ବା କ୍ରସିଂ ପଏଣ୍ଟ (ସିପି) |
ଯେଉଁ ଚକ୍ରରେ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ର ସୀମା ଅତିକ୍ରମ କରେ (ଅର୍ଥାତ୍ ଯେଉଁଠାରେ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଚିହ୍ନଟ ଯଥେଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥାଏ) |CT ଏକ ଭଗ୍ନାଂଶ ହୋଇପାରେ ଏବଂ ଆରମ୍ଭ ଟେମ୍ପଲେଟର ପରିମାଣ ଗଣନା କରାଯାଇପାରେ |ପ୍ରତ୍ୟେକ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଟ୍ୟୁବରେ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ ନିର୍ଦ୍ଧାରିତ ସୀମାକୁ ପହଞ୍ଚିବା ପରେ CT ମୂଲ୍ୟ ଅନୁଭୂତ ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟାକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ |ପ୍ରତ୍ୟେକ ଟେମ୍ପଲେଟର CT ମୂଲ୍ୟ ଏବଂ ଟେମ୍ପଲେଟର ପ୍ରାରମ୍ଭିକ କପି ନମ୍ବରର ଲୋଗାରିଦମ ମଧ୍ୟରେ ଏକ ର line ଖ୍ୟ ସମ୍ପର୍କ ଅଛି |ପ୍ରାରମ୍ଭିକ କପି ସଂଖ୍ୟା ଅଧିକ, CT ମୂଲ୍ୟ ଛୋଟ ଏବଂ ବିପରୀତ |।ଜଣାଶୁଣା ପ୍ରାରମ୍ଭିକ କପି ସଂଖ୍ୟା ସହିତ ଏକ ମାନକ ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ ମାନକ ବକ୍ର ତିଆରି କରାଯାଇପାରିବ, ଯେଉଁଠାରେ ଅବସିସା CT ମୂଲ୍ୟକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ, ଏବଂ ଅର୍ଡିନେଟ୍ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ କପି ନମ୍ବରର ଲୋଗାରିଦମକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ |ତେଣୁ, ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଅଜ୍ଞାତ ନମୁନାର CT ମୂଲ୍ୟ ମିଳିବ, ନମୁନାର ପ୍ରାରମ୍ଭିକ କପି ସଂଖ୍ୟାକୁ ମାନକ ବକ୍ରରୁ ଗଣନା କରାଯାଇପାରିବ |

ΔCT ମୂଲ୍ୟ
ΔCT ମୂଲ୍ୟ ବର୍ଣ୍ଣନା କରେ |ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ଏବଂ ସଂପୃକ୍ତ ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ CT ମୂଲ୍ୟ ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ |, ଯେପରିକି ଏକ ଗୃହରକ୍ଷୀ ଜିନ୍, ଏବଂ ବ୍ୟବହୃତ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ପରିମାଣକୁ ସାଧାରଣ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ:
⇒ΔCT = CT (ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜିନ୍) - CT (ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍)

ΔΔCT ମୂଲ୍ୟ
InterestCT ମୂଲ୍ୟ ଆଗ୍ରହର ଏକ ନମୁନାର ହାରାହାରି ΔΔCT ମୂଲ୍ୟ (ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଉତ୍ତେଜିତ କୋଷଗୁଡିକ) ଏବଂ ଏକ ରେଫରେନ୍ସ ନମୁନାର ହାରାହାରି ΔΔT ମୂଲ୍ୟ ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ ବର୍ଣ୍ଣନା କରେ (ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଅଣସଂରକ୍ଷିତ କୋଷଗୁଡ଼ିକ) |ରେଫରେନ୍ସ ନମୁନାକୁ କାଲିବ୍ରେସନ୍ ନମୁନା ମଧ୍ୟ କୁହାଯାଏ ଏବଂ ଆପେକ୍ଷିକ ପରିମାଣ ପାଇଁ ଅନ୍ୟ ସମସ୍ତ ନମୁନା ଏହାକୁ ସ୍ ized ାଭାବିକ କରାଯାଇଥାଏ:
⇒ΔΔCT = ହାରାହାରି ΔCT (ଆଗ୍ରହର ନମୁନା) - ହାରାହାରି ΔCT (ରେଫରେନ୍ସ ନମୁନା)

ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ (ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍)
ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସ୍ତର, ଯେପରିକି ଗୃହରକ୍ଷୀ ଜିନ୍ (ଗୃହରକ୍ଷୀ ଜିନ୍), ନମୁନା ମଧ୍ୟରେ ଭିନ୍ନ ନୁହେଁ |ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ର CT ମୂଲ୍ୟକୁ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ସହିତ ତୁଳନା କରିବା, ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସ୍ତରକୁ ଇନପୁଟ୍ RNA କିମ୍ବା cDNA ପରିମାଣରେ ସ୍ ized ାଭାବିକ କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ (ଉପରେ ΔCT ମୂଲ୍ୟ ଉପରେ ବିଭାଗ ଦେଖନ୍ତୁ) |

ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ପାଇଁ ସଠିକ୍ |ସମ୍ଭାବ୍ୟ RNA ଅବକ୍ଷୟ କିମ୍ବା RNA ନମୁନାରେ ଏନଜାଇମ୍ ଇନହିବିଟରର ଉପସ୍ଥିତି, ଏବଂ RNA ବିଷୟବସ୍ତୁରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଦକ୍ଷତା, ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ପୁନରୁଦ୍ଧାର ଏବଂ ନମୁନା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ |ସର୍ବୋତ୍କୃଷ୍ଟ ରେଫରେନ୍ସ ଜେନ (ଗୁଡିକୁ) ବାଛିବା ପାଇଁ, ଆମେ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ସେଟିଂ ଉପରେ ନିର୍ଭରଶୀଳ ସର୍ବୋତ୍କୃଷ୍ଟ ରେଫରେନ୍ସକୁ ଚୟନ କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦେବା ପାଇଁ ଆଲଗୋରିଦମକୁ ସଂଶୋଧନ କରିଥିଲୁ |

ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ |
ଏକ କଣ୍ଟ୍ରୋଲ୍ କ୍ରମ ଯାହା ଟାର୍ଗେଟ୍ କ୍ରମ ସହିତ ସମାନ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇଥାଏ ଏବଂ ଏକ ଭିନ୍ନ ଅନୁସନ୍ଧାନ ସହିତ ଯାଞ୍ଚ କରାଯାଇଥାଏ (ଅର୍ଥାତ୍ ଡୁପ୍ଲେକ୍ସ PCR ପ୍ରଦର୍ଶନ) |ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ନିୟନ୍ତ୍ରଣଗୁଡିକ ବିଫଳ ବିଫଳତାକୁ ଏଡ଼ାଇବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଯେପରିକି ଯେତେବେଳେ ଲକ୍ଷ୍ୟ କ୍ରମ ଚିହ୍ନଟ ହୁଏ ନାହିଁ |
କାଲିବ୍ରେସନ୍ ନମୁନା |
ଏକ ରେଫରେନ୍ସ ନମୁନା (ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଏକ ସେଲ୍ ରେଖା କିମ୍ବା ଟିସୁରୁ ଶୁଦ୍ଧ RNA) ଆପେକ୍ଷିକ ପରିମାଣରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ ଯାହା ଜିନ୍ ର ଆପେକ୍ଷିକ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସ୍ତର ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବାକୁ ଅନ୍ୟ ସମସ୍ତ ନମୁନା ତୁଳନା କରିବାକୁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |କାଲିବ୍ରେସନ୍ ନମୁନା ଯେକ any ଣସି ନମୁନା ହୋଇପାରେ, କିନ୍ତୁ ସାଧାରଣତ a ଏକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଅଟେ (ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଚିକିତ୍ସିତ ନମୁନା କିମ୍ବା ପରୀକ୍ଷଣର ସମୟ ଶୂନରୁ ଏକ ନମୁନା) |

ସକରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ |
ସହିତ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |ଜଣାଶୁଣା ପରିମାଣର ଟେମ୍ପଲେଟ୍ |।ଏକ ପ୍ରାଇମର୍ ସେଟ୍ କିମ୍ବା ପ୍ରାଇମର୍ - ପ୍ରୋବ ସେଟ୍ ସଠିକ୍ ଭାବରେ କାମ କରୁଛି ଏବଂ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସଠିକ୍ ଭାବରେ ସେଟ୍ ହୋଇଛି କି ନାହିଁ ଯାଞ୍ଚ କରିବା ପାଇଁ ସକରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣଗୁଡ଼ିକ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |

କ Template ଣସି ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ (NTC)
ଏକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଯାହା ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ବ୍ୟତୀତ ବିସ୍ତାର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ସମସ୍ତ ଆବଶ୍ୟକୀୟ ଉପାଦାନ ଧାରଣ କରିଥାଏ, ଯାହା ସାଧାରଣତ water ଜଳ ସହିତ ବଦଳାଯାଇଥାଏ |NTC ର ବ୍ୟବହାର ପୁନ ag ପ୍ରଦୂଷଣ କିମ୍ବା ବିଦେଶୀ DNA ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଦୂଷିତ ହୋଇପାରେ, ଯାହାଦ୍ୱାରା ଚିହ୍ନଟ ତଥ୍ୟର ସତ୍ୟତା ଏବଂ ବିଶ୍ୱସନୀୟତା ନିଶ୍ଚିତ ହୁଏ |NTC ନିୟନ୍ତ୍ରଣର ବୃଦ୍ଧି ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ସୂଚିତ କରେ |

କ RT ଣସି RT ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ନାହିଁ (NRT)
RNA ନିଷ୍କାସନ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ଅବଶିଷ୍ଟ ଜେନୋମିକ୍ DNA ରହିପାରେ, ଯାହା ଅତ୍ୟନ୍ତ କ୍ଷତିକାରକ ଏବଂ ଡାଟା ଗୁଣବତ୍ତା ତଥା qPCR ର ପ୍ରାକୃତିକ ଶତ୍ରୁକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିଥାଏ, ତେଣୁ ପରୀକ୍ଷଣର ପରିକଳ୍ପନା କରିବାବେଳେ ଏହାକୁ କେବଳ RNA ଚିହ୍ନଟକୁ ବ ify ାଇବା ପାଇଁ ଡିଜାଇନ୍ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |ଦୁଇଟି ଉପାୟ ଅଛି, ଗୋଟିଏ ହେଉଛି ଇଣ୍ଟ୍ରନ୍ ମଧ୍ୟରେ ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍ କରିବା, ଅନ୍ୟଟି ହେଉଛି DNA କୁ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଅପସାରଣ କରିବା, କେଉଁଟି ଭଲ, ଯାହା ପରେ ଆଲୋଚନା ହେବ |DNA ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ଚିହ୍ନିବା ପାଇଁ NTR ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଏକ ଯାଦୁ ଦର୍ପଣ |ଯଦି ବିସ୍ତାର ଅଛି, ଏହାର ଅର୍ଥ ହେଉଛି ପ୍ରଦୂଷଣ ଅଛି |

ମାନକ
ମାନକ ହେଉଛି ଜଣାଶୁଣା ଏକାଗ୍ରତାର ନମୁନା କିମ୍ବା କପି ସଂଖ୍ୟା ଯାହାକି ଏକ ମାନକ ବକ୍ର ନିର୍ମାଣରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ମାନାଙ୍କ ସ୍ଥିରତାକୁ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ, ଜେନ ଖଣ୍ଡକୁ ସାଧାରଣତ the ପ୍ଲାଜାମିଡରେ କ୍ଲୋନ କରାଯାଏ ଏବଂ ମାନକ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |

ମାନକ ବକ୍ର
ସାଧାରଣତ the ଦ୍ୱିଗୁଣିତ ଅନୁପାତ ଅନୁଯାୟୀ ମାନକ ଉତ୍ପାଦ ସହିତ ଅତି କମରେ 5 ଏକାଗ୍ରତା ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟରେ ମିଶ୍ରିତ ହୁଏ, ଏବଂ 5 ପଏଣ୍ଟ CT ମୂଲ୍ୟ ଏବଂ କପି ନମ୍ବରର ସଂଯୋଜନାରେ ଅଙ୍କିତ ହୁଏ, ଏବଂ ପଏଣ୍ଟଗୁଡିକ ଏକ ମାନକ ବକ୍ର ସୃଷ୍ଟି କରିବାକୁ ଏକ ରେଖା ଗଠନ ପାଇଁ ସଂଯୁକ୍ତ |ପ୍ରତ୍ୟେକ ମାନକ ବକ୍ର ପାଇଁ, ଏହାର ବ ity ଧତା ଯାଞ୍ଚ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |Ope ୁଲା ମୂଲ୍ୟ –3.3 ରୁ –3.8 ମଧ୍ୟରେ ପଡେ, ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଏକାଗ୍ରତା ତ୍ରିଗୁଣରେ କରାଯାଏ |ଅନ୍ୟ ପଏଣ୍ଟଗୁଡିକ ଠାରୁ ଯଥେଷ୍ଟ ଭିନ୍ନ ପଏଣ୍ଟଗୁଡିକ ପରିତ୍ୟାଗ କରାଯିବା ଉଚିତ |ପରୀକ୍ଷା ହେବାକୁ ଥିବା ନମୁନାର CT ମୂଲ୍ୟକୁ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ବକ୍ରରେ ଅଣାଯାଏ, ଏବଂ ପରୀକ୍ଷା ହେବାକୁ ଥିବା ନମୁନାର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସ୍ତର ଗଣନା କରାଯାଇପାରେ |

ପରୀକ୍ଷା ହେବାକୁ ଥିବା ନମୁନାର CT ମୂଲ୍ୟକୁ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ବକ୍ରରେ ଅଣାଯାଏ, ଏବଂ ପରୀକ୍ଷା ହେବାକୁ ଥିବା ନମୁନାର ପ୍ରାରମ୍ଭିକ କପି ସଂଖ୍ୟା ଗଣନା କରାଯାଇପାରେ |

ଦକ୍ଷତା ଏବଂ ope ୁଲା |
ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ବକ୍ରର ope ୁଲା ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ର କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତାକୁ ପ୍ରତିପାଦିତ କରେ |
-3.322 ର ଏକ ope ୁଲା ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ PCR ବିସ୍ତାର ଦକ୍ଷତା 1, କିମ୍ବା 100% ଦକ୍ଷ, ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଚକ୍ରରେ PCR ଉତ୍ପାଦର ପରିମାଣ ଦ୍ୱିଗୁଣିତ ହୁଏ |
· .33.322 ରୁ କମ୍ ଏକ ଖାଲ (ଯଥା, –3.8) ଏକ PCR ଦକ୍ଷତାକୁ ସୂଚିତ କରେ |
· .33.322 ରୁ ଅଧିକ ଏକ ope ୁଲା (ଯଥା, –3.0) ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ PCR ଦକ୍ଷତା 100% ରୁ ଅଧିକ ଦେଖାଯାଉଛି, ଯାହା କ urious ତୁହଳପ୍ରଦ, PCR ର ଗୋଟିଏ ଚକ୍ର କିପରି ବର୍ଦ୍ଧିତ ଉତ୍ପାଦର ଦୁଇଗୁଣରୁ ଅଧିକ ଉତ୍ପାଦନ କରିପାରିବ?ଏହି ପରିସ୍ଥିତି PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ଅଣ-ର ar ଖିକ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ଘଟିଥାଏ, ଅର୍ଥାତ୍ ସେଠାରେ ବହୁ ପରିମାଣର ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି |

ତରଳିବା ବକ୍ର
QPCR ବିସ୍ତାରଣ ସମାପ୍ତ ହେବା ପରେ, PCR ଉତ୍ପାଦ ଗରମ ହୁଏ |ତାପମାତ୍ରା ବ As ଼ିବା ସହିତ ଡବଲ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଉତ୍ପାଦ ଧୀରେ ଧୀରେ ତରଳିଯାଏ, ଫଳସ୍ୱରୂପ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ତୀବ୍ରତା କମିଯାଏ |ଯେତେବେଳେ ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ତାପମାତ୍ରା (Tm) ପହଞ୍ଚେ, ବହୁ ସଂଖ୍ୟକ ଉତ୍ପାଦ ତରଳି ଯିବ |ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ତୀବ୍ର ହ୍ରାସ ହୁଏ |ବିଭିନ୍ନ PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡ଼ିକରେ ଭିନ୍ନ ଭିନ୍ନ Tm ମୂଲ୍ୟ ଏବଂ ଭିନ୍ନ ତରଳିବା ତାପମାତ୍ରା ଥାଏ, ଯାହାଦ୍ୱାରା PCR ର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଚିହ୍ନଟ ହୋଇପାରିବ |

ତରଳିବା ବକ୍ର (derivative curve)
ତରଳିବା ବକ୍ର ଏକ ଶିଖର ମାନଚିତ୍ର ଗଠନ ପାଇଁ ଉତ୍ପନ୍ନ ହୋଇଛି, ଯାହା PCR ଉତ୍ପାଦ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ସ୍ଥିତିକୁ ଅଧିକ ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ଭାବରେ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିପାରିବ |ଯେହେତୁ ତରଳିବା ତାପମାତ୍ରା ହେଉଛି DNA ଖଣ୍ଡର Tm ମୂଲ୍ୟ, ତେଣୁ କିଛି ପାରାମିଟର ଯାହା DNA ଖଣ୍ଡର Tm ମୂଲ୍ୟ ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ, ଯେପରି ଖଣ୍ଡ ଖଣ୍ଡ ଆକାର, ଜିସି ବିଷୟବସ୍ତୁ ଇତ୍ୟାଦି ବିଚାର କରାଯାଇପାରେ, ସାଧାରଣତ speaking ଆମର ପ୍ରାଥମିକ ଡିଜାଇନ୍ ନୀତି ଅନୁଯାୟୀ,ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦ୍ରବ୍ୟର ଦ length ର୍ଘ୍ୟ 80-300bp ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଅଛି, ତେଣୁ ତରଳିବା ତାପମାତ୍ରା 80 ° C ରୁ 90 ° C ମଧ୍ୟରେ ରହିବା ଉଚିତ |

ତରଳିବା ବକ୍ରର ବ୍ୟାଖ୍ୟା: ଯଦି ଏକମାତ୍ର ମୁଖ୍ୟ ଶିଖର 80 ° C-90 ° C ମଧ୍ୟରେ ଦେଖାଯାଏ, ଏହାର ଅର୍ଥ ହେଉଛି ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ସିଦ୍ଧ ଅଟେ;ଯଦି ମୁଖ୍ୟ ଶିଖର 80 ° C-90 ° C ମଧ୍ୟରେ ଦେଖାଯାଏ ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ଶିଖରଗୁଡିକ 80 ° C ତଳେ ଦେଖାଯାଏ, ତେବେ ପ୍ରାଥମିକ ଡ଼ାଇମର୍ କୁ ବିଚାର କରାଯାଏ |ଏହାର ସମାଧାନ ପାଇଁ ଆପଣ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ବୃଦ୍ଧି କରିବାକୁ ଚେଷ୍ଟା କରିପାରିବେ;ଯଦି ମୁଖ୍ୟ ଶିଖର 80 ° C-90 ° C ମଧ୍ୟରେ ଦେଖାଯାଏ, ଏବଂ ତାପମାତ୍ରା ବ when ଼ିବା ପରେ ବିଭିନ୍ନ ଶିଖର ପୁନର୍ବାର ଦେଖାଯାଏ, ଏହା ମୂଳତ considered ବିବେଚନା କରାଯାଏ ଯେ ସେଠାରେ DNA ପ୍ରଦୂଷଣ ଅଛି, ଏବଂ ପରୀକ୍ଷଣର ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ DNA ଅପସାରଣ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |

ଅବଶ୍ୟ, ତଥାପି କିଛି ଅସ୍ୱାଭାବିକ ପରିସ୍ଥିତି ଅଛି, ଯାହା ନିମ୍ନରେ ଗୋଟିଏ ପରେ ଗୋଟିଏ ଭାଙ୍ଗିଯିବ |
3. ଉନ୍ନତ ଜ୍ଞାନ

QPCR କରିବାକୁ, ମୋତେ MIQE କହିବାକୁ ପଡିବ,ସର୍ବନିମ୍ନ ସୂଚନାପ୍ରକାଶନ ପାଇଁପରିମାଣିକ |ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR |ପରୀକ୍ଷଣ - ପ୍ରକୃତ ସମୟ ପରିମାଣିକ PCR ବିଷୟରେ ପ୍ରବନ୍ଧ ପ୍ରକାଶନ ପାଇଁ ସର୍ବନିମ୍ନ ସୂଚନା |ପରୀକ୍ଷଣ |ସମସ୍ତଙ୍କ ବୁ understanding ାମଣାକୁ ସରଳ କରିବାକୁ, ଆମେ ମୁଖ୍ୟ ବିଷୟବସ୍ତୁକୁ ସରଳ କରିବୁ |

ଆପଣ ଇଣ୍ଟରନେଟରେ MIQE ର ମୂଳ ପାଠ୍ୟ ସନ୍ଧାନ କରିପାରିବେ, ଏବଂ ସବୁଠାରୁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ କଥା ହେଉଛି ଏହା ହେଉଛି |ଡାଟା ଯାଞ୍ଚ ତାଲିକା ଯାହା ଏକ ଆର୍ଟିକିଲ୍ ପ୍ରକାଶନ କରିବା ସମୟରେ ପ୍ରଦାନ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ | .

ସମୀକ୍ଷକମାନେ ଏହି ବିବରଣୀ ପ reading ି ପରୀକ୍ଷଣର ଗୁଣର ବିଚାର କରିପାରିବେ;ଭବିଷ୍ୟତର ପାଠକମାନେ ମଧ୍ୟ ପରୀକ୍ଷଣର ପୁନରାବୃତ୍ତି କିମ୍ବା ଉନ୍ନତି ପାଇଁ ଏହାକୁ ବ୍ୟବହାର କରିପାରିବେ |
ସୂଚନାଯୋଗ୍ୟ ଯେ ଏହି ତାଲିକାରେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ତାଲିକାର ଗୁରୁତ୍ୱ ଯଥାକ୍ରମେ E କିମ୍ବା D ସହିତ ଚିହ୍ନିତ ହୋଇଛି |ଏହାର ମତଲବ କ 'ଣ?ଇ: ଜରୁରୀ ସୂଚନା (ଦାଖଲ ହେବା ଜରୁରୀ);ଡି: ଆକାଂକ୍ଷିତ ସୂଚନା (ଯଥାସମ୍ଭବ ପ୍ରଦାନ କରନ୍ତୁ) |

MIQE (1) - ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଡିଜାଇନ୍ |
ସ୍ନାତକୋତ୍ତର ଅଧ୍ୟୟନ ସମାପ୍ତ କରିବା ପରେ ସେମାନଙ୍କର ପ୍ରତିରକ୍ଷା ସମାପ୍ତ କରିଥିବା ଅନେକ ସ୍କାମବାଗ୍ ସ୍ independ ାଧୀନ ଭାବରେ କିପରି ଏକ ପରୀକ୍ଷଣର ଡିଜାଇନ୍ କରିବେ, ନୋଟବୁକ୍ ଖୋଲିବେ ଏବଂ ଶିକ୍ଷକ ଯାହା କରିବାକୁ କୁହନ୍ତି ତାହା କରିବେ ନାହିଁ |ଫଳସ୍ୱରୂପ, ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଡିଜାଇନ୍ କଠୋର ନଥିଲା ଏବଂ ପତ୍ରିକାର ସମ୍ପାଦକୀୟ ବିଭାଗ କହିଥିଲେ ଯେ ସେମାନେ ଏହି ଚିତ୍ର ଏବଂ ସେହି ଚିତ୍ର ତିଆରି କରିବାକୁ ଚାହୁଁଛନ୍ତି, ତେଣୁ ସେମାନେ ଏହାକୁ ଏକ ବିସ୍ମୟରେ କରିଥିଲେ।ଏହିପରି ସ୍କାମବାଗଗୁଡ଼ିକ ତିଆରି ହୁଏ!

ଘର ନିକଟତର, ପରୀକ୍ଷଣର ପ୍ରଥମ ନୀତି ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା |ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ତର୍କର କଠୋରତା |।ସବୁଠାରୁ ମ fundamental ଳିକ ବିଷୟ ହେଉଛି ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଡିଜାଇନ୍, ଏବଂ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଡିଜାଇନ୍ ବିଷୟରେ ସବୁଠାରୁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବିଷୟ ହେଉଛି ଲକ୍ଷ୍ୟ ନମୁନା, ରେଫରେନ୍ସ ନମୁନା (ନିୟନ୍ତ୍ରଣ) ଏବଂ ପୁନରାବୃତ୍ତି ସଂଖ୍ୟା କିପରି ସେଟ୍ କରାଯିବ, ଯାହା ଦ୍ the ାରା ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ତଥ୍ୟକୁ ରେଫରେନ୍ସ, ତୁଳନାତ୍ମକ ଏବଂ ବିଶ୍ୱାସଯୋଗ୍ୟ କରାଯାଇପାରିବ |

ଲକ୍ଷ୍ୟ ନମୁନା |ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଚିକିତ୍ସା ପରେ ଆମକୁ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ଚିହ୍ନଟ କରିବାକୁ ଆବଶ୍ୟକ କରୁଥିବା ନମୁନାକୁ ସୂଚିତ କରେ |ରେଫରେନ୍ସ ନମୁନା |କ treatment ଣସି ଚିକିତ୍ସା ବିନା ନମୁନା ଅଟେ, ଯାହାକୁ ଜୀବବିଜ୍ଞାନରେ ବନ୍ୟ ପ୍ରକାର ଭାବରେ କୁହାଯାଏ |

ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ନକଲ |ବହୁତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ |ସାଧାରଣତ ,, ମନଲୋଭା ନକଲ ସଂଖ୍ୟା ତିନିରୁ ଅଧିକ ହେବା ଜରୁରୀ |ଜ bi ବିକ ନକଲ କ’ଣ ଏବଂ ବ technical ଷୟିକ ନକଲ କ’ଣ ତାହା ପୃଥକ କରିବା ଆବଶ୍ୟକ |

ଜ Bi ବିକ ପ୍ରତିକୃତି |: ବିଭିନ୍ନ ସାମଗ୍ରୀ (ସମୟ, ଉଦ୍ଭିଦ, ବ୍ୟାଚ୍, ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ଲେଟ୍) ସହିତ ସମାନ ଯାଞ୍ଚ ପରୀକ୍ଷଣ |

ଜ Bi ବିକ ନକଲ |
ଆସନ୍ତୁ ହଳଦୀ ର କୀଟନାଶକ ଚିକିତ୍ସାକୁ ଏକ ଉଦାହରଣ ଭାବରେ ଗ୍ରହଣ କରିବା |ଆମେ ABC ର ତିନୋଟି ଉଦ୍ଭିଦ ଉପରେ କୀଟନାଶକ ସ୍ପ୍ରେ କରିବାକୁ ଚାହୁଁ, ତା’ପରେ ABC ର ତିନୋଟି ଉଦ୍ଭିଦ ତିନୋଟି ଜ ological ବିକ ପ୍ରତିକୃତି, ଏବଂ ସେଗୁଡ଼ିକ ସମାନ ଯାଞ୍ଚ ପରୀକ୍ଷଣ ବିଭିନ୍ନ ସାମଗ୍ରୀ ସହିତ କରାଯାଇଥାଏ |କିନ୍ତୁ ଏକ ପରୀକ୍ଷଣ ଭାବରେ, ଏକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ ଆବଶ୍ୟକ, ତେଣୁ ଆମେ ଉଦ୍ଭିଦ A ର ଏକ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଗୋଷ୍ଠୀ ଗଠନ ପାଇଁ ଉଦ୍ଭିଦ A ର ଗୋଟିଏ ଶାଖା ସ୍ପ୍ରେ କରିପାରିବା ଏବଂ ଏକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ଗଠନ ପାଇଁ ଉଦ୍ଭିଦ A ର ଅନ୍ୟ ଶାଖାଗୁଡ଼ିକୁ ସ୍ପ୍ରେ କରିପାରିବା ନାହିଁ |B ଏବଂ C ପାଇଁ ସମାନ କରନ୍ତୁ |

ଯାନ୍ତ୍ରିକ ପ୍ରତିକୃତି (ଯାନ୍ତ୍ରିକ ପ୍ରତିକୃତି): ଅପରେସନ୍ ଦ୍ caused ାରା ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ତ୍ରୁଟିକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ ଏହା ଏକ ବାରମ୍ବାର ପରୀକ୍ଷଣ, ଯାହା ପ୍ରକୃତରେ ସମାନ ପଦାର୍ଥରେ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ଏକ ନକଲ ଛିଦ୍ର |ଉଭୟ ଚିକିତ୍ସା ଏବଂ ନିୟନ୍ତ୍ରଣରେ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜିନ୍ ଏବଂ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ର ନକଲ ସେଟିଂସମୂହ (ସର୍ବନିମ୍ନ ତିନି) ରହିବା ଜରୁରୀ |

ଯାନ୍ତ୍ରିକ ପୁନରାବୃତ୍ତି |
କୀଟନାଶକ ସହିତ ଚିକିତ୍ସିତ ହଳଦୀକୁ ପୁନର୍ବାର ଏକ ଉଦାହରଣ ଭାବରେ ନିଅନ୍ତୁ |ଉଦ୍ଭିଦ A ର ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଗୋଷ୍ଠୀ ପାଇଁ, ଆମେ ଏହାର ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜିନ୍ ଏବଂ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ପାଇଁ ଯଥାକ୍ରମେ 1, 2, ଏବଂ 3 ର ତିନୋଟି PCR ଛିଦ୍ର ତିଆରି କରିଥିଲୁ, ଯାହା ଚିହ୍ନଟ ପରେ ହାରାହାରି ନେବାକୁ |ଉଦ୍ଭିଦ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପାଇଁ ଏକ ଗୋଷ୍ଠୀକୁ ମଧ୍ୟ ସମାନ treated ଙ୍ଗରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ |ସେହିଭଳି, ବି ଏବଂ ସି ଉଦ୍ଭିଦ ପାଇଁ ସମାନ ଚିକିତ୍ସା କର |ଏହା ହେଉଛି ଯାନ୍ତ୍ରିକ ପୁନରାବୃତ୍ତି |

ଏହା ଧ୍ୟାନ ଦେବା ଉଚିତ୍ |ପରିସଂଖ୍ୟାନରେ ଯାହା ପ୍ରବେଶ କରେ ତାହା ହେଉଛି ଜ ological ବିକ ପୁନରାବୃତ୍ତି, ଏବଂ ବ technical ଷୟିକ ପୁନରାବୃତ୍ତି ହେଉଛି ପରୀକ୍ଷଣ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ କ r ଣସି ଅନିୟମିତ ଘଟଣା ଅଛି କି ନାହିଁ ପରୀକ୍ଷା କରିବା, ଯାହା ଦ୍ the ାରା ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଫଳାଫଳକୁ ବିଶ୍ ible ାସଯୋଗ୍ୟ କରିବା, ଅର୍ଥାତ୍ ଆମେ ସେମାନଙ୍କ ହାରାହାରି ନେଇ ତ୍ରୁଟି ଏଡ଼ାଇବା |

ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ - NTC ଏବଂ NRT |
NTC (ନୋ-ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ), ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ବିନା ଏକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ, ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପଦାର୍ଥ ଦୂଷିତ ହୋଇଛି କି ନାହିଁ ଯାଞ୍ଚ କରିବାକୁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ସାଧାରଣତ ,, ଜଳ ଏକ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ଯଦି ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅଛି, ଏହା ସୂଚିତ କରେ ଯେ ଲାବୋରେଟୋରୀରେ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ପ୍ରଦୂଷଣ ଘଟିଛି |

ଏହି ପ୍ରଦୂଷଣଗୁଡିକ ଏଥିରୁ ଆସିଛି: ଅପରିଷ୍କାର ଜଳ, ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଡିଏନ୍ଏ ଧାରଣ କରିଥିବା ଅଯୋଗ୍ୟ ରେଜେଣ୍ଟସ୍, ପ୍ରାଥମିକ ପ୍ରଦୂଷଣ, ଲାବୋରେଟୋରୀ ଉପକରଣ ପ୍ରଦୂଷଣ, ଏରୋସୋଲ୍ ପ୍ରଦୂଷଣ ଇତ୍ୟାଦି, RNase ସ୍କାଭେନ୍ସର୍ ଏବଂ RNase ଇନହିବିଟର ବ୍ୟବହାର କରିବା ଆବଶ୍ୟକ |ଏରୋସୋଲ ପ୍ରଦୂଷଣ ଖୋଜିବା ସବୁଠାରୁ କଷ୍ଟକର |କଳ୍ପନା କର ଯେ ତୁମର ଲାବୋରେଟୋରୀ ଧୂଆଁ ପରି, ବିଭିନ୍ନ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ବାୟୁରେ ନିଲମ୍ବିତ |

NRT (No-Reverse Transcriptase), ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ବିନା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ହେଉଛି, ଏକ ନକରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ଅଣ-ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଡ୍ RNA, ଯାହାକି gDNA ଅବଶିଷ୍ଟ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ |

ଜିନ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ କରିବାବେଳେ, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପରେ cDNA ର ପରିମାଣ ଚିହ୍ନଟ କରି RNA ର ପରିମାଣ ଚିହ୍ନଟ ହୁଏ |ଯଦି RNA ଶୁଦ୍ଧ ହୁଏ ତେବେ gDNA ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ ଥାଏ, ଏହା ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଫଳାଫଳରେ ତ୍ରୁଟି ଘଟାଇବ, କାରଣ ପ୍ରାପ୍ତ ପ୍ରକୃତ ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ହେଉଛି gDNA ଏବଂ cDNA |ସମୁଦାୟ ସ୍ତରରେ, କେବଳ cDNA ନୁହେଁ, RNA ଉତ୍ତୋଳନ ସମୟରେ gDNA କୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ରୂପେ ଅପସାରଣ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |

MIQE (2) - ନମୁନା ସୂଚନା |
ତଥାକଥିତ ନମୁନା ସୂଚନାର ଅର୍ଥ ହେଉଛି ଯେ ଯେତେବେଳେ ଆମେ qPCR ବିଷୟରେ ଏକ ଆର୍ଟିକିଲ୍ ପ୍ରକାଶ କରୁ, ଆମକୁ ନମୁନା ସୂଚନାକୁ ସ୍ପଷ୍ଟ ଭାବରେ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରିବାକୁ ପଡିବ, ଯାହା ପ୍ରବନ୍ଧର ଏକ ଅପରିହାର୍ଯ୍ୟ ଅଂଶ |ସେହିପରି ଭାବରେ, ଯେତେବେଳେ ଆମେ ନମୁନା ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ କରୁ, ନମୁନାଗୁଡ଼ିକର ବ ity ଧତା ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ ଆମକୁ ନିଜ କାର୍ଯ୍ୟକୁ ମଧ୍ୟ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବାକୁ ପଡିବ |

ନମୁନାର ବର୍ଣ୍ଣନା କେବଳ ଏକ ଫଳାଫଳ, ଏବଂ ସମଗ୍ର ପରୀକ୍ଷଣ ସମୟରେ ନିଆଯାଇଥିବା ସାମଗ୍ରୀ ଉପରେ ଆମେ ଅଧିକ ଧ୍ୟାନ ଦେବା ଉଚିତ୍ |

ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ସାମଗ୍ରୀର ଚୟନ |
ରକ୍ତ ନମୁନା - ତାଜା ରକ୍ତ ବାଛ, 4 ଘଣ୍ଟାରୁ ଅଧିକ ନୁହେଁ |କୋଷ ନମୁନା - ଏକ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ଅଭିବୃଦ୍ଧି ସମୟରେ ତାଜା କୋଷ ସଂଗ୍ରହ କରିବାକୁ ବାଛ |ପଶୁ ଟିସୁ fresh ତାଜା, ଜୋରରେ ବ growing ୁଥିବା ଟିସୁ ବାଛନ୍ତୁ |ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁ - ସତେଜ, ଯୁବକ ଟିସୁ ବାଛନ୍ତୁ |

ଆପଣ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ ଧ୍ୟାନ ଦେଇଥିବେ ଯେ ଏହି କିଛି ବାକ୍ୟରେ ଏକ ମୁଖ୍ୟ ଶବ୍ଦ ଅଛି: ତାଜା |
ଉପରୋକ୍ତ ନମୁନାଗୁଡିକ ପାଇଁ, ବଜାରରେ ସର୍ବୋତ୍ତମ, ବ୍ୟୟ-ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଏବଂ ସ୍ଥିର କିଟ୍ ହେଉଛି ଫୋରେଗେନର କିଟ୍, ଯାହା ଶୀଘ୍ର ଏବଂ ସହଜରେ ସେମାନଙ୍କର DNA ଏବଂ RNA ବାହାର କରିପାରିବ |

ରକ୍ତ DNA ମିନି କିଟ୍ |

ସେଲ୍ ସମୁଦାୟ RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନ କିଟ୍ |

ପଶୁ ସମୁଦାୟ RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନ କିଟ୍ |

ଉଦ୍ଭିଦ ସମୁଦାୟ RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନ କିଟ୍ |

ଉଦ୍ଭିଦ ସମୁଦାୟ RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନ କିଟ୍ ପ୍ଲସ୍ |

ଉଦ୍ଭିଦ DNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନ କିଟ୍ |

ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ସାମଗ୍ରୀର ସଂରକ୍ଷଣ |
ସାଧାରଣତ speaking କହିବାକୁ ଗଲେ, ଯଦି ସର୍ତ୍ତ ଅନୁମତି ଦିଏ, ଆମେ ନମୁନା ସଂରକ୍ଷଣ କରିବାକୁ ସୁପାରିଶ କରୁନାହୁଁ |ତଥାପି, ସେଠାରେ ଅନେକ ବନ୍ଧୁ ଅଛନ୍ତି ଯେଉଁମାନେ ନମୁନା ସଂଗ୍ରହ ପରେ ତୁରନ୍ତ ପରୀକ୍ଷଣ କରିପାରିବେ ନାହିଁ, ଏବଂ କେତେକଙ୍କୁ ନମୁନା ପାଇଁ ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ଟ୍ୟାଙ୍କ ମଧ୍ୟ କ୍ଷେତ୍ରକୁ ନେବା ଆବଶ୍ୟକ କରନ୍ତି |

ଏହି ପ୍ରକାର ପରିଶ୍ରମୀ ବନ୍ଧୁଙ୍କ ପାଇଁ, ମୁଁ କେବଳ କହିପାରିବି ଯେ ଆପଣ ପୁନର୍ବାର ବ୍ୟବହାରକାରୀ ସାମଗ୍ରୀ ବୁ understand ନ୍ତି ନାହିଁ |ବର୍ତ୍ତମାନ ଅନେକ ରିଜେଣ୍ଟ୍ ଉପଯୋଗୀ କମ୍ପାନୀଗୁଡିକ ରେଜେଣ୍ଟ୍ ଉତ୍ପାଦନ କରନ୍ତି ଯାହା ରୁମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ RNA ନମୁନା ଗଚ୍ଛିତ କରିପାରିବ, ଏବଂ ଆପଣ ସେଗୁଡିକ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ବାଛିପାରିବେ |ପାରମ୍ପାରିକ ଷ୍ଟୋରେଜ୍ ପଦ୍ଧତି ହେଉଛି ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ଷ୍ଟୋରେଜ୍, ଏକ ଛୋଟ ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ଟ୍ୟାଙ୍କ ବ୍ୟବହାର କରି ଯାହା ବହନ କରିବା ସହଜ |ନମୁନାକୁ ଲାବୋରେଟୋରୀକୁ ଫେରାଇ ଆଣିବା ପରେ ଏହାକୁ -80 ° C ରେଫ୍ରିଜରେଟରରେ ରଖନ୍ତୁ |

RNA ସହିତ ଜଡିତ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ, ଛଅ ଶବ୍ଦ ନୀତି ଅନୁସରଣ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ:ନିମ୍ନ ତାପମାତ୍ରା, ଏନଜାଇମ୍ ନାହିଁ,ଏବଂଦ୍ରୁତ .

ନିମ୍ନ ତାପମାତ୍ରାର ଧାରଣା ବୁ to ିବା ସହଜ;ଏନଜାଇମ୍ ବିନା, ଆମେ ରହୁଥିବା ଦୁନିଆର ସବୁ ସ୍ଥାନରେ RNase ଅଛି (ନଚେତ୍ ଆପଣ ଏଚ୍.ଆଇ.ଭି ଦ୍ୱାରା ମରିଥାନ୍ତେ), ତେଣୁ ପରୀକ୍ଷଣ କରିବାବେଳେ RNase କୁ କିପରି ଏଡାଇ ହେବ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଧାରଣା;ଦ୍ରୁତ,ଦୁନିଆରେ କ Kung ଣସି କୁଙ୍ଗ ଫୁ ନାହିଁ ଯାହା ଭାଙ୍ଗିପାରିବ ନାହିଁ, କେବଳ ଗତି ଭାଙ୍ଗିପାରିବ ନାହିଁ |।

ତେଣୁ, ଏକ ଅର୍ଥରେ, ନିଷ୍କାସନ ସମୟ ଯେତେ କମ୍, କିଟ୍ ସେତେ ଭଲ |କାହିଁକି କରେ |ଫରେଗେନ୍ |'କିଟ୍ ଗତି ଉପରେ ଗୁରୁତ୍ୱ ଦେଇଥାଏ, କାରଣ ସେମାନେ ଏହାକୁ ଭଲ ଭାବରେ ଜାଣନ୍ତି |

PS: କିଛି girls ିଅ ଅତି ଯତ୍ନର ସହ ପରୀକ୍ଷଣ କରନ୍ତି, କିନ୍ତୁ ସେମାନେ ଅନେକ ବର୍ଷର କାମ ପରେ ସ୍ଲାମ୍ ଡଙ୍କ ଭଳି ଭଲ ନୁହଁନ୍ତି |ସେମାନେ ଅନୁଭବ କରନ୍ତି ଯେ ଭଗବାନ ଅନ୍ୟାୟ କରନ୍ତି, ଅନ୍ୟମାନଙ୍କ ଉପରେ ଅଭିଯୋଗ କରନ୍ତି ଏବଂ ଜୀବନ ଖୋଜନ୍ତି |ବାସ୍ତବରେ, ସେ ଏହାକୁ ବୁ didn't ି ପାରିନଥିଲେ |ସେ ଆରଏନଏକୁ ଭଲ ଭାବରେ ରକ୍ଷା କରିନଥିଲେ ଏବଂ ସ୍ଲାମ୍ ଡଙ୍କ୍ ପ୍ଲେୟାର୍ ନିମ୍ବଲ୍ ଥିଲା |ଯେତେବେଳେ ସେ ଏହି ପରୀକ୍ଷଣ କରୁଥିଲେ, ସେ ଭାବିଥିଲେ ଯେ ସେ ସ୍ଲାମ୍ ଡଙ୍କ୍କୁ ତିନିଥର, ପାଞ୍ଚ ଥର ଏବଂ ଦୁଇଟି ବିଭାଗ ସହିତ ଶେଷ କରିବେ, କିନ୍ତୁ ସେ ଏହି ପରୀକ୍ଷଣକୁ ଭଲ କରିଥିଲେ |

ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ: ମନ୍ଥର, RNase ଆକ୍ରମଣର ଅଧିକ ସମ୍ଭାବନା |ନିଜକୁ ଶୀଘ୍ର ହେବାକୁ କିପରି ତାଲିମ ଦେବେ?କ way ଣସି ଉପାୟ ନାହିଁ, କେବଳ ଅଧିକ ଅଭ୍ୟାସ କରନ୍ତୁ |

ବିଭିନ୍ନ ପରୀକ୍ଷଣ ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ନମୁନା ପାଇଁ, ତଥାପି ଅଧିକ ସାହିତ୍ୟ ପ read ିବା ଏବଂ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ପାଇଁ ଏକ ଉପଯୁକ୍ତ ପଦ୍ଧତି ବାଛିବା ଆବଶ୍ୟକ |ନମୁନା ସଂଗ୍ରହ ଏବଂ ସଂରକ୍ଷଣ ପ୍ରକ୍ରିୟା ପାଇଁ, MIQE ଆବଶ୍ୟକ କରେ ଯେ ଏହାକୁ କାଗଜରେ ସ୍ପଷ୍ଟ ଭାବରେ ଲେଖାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ, ଯାହା ଦ୍ the ାରା ସମୀକ୍ଷକମାନେ କାଗଜର ବିଶ୍ୱସନୀୟତା ସମୀକ୍ଷା କରିପାରିବେ, ଏବଂ ଚମତ୍କୃତ ଯୁବକମାନଙ୍କ ପାଇଁ ଆପଣଙ୍କ ପରୀକ୍ଷଣର ପୁନରାବୃତ୍ତି ମଧ୍ୟ ସୁବିଧାଜନକ ଅଟେ |

ଯଦିଓ ଜ bi ବିକ ପରୀକ୍ଷଣ କଷ୍ଟସାଧ୍ୟ, ସେଗୁଡ଼ିକ ଉଚ୍ଚ-ଶେଷ |ଯଦି ଆପଣ ସାବଧାନ ନୁହଁନ୍ତି, ତେବେ ଆପଣ ଦୁନିଆକୁ ଓଲଟାଇ ପାରିବେ |ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, SARS କୁ ଏକ ବାୟୋକେମିକାଲ୍ ସଙ୍କଟରେ ପରିଣତ କରିବା, କିମ୍ବା 1.3 ବିଲିୟନ ଲୋକଙ୍କୁ ବଞ୍ଚାଇବା ପାଇଁ ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଚାଉଳ ତିଆରି କରିବା |ନିମ୍ନରେ ଥିବା ଚିତ୍ର ହେଉଛି ଏକ ରାସାୟନିକ ପରୀକ୍ଷଣ, ଆପଣ ବୁ understand ିବା ଉଚିତ୍ ଯେ ଆପଣ ତାଙ୍କ ଅନୁସନ୍ଧାନ ପାଇଁ କେତେ ଗର୍ବିତ, କେବଳ ତାଙ୍କର ଡିକ୍ ପରି ରୂପକୁ ଦେଖି |ଏହାକୁ ଭୁଲିଯାଅ, ତାଙ୍କୁ କଳା କର ନାହିଁ |

MIQE (3) - ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ନିଷ୍କାସନ |
ନ୍ୟୁକ୍ଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ନିଷ୍କାସନ ଏକ ବଡ ଘଟଣା, ଏବଂ ସମସ୍ତ ମଲିକୁଲାର୍ ବାୟୋଲୋଜି ପରୀକ୍ଷଣ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଉତ୍ତୋଳନରୁ ଆରମ୍ଭ ହୁଏ |ସର୍ବପ୍ରଥମେ, ଆସନ୍ତୁ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଉତ୍ତୋଳନ ଉପରେ MIQE ର ବିଷୟବସ୍ତୁ କପି କରିବା |

ଏହି ଫର୍ମକୁ ଦେଖିଲେ, ଆପଣ ଭୂପୃଷ୍ଠରେ ରହିପାରିବେ ନାହିଁ |ଧର୍ମ ହେଉଛି ଏକ କୁକୁର |ଜଣେ ଶ୍ରେଷ୍ଠ ଛାତ୍ର ହେବାକୁ, ଆପଣ କାହିଁକି ପଚାରିବାକୁ ପଡିବ |ଏହି ସାରଣୀର ଅତ୍ୟାବଶ୍ୟକ ବିଷୟବସ୍ତୁ ହେଉଛି: ଅନୁସରଣ କରନ୍ତୁ |RNA ର ଶୁଦ୍ଧତା, ଅଖଣ୍ଡତା, ସ୍ଥିରତା, ଏବଂ ନିଷ୍କାସନ ପରିମାଣ | .

ର ପ୍ରଥମ ଭାଗପ୍ରକ୍ରିୟା ବା ଯନ୍ତ୍ର ହେଉଛି ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ନିଷ୍କାସନ ପଦକ୍ଷେପ |ଯଦି ଆପଣ ବାହାର କରିବା ପାଇଁ ଏକ ସ୍ୱୟଂଚାଳିତ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ନିର୍ବାହକାରୀ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତି (ଉନ୍ନତ, ଦୟାକରି କ୍ରୟ ପାଇଁ ମୋ ସହିତ ଯୋଗାଯୋଗ କରନ୍ତୁ), ଆପଣଙ୍କୁ ଯନ୍ତ୍ରର ମଡେଲ୍ ନାମ ସୂଚାଇବାକୁ ପଡିବ |

କିଟ୍ ର ନାମ ଏବଂ

ପରିବର୍ତ୍ତନ ବିବରଣୀ ପାଇଁ କେଉଁ କିଟ୍ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା, କେଉଁ ବିଶେଷ ରେଜେଣ୍ଟସ୍ ଯୋଗ କରାଯାଇଥିଲା କିମ୍ବା କେଉଁ ବିଶେଷ ଅପରେସନ୍ କରାଯାଇଥିଲା ତାହା ସ୍ପଷ୍ଟ ଭାବରେ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯିବା ଉଚିତ ଯାହା ଦ୍ others ାରା ଅନ୍ୟମାନେ ଆପଣଙ୍କ ପରୀକ୍ଷଣକୁ ସହଜରେ ପୁନରାବୃତ୍ତି କରିପାରିବେ |

କିଛି ଲୋକ ବିଶେଷ ନମୁନା ବାହାର କରିବା ସମୟରେ କିଛି ବିଶେଷ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଯୋଗ କରନ୍ତି, ଏହା ଭାବନ୍ତି ଯେ ଏହା ସେମାନଙ୍କର ଗୁପ୍ତ ଅସ୍ତ୍ର ଏବଂ ଅନ୍ୟମାନଙ୍କୁ କୁହ ନାହିଁ |ଏହାକୁ ଗୁପ୍ତ ରଖିବାବେଳେ, ସେମାନେ ମଧ୍ୟ ତୁମର ଆର୍ଟିକିଲକୁ ଉଜ୍ଜ୍ୱଳ କରିବାର ସୁଯୋଗ ହରାନ୍ତି |ଚତୁର ହୁଅ ନାହିଁ, ବ scientific ଜ୍ଞାନିକ ଅନୁସନ୍ଧାନରେ ଦେଶର ପୁରୁଣା Zhang ାଙ୍ଗଙ୍କ ଅପେକ୍ଷା ତୁମକୁ ଅଧିକ ସଚ୍ଚୋଟ ହେବାକୁ ପଡିବ, ଯଦି ତୁମେ ଚତୁର ହେବାକୁ ଚାହୁଁଛ, ପ୍ରବନ୍ଧଟି ତୁମକୁ ମୂର୍ଖ କରିବ |

କିଟ୍ ର ଉତ୍ପାଦ ସଂଖ୍ୟା ମନେରଖିବା ଜରୁରୀ |ଯେତେବେଳେ ତୁମେ କିଟ୍ ଅର୍ଡର କର ଏବଂ ପ୍ରବନ୍ଧ ଲେଖ |କିଟ୍ ଉପରେ ସାଧାରଣତ two ଦୁଇଟି ସଂଖ୍ୟା ଅଛି: ବିଲେଇ - କାଟାଲଗ୍ ନମ୍ବର (ଉତ୍ପାଦ ସଂଖ୍ୟା, ପ୍ରବନ୍ଧ ସଂଖ୍ୟା), ଲଟ୍ - ଉତ୍ପାଦ ଲଟ୍ ନମ୍ବର (ଉତ୍ପାଦ କେଉଁ ବ୍ୟାଚରୁ ଆସିଛି ତାହା ସୂଚାଇବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ) |

ଏହା ସହିତ, ବାୟୋକେମିକାଲ୍ ରିଜେଣ୍ଟସ୍ ଅର୍ଡର କରିବା ସମୟରେ CAS ନମ୍ବର ପ୍ରାୟତ used ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଏବଂ ମୁଁ ଏହାକୁ ଏକତ୍ର ଲୋକପ୍ରିୟ କରିବି |ଆମେରିକୀୟ କେମିକାଲ୍ ସୋସାଇଟି ଦ୍ୱାରା ପ୍ରତ୍ୟେକ ନୂତନ ରାସାୟନିକ drug ଷଧକୁ CAS ସଂଖ୍ୟା ହେଉଛି |ସାଧାରଣତ ,, ତିନୋଟି ସଂଖ୍ୟା ଏକ ଡ୍ୟାସ୍ ଦ୍ୱାରା ସଂଯୁକ୍ତ |ରୁଷୋଇଙ୍କ CAS ସଂଖ୍ୟା: 7732-18-5 |ରାସାୟନିକ ପଦାର୍ଥରେ ପ୍ରାୟତ multiple ଏକାଧିକ ଛଦ୍ମନାମ ଥାଏ, କିନ୍ତୁ CAS ସଂଖ୍ୟା ଅତୁଳନୀୟ |Medicine ଷଧ ଅର୍ଡର କରିବାବେଳେ, ଆପଣ ପ୍ରଥମେ ଏହାର CAS ନମ୍ବର ଯାଞ୍ଚ କରିପାରିବେ |

ଘରର ନିକଟତର, ଆମକୁ ଏହି ଜିନିଷଗୁଡ଼ିକୁ ସ୍ପଷ୍ଟ ଭାବରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରିବାକୁ ପଡିବ କାହିଁକି?ବାସ୍ତବରେ, ଏହା ମଧ୍ୟ RNA ଉତ୍ତୋଳନର ଗୁଣ ଯାଞ୍ଚ କରିବା |ଯନ୍ତ୍ର ଏବଂ କିଟ୍ ବ୍ୟବହାର RNA ନିଷ୍କାସନକୁ ଅଧିକ ସୁସଂଗତ କରିବ |ସାଧାରଣ ଲାବୋରେଟୋରୀଗୁଡିକର ନିଷ୍କାସନ ସ୍କେଲ୍ ବଡ଼ ନୁହେଁ, ଏବଂ ଏହା କିଟ୍ ସହିତ ମିଳିପାରିବ |

DNase କିମ୍ବା RNase ଚିକିତ୍ସାର ବିବରଣୀ |
ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ ପରିମାଣିକ PCR ର ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରସଙ୍ଗ ହେଉଛି DNA ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ରୋକିବା, ଏବଂ ପ୍ରଦୂଷଣ ଥିଲେ ପରୀକ୍ଷା କର ନାହିଁ |ତେଣୁ, ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ଥିବା ଡିଏନ୍ଏ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଏବଂ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ରୂପେ ଅପସାରିତ ହୋଇଛି ବୋଲି ଦର୍ଶାଇବା ପାଇଁ, ଆପଣ DNA ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରିଥିବା ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ଦର୍ଶାଇବା ଏକାନ୍ତ ଆବଶ୍ୟକ |ଏକ ସ୍କିମେଟିକ୍ ଚିତ୍ର ଦ୍ୱାରା ଉପସ୍ଥାପିତ |

RNA ଏବଂ DNA ର ସ୍କିମେଟିକ୍ ଚିତ୍ର |
ସାଧାରଣତ ,, DNA ଅପସାରଣ କରିବାର ପଦ୍ଧତି ହେଉଛି ନିଷ୍କାସନ ପରେ DNase ସହିତ RNA ଚିକିତ୍ସା କରିବା |ତଥାପି, ଏଗୁଡ଼ିକ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ପୁରୁଣା ପଦ୍ଧତି |ବାଣିଜ୍ୟିକ RNA ନିଷ୍କାସନ କିଟ୍ DNase ଯୋଗ ନକରି ଉତ୍ତୋଳନ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ DNA ଅପସାରଣ କରିବାରେ ସକ୍ଷମ ହୋଇଛି |ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଫୋରେଗେନ୍ର ଏକ ସିରିଜ୍ କିଟ୍ |

ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ: RNA ଉତ୍ତୋଳନ ସମୟରେ DNA ଅପସାରଣ କରିବା ଅତ୍ୟନ୍ତ ବିପଜ୍ଜନକ ଦ୍ୱି-ଧାରିଆ ଖଣ୍ଡା, ଯାହା RNA ଉତ୍ତୋଳନର କାର୍ଯ୍ୟ ସମୟକୁ ବ olong ାଇବ ଏବଂ RNA ଅବନତିର ଆଶଙ୍କା ବ increase ାଇବ |ମୂଳତ ,, ଏହା RNA ଅମଳ ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧତା ମଧ୍ୟରେ ଏକ ବାଣିଜ୍ୟ ବନ୍ଦ |

ଏହା ସହିତ, ସିଲିକା-ଆଧାରିତ ଆଡସର୍ପସନ୍ ସ୍ତମ୍ଭରେ ଯୋଡି ହୋଇଥିବା DNase ର ପରିମାଣ ବହୁତ କମ୍, ଏବଂ ଏହାର ପ୍ରଭାବ ହାସଲ କରିବାକୁ ଉଚ୍ଚ-ଗୁଣାତ୍ମକ DNase ବ୍ୟବହାର କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |ଅପ୍ରାକୃତିକ DNase ଶୀଘ୍ର ଏବଂ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ହଜମ ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ |ଏହା ବ୍ୟବସାୟୀଙ୍କ ବ technical ଷୟିକ ସ୍ତରର ଏକ ପରୀକ୍ଷା |ଅବଶ୍ୟ, ଆହୁରି ଅଧିକ ଅଦ୍ଭୁତ ବ୍ୟବସାୟୀ ଅଛନ୍ତି ଯେଉଁମାନେ ଗର୍ବ କରନ୍ତି ଯେ DNase ବିନା DNA ଅପସାରଣ କରାଯାଇପାରିବ |ଏହା କୁହାଯାଇପାରେ ଯେ ଯେକେହି ଗର୍ବ କରେ ଯେ ଡିଏନ୍ଏସ୍ ବିନା ଡିଏନ୍ଏକୁ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବେ ହଟାଇ ଦିଆଯାଇପାରେ |ଡିଏନ୍ଏ ଏକ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ସ୍ଥିର ଦ୍ୱିଗୁଣିତ ଗଠନ, ଏବଂ ଏହା କେବଳ କଥା ହୋଇ ହସିବା ଦ୍ୱାରା ପୋଛି ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ |

ପ୍ରଦୂଷଣ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ |
ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ପଦ୍ଧତି: ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଚିହ୍ନଟ, 1% ଆଗରୋଜ୍, 6V / ସେମି, 15 ମିନିଟ୍, 1-3 ul ଲୋଡ୍ |

ନ୍ୟୁକ୍ଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ପରିମାଣିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ |
ସାଧାରଣତ a ଏକ UV ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରଫୋଟୋମିଟର ବ୍ୟବହାର କରି ମାପ କରାଯାଏ |ମୋତେ ପ୍ରଥମେ OD260, OD280, ଏବଂ OD230 ର ତିନୋଟି ମୂଲ୍ୟର ଅର୍ଥକୁ ଲୋକପ୍ରିୟ କର |
· OD260nm: ଏହା ହେଉଛି ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ର ସର୍ବୋଚ୍ଚ ଅବଶୋଷଣ ଶିଖରର ଅବଶୋଷଣ ତରଙ୍ଗଦ eng ର୍ଘ୍ୟ, ଏବଂ ସର୍ବୋତ୍ତମ ମାପ ମୂଲ୍ୟ 0.1 ରୁ 1.0 ମଧ୍ୟରେ ରହିଥାଏ |ଯଦି ନୁହେଁ, ନମୁନାକୁ ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ଆଣିବା ପାଇଁ ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ କିମ୍ବା ଏକାଗ୍ର କରନ୍ତୁ |
· OD280nm: ଏହା ପ୍ରୋଟିନ୍ ଏବଂ ଫେନୋଲିକ୍ ପଦାର୍ଥର ସର୍ବୋଚ୍ଚ ଅବଶୋଷଣ ଶିଖରର ଅବଶୋଷଣ ତରଙ୍ଗଦ eng ର୍ଘ୍ୟ |
· OD230nm: ଏହା କାର୍ବୋହାଇଡ୍ରେଟ୍ ର ସର୍ବୋଚ୍ଚ ଅବଶୋଷଣ ଶିଖର ଶୋଷଣ ତରଙ୍ଗଦ eng ର୍ଘ୍ୟ |

ପରବର୍ତ୍ତୀ, ଆସନ୍ତୁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ସୂଚକର ଭୂମିକା ବିଷୟରେ ଆଲୋଚନା କରିବା |A260 ପାଇଁ, ଏହା ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ର ଅମଳ ମାପିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରେ |ଯେତେବେଳେ OD260 = 1, dsDNA = 50μg / ml, ssDNA = 37μg / ml, RNA = 40μg / ml |

ଶୁଦ୍ଧତା ପାଇଁ, ଆମେ ଅନୁପାତକୁ ଦେଖିବା ଆବଶ୍ୟକ ଯାହାକୁ ଆମେ ସାଧାରଣତ see ଦେଖୁ: OD260 / 280 ଏବଂ OD260 / 230 |
ଶୁଦ୍ଧ DNA: OD260 / 280 ପ୍ରାୟ 1.8 ସହିତ ସମାନ |ଯେତେବେଳେ ଏହା 1.9 ରୁ ଅଧିକ, ଏହା ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ RNA ପ୍ରଦୂଷଣ ଅଛି, ଏବଂ ଯେତେବେଳେ ଏହା 1.6 ରୁ କମ୍, ଏହା ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଏବଂ ଫେନୋଲ୍ ପ୍ରଦୂଷଣ ଅଛି |
ଶୁଦ୍ଧ RNA: 1.7
· OD260 / 230: ଏହା DNA କିମ୍ବା RNA, ରେଫରେନ୍ସ ମୂଲ୍ୟ 2.5 ଅଟେ |ଯେତେବେଳେ ଏହା 2.0 ରୁ କମ୍, ଏହା ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ଚିନି, ଲୁଣ ଏବଂ ଜ organic ବ ପଦାର୍ଥର ପ୍ରଦୂଷଣ ଅଛି |

RNA ଅଖଣ୍ଡତା |

RNA ର ଅଖଣ୍ଡତା ମାପିବା ଅତ୍ୟନ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ |ସାଧାରଣତ ,, 28S ରୁ 18S RNA ମଧ୍ୟରେ ଉଜ୍ଜ୍ୱଳତା ଦୁଇଗୁଣ ସମ୍ପର୍କ କି ନାହିଁ ଯାଞ୍ଚ କରିବା ପାଇଁ ଏକ RNA ଡେନାଟରେସନ୍ ଜେଲ୍ ପରୀକ୍ଷଣ କରିବା ଆବଶ୍ୟକ |ଯେତେବେଳେ ତୃତୀୟ ବ୍ୟାଣ୍ଡ 5S ଦୃଶ୍ୟମାନ ହୁଏ, ଏହାର ଅର୍ଥ ହେଉଛି, ମେରୁଦଣ୍ଡୀ ପ୍ରାଣୀମାନଙ୍କ ବ୍ୟତୀତ RNA ଖରାପ ହେବାକୁ ଲାଗିଲା |

RNA ଗୁଣାତ୍ମକ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ପାଇଁ ତଥ୍ୟ: ଉପରୋକ୍ତ ପରୀକ୍ଷଣ ସହିତ, RNA ଅଖଣ୍ଡତା ଦୃଷ୍ଟିରୁ ଆହୁରି କିଛି ଉନ୍ନତ ଉପକରଣ ପରୀକ୍ଷଣ ମଧ୍ୟ ଅଛି, ଯେପରିକି ଏକ୍ସପେରିଅନ୍ ସ୍ୱୟଂଚାଳିତ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ସିଷ୍ଟମର RQI ଅଖଣ୍ଡତା ପରୀକ୍ଷା, ଯାହା RNA ଅଦୃଶ୍ୟ ଭାବରେ ଖରାପ ହୋଇଛି କି ନାହିଁ ତାହା ଚିହ୍ନଟ କରିପାରିବ |

ବ scientific ଜ୍ଞାନିକ ଅନୁସନ୍ଧାନରେ, ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ହେଉଛି ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ଏବଂ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ମଧ୍ୟରେ ଏକ ତୁଳନାତ୍ମକ |ତେଣୁ, RNA ନମୁନା ସଂରକ୍ଷଣ, RNA ଉତ୍ତୋଳନ ଇତ୍ୟାଦି ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ, ମୂଳ ଲକ୍ଷ୍ୟ ହେଉଛି RNA ର ଅଖଣ୍ଡତା ନିଶ୍ଚିତ କରିବା |

ଟାର୍ଗେଟ ଜିନ୍ ଏବଂ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ମଧ୍ୟରେ ସନ୍ତୁଳନକୁ RNA ର ଅଖଣ୍ଡତା କିପରି ପ୍ରଭାବିତ କରେ ତାହା ନିମ୍ନ ଚିତ୍ରରୁ ସହଜରେ ବୁ understood ିହେବ |ଅବନତି ଜିନ୍ ଅସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣତାକୁ ଆଣିବ, ଏହା ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ର ଅସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣତା କିମ୍ବା ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜିନ୍ ର ଅସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣତା, ଏହା ତଥ୍ୟ ଉପରେ ବହୁତ ପ୍ରଭାବ ପକାଇବ |

ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ଏବଂ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ର ସ୍କିମେଟିକ୍ ଚିତ୍ର, ସତ ହେବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ |

ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ପରୀକ୍ଷା (ଉଚ୍ଚ କିମ୍ବା ନିମ୍ନ ଏକାଗ୍ରତା କିମ୍ବା ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଅବସ୍ଥାରେ CT ମୂଲ୍ୟ ଦମନ କରାଯାଏ କି)

ଏହି ଚିତ୍ରକୁ ଏକ ଉଦାହରଣ ଭାବରେ ଗ୍ରହଣ କରି, ପାଞ୍ଚଟି ବକ୍ରର Ct ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ନିମ୍ନଲିଖିତ ଅଟେ |ବକ୍ରଗୁଡିକ ମଧ୍ୟରେ CT ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକର ବଣ୍ଟନ ଅସମାନ ଅଟେ, ଏବଂ Ct ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ଉଚ୍ଚ ଏବଂ ନିମ୍ନ ଏକାଗ୍ରତା ମଧ୍ୟରେ ବିଳମ୍ବ ହୁଏ, ଯାହାକି PCR ନିରୋଧର ମାମଲା |

ମୁଖ୍ୟ ବିଷୟ: RNA ଉତ୍ତୋଳନ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ, ଆମକୁ ଭୁଲ ଧାରଣା ଛାଡି ସଠିକ୍ ଧାରଣା ପ୍ରତିଷ୍ଠା କରିବାକୁ ପଡିବ |

ଭୁଲ ଧାରଣା ହେଉଛି: RNA ଉତ୍ତୋଳନ କେବଳ ଅମଳ ଅନୁସରଣ କରେ, ଭାବିଥାଏ ଯେ RNA ର ପରିମାଣ ଯେତେ ଅଧିକ ହେବ ସେତେ ଭଲ |ବାସ୍ତବରେ, ଯେତେବେଳେ ଆମେ ପରିମାଣୀକରଣ କରୁ, ଯଦି ଜିନ୍ ସଂଖ୍ୟା ବହୁତ ଅଧିକ ନଥାଏ, ତେବେ ଆମକୁ ଅଧିକ RNA ଦରକାର ନାହିଁ |ଆପଣ ବାହାର କରୁଥିବା RNA ର ପରିମାଣ ଯଥେଷ୍ଟ ଅଧିକ |

ସଠିକ ଧାରଣା ହେଉଛି:RNA ନିଷ୍କାସନ ଶୁଦ୍ଧତା, ଅଖଣ୍ଡତା ଏବଂ ସ୍ଥିରତା ଅନୁସରଣ କରିବା ଉଚିତ୍ |।ଶୁଦ୍ଧତା ନିଶ୍ଚିତ କରିପାରିବ ଯେ ପରବର୍ତ୍ତୀ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ ନୁହେଁ ଏବଂ ତଥ୍ୟ DNA ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଭାବିତ ହେବ ନାହିଁ |ଅଖଣ୍ଡତା ଲକ୍ଷ୍ୟ କ୍ରମ ଏବଂ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ସନ୍ଦର୍ଭଗୁଡ଼ିକର ସନ୍ତୁଳନ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରେ |ସ୍ଥିରତା ସ୍ଥିର ନମୁନା ଲୋଡିଙ୍ଗକୁ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରେ |

MIQE (4) - ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ |
ଭୁଲ ଧାରଣା: ଉଚ୍ଚ ନମୁନା ଭଲ୍ୟୁମର ଅନୁସରଣ |
ସଠିକ୍ ଧାରଣା: RNA ଧାରଣ ପରିମାଣକୁ ଖାତିର ନକରି ସ୍ଥିରତା (ସ୍ଥିରତା) ଅନୁସରଣ କରନ୍ତୁ, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ର କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ସ୍ଥିର ରହିଥାଏ, ନିଶ୍ଚିତ କରେ ଯେ cDNA ରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ ପ୍ରକୃତରେ mRNA ରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ ପ୍ରତିଫଳିତ କରିପାରିବ |
ଆମେ ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ଏକ ସ୍କିମେଟିକ୍ ଚିତ୍ର ସହିତ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରୁ:

ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଦକ୍ଷତାର ସ୍କିମେଟିକ୍ ଚିତ୍ର, ସତ ନୁହେଁ |
ସର୍ବପ୍ରଥମେ, ଆମେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟା ଏବଂ PCR ପ୍ରକ୍ରିୟା ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ ବୁ understand ିବା ଆବଶ୍ୟକ |PCR ଏକାଧିକ ଗରମ ଏବଂ ଆନ୍ଲିଙ୍ଗ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟା ଅତିକ୍ରମ କରେ, ଏବଂ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଖଣ୍ଡଟି ଦ୍ରୁତ ଗତିରେ ବ ows େ;ଯେତେବେଳେ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟା ନଥାଏ, ଆମେ କଳ୍ପନା କରିପାରିବା ଯେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରକୃତରେ ଗୋଟିଏ ପରେ ଗୋଟିଏ ଅଟେ ନକଲ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ, RNA ର ଅନେକ ଖଣ୍ଡ |

ଯେହେତୁ ସେଠାରେ cDNA ସୂଚନା ଖଣ୍ଡ ଅଛି, ଏହାକୁ ବର୍ତ୍ତମାନ ସୁଦ୍ଧା ବୁ understood ିବା ଉଚିତ, କାରଣ ବଡ଼ ଏବଂ ଛୋଟ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ହୋଇସାରିଛି, ଏବଂ ଗୋଟିଏ ଖଣ୍ଡ ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେବା ଅସମ୍ଭବ |ଏବଂ ଆରଏନଏର ପରିମାଣ ଅପେକ୍ଷାକୃତ କମ୍ ଥିବାରୁ ପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିବା cDNA ର ପରିମାଣ ମଧ୍ୟ ଅପେକ୍ଷାକୃତ କମ୍, PCR ପରି, ଯାହାର ବିସ୍ତାର ପ୍ରଭାବ ଅଛି, ତେଣୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ଅସମ୍ଭବ ଅଟେ |

cDNA ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଫଳାଫଳ |
ଦ୍ୱିତୀୟତ ,, ଆଦର୍ଶରେ, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଗୋଟିଏ ପରେ ଗୋଟିଏ କରାଯାଏ, କିନ୍ତୁ କ company ଣସି କମ୍ପାନୀରୁ କ re ଣସି ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ଏହି ପ୍ରଭାବ ହାସଲ କରିପାରିବ ନାହିଁ |ମ ically ଳିକ ଭାବରେ, ଅଧିକାଂଶ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେସର କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା 30-50% ମଧ୍ୟରେ ବୁଲୁଛି |ଯଦି ଏହା ହୁଏ, ତେବେ ଆମେ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ସ୍ଥିର ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଦକ୍ଷତା ପାଇବାକୁ ଚାହିଁବୁ, ଯାହା ଆମେ ଚିତ୍ରରେ ଦେଖିବାକୁ ଚାହୁଁ: 3 RNA 2 cDNA ପାଇଥାଏ, 6 RNA ଗୁଡିକ 4 cDNA ପାଇଥାଏ, ତେଣୁ ଯେତେ ନମୁନା ଲୋଡ୍ ହେଉନା କାହିଁକି, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଦକ୍ଷତା ଅପେକ୍ଷାକୃତ ସ୍ଥିର ଅଟେ |ଆମେ ପରିସ୍ଥିତି ଦେଖିବାକୁ ଚାହୁଁନାହୁଁ ଯେଉଁଠାରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଦକ୍ଷତା ଅସ୍ଥିର ଏବଂ ଉଚ୍ଚ ଏକାଗ୍ରତା ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ |

ତେବେ, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଦକ୍ଷତା ସ୍ଥିର ଅଛି କି ନାହିଁ କିପରି ଯାଞ୍ଚ କରିବେ?ପଦ୍ଧତିଟି ଅତି ସରଳ, ଆପଣଙ୍କୁ କେବଳ ଏକ ତୁଳନାତ୍ମକ ପରୀକ୍ଷା କରିବାକୁ ପଡିବ: ଗୋଟିଏ ହେଉଛି RNA ର ଦ୍ୱିଗୁଣିତ ହେବା ପରେ cDNA ରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍, ଏବଂ ଅନ୍ୟଟି ହେଉଛି cDNA ରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପରେ ଦ୍ୱିଗୁଣିତ ମିଶ୍ରଣ କରିବା, ଏବଂ ତାପରେ ପ୍ରାପ୍ତ ope ୁଲା ଦେଖିବା ପାଇଁ qPCR କରନ୍ତୁ |ଜଣେ ଶ୍ରେଷ୍ଠ ଛାତ୍ର ଭାବରେ, ଆପଣ ଏହାକୁ ସେକେଣ୍ଡରେ ବୁ understand ିବା ଉଚିତ୍ |ନିମ୍ନରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି:

ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ର କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ସ୍ଥିର ଅଛି କି ନାହିଁ ପରୀକ୍ଷା କରିବାକୁ RNA ଏବଂ cDNA ର ମିଶ୍ରଣ |
ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ଏବଂ କିଟ୍ |
କିପରି ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ର ଉତ୍କୃଷ୍ଟ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ଏବଂ କିଟ୍ ରହିପାରିବ |ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ଉତ୍ସ, AMV କିମ୍ବା ଅନୁଯାୟୀ ପ୍ରାୟ ଦୁଇ ପ୍ରକାରରେ ବିଭକ୍ତ |M-MLV |, ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ସାରଣୀରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି ସମାନ |

RNase H କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ |
RNase H ହେଉଛି ରିବୋନୁକ୍ଲାଇଜ୍ H, ଚାଇନାର ନାମ ହେଉଛି ରିବୋନୁକ୍ଲାଇଜ୍ H, ଯାହାକି ଏକ ଏଣ୍ଡୋରିବୋନୁକ୍ଲାଇଜ୍ ଯାହା ଡିଏନ୍ଏ-ଆରଏନ୍ଏ ହାଇବ୍ରିଡ୍ ଶୃଙ୍ଖଳାରେ RNA କୁ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜ୍ କରିପାରେ |RNase H ଫସଫୋଡିଏଷ୍ଟର ବଣ୍ଡକୁ ଏକକ-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ କିମ୍ବା ଡବଲ୍-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ DNA କିମ୍ବା RNA ରେ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜ୍ କରିପାରିବ ନାହିଁ, ଅର୍ଥାତ୍ ଏହା ଏକକ-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ କିମ୍ବା ଡବଲ୍-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ DNA କିମ୍ବା RNA ହଜମ କରିପାରିବ ନାହିଁ |ସାଧାରଣତ c cDNA ର ଦ୍ୱିତୀୟ ଷ୍ଟାଣ୍ଡର ସିନ୍ଥେସିସରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |

ଏହା ଏକ ଅଦ୍ଭୁତ ବିଷୟ |ଆମେ କହିରଖୁଛୁ ଯେ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପେଟେଜ୍ ରେ RNase H କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଅଛି, ତାହା ନୁହେଁ ଯେ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ RNase H ଧାରଣ କରିଥାଏ, ଏବଂ RNase H କୁ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜରୁ ପୃଥକ କରିବା ସମ୍ଭବ ନୁହେଁ, ବୋଧହୁଏ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜରେ କିଛି ଗୋଷ୍ଠୀର ରୂପାନ୍ତର ହେତୁ ଏହି କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ଦ୍ୱାରା ହୋଇଥାଏ |

ତେଣୁ, AMV ର ଉଚ୍ଚ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଦକ୍ଷତାକୁ ଖାତିର ନକରି ଏହାର RNase H କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ cDNA ର ଅମଳ ହ୍ରାସ କରେ |ଅବଶ୍ୟ, ରିଜେଣ୍ଟ୍ ଉତ୍ପାଦକମାନେ କ୍ରମାଗତ ଭାବରେ ସେମାନଙ୍କ ଉତ୍ପାଦକୁ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରୁଛନ୍ତି ଯାହାକି cDNA ର ଅମଳ ବୃଦ୍ଧି କରିବାକୁ ଯଥାସମ୍ଭବ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜରେ RNase H କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ହଟାଇବା ପାଇଁ |
ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା |

ବିଭିନ୍ନ ତାପମାତ୍ରାରେ RNA ର ଦ୍ Secondary ିତୀୟ ଗଠନ |
ବିଭିନ୍ନ ତାପମାତ୍ରାରେ RNA ର ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନ ପାଇଁ ଉପରୋକ୍ତ ଚିତ୍ର ଦେଖନ୍ତୁ, ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ତାପମାତ୍ରା ଏବଂ ଲୁଣର ଏକାଗ୍ରତା ଅବସ୍ଥାରେ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଖଣ୍ଡର ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବାକୁ mFold ଅନ୍ଲାଇନ୍ ଉପକରଣ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |55 ° C ରେ, RNA ର ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନ ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଜଟିଳ, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ କାମ କରିପାରିବ ନାହିଁ ଏବଂ ଦ୍ secondary ିତୀୟ ସଂରଚନା 65 ° C ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ସମାଧାନ ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ, ଯେତେବେଳେ କି AMV ଏବଂ M-MLV ର ସର୍ବୋଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରା ଏହି ତାପମାତ୍ରାଠାରୁ ବହୁତ କମ୍ ଅଟେ |
କ 'ଣ କରିବା?ଦ୍ secondary ିତୀୟ ସଂରଚନା ହେଉଛି ଟେମ୍ପଲେଟର ଏକ ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଯୋଡି, ଯାହା ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ଏବଂ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ଦୃ strong ପ୍ରତିଯୋଗିତାକୁ ନେଇଥାଏ, ଫଳସ୍ୱରୂପ କମ୍ ଇ ଏବଂ ଖରାପ ପୁନରାବୃତ୍ତି ପରି ଅନେକ ସମସ୍ୟା ସୃଷ୍ଟି କରେ |

କ 'ଣ କରିବା?ଯଥା ସମ୍ଭବ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ବୃଦ୍ଧି କର |

ଅନେକ ରିଜେଣ୍ଟ୍ ନିର୍ମାତା ଜେନେଟିକ୍ ଇଞ୍ଜିନିୟରିଂ ମାଧ୍ୟମରେ ସେମାନଙ୍କର ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ର ଉନ୍ନତି କରୁଛନ୍ତି |କେତେକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ତାପମାତ୍ରା ବୃଦ୍ଧି କରନ୍ତି, ଯେପରିକି ଜିଫାନ୍ ଏବଂ ଆଇଡେଲାଇ, ଏବଂ କେତେକ ଏନଜାଇମ୍ ଏବଂ RNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ଥିବା ସମ୍ପର୍କକୁ ସୁଦୃ to କରିବା ପାଇଁ RNase H ଏନଜାଇମର ସକ୍ରିୟ ଗୋଷ୍ଠୀକୁ ଅପସାରଣ କରନ୍ତି |ଉଚ୍ଚ ସ୍ନେହ ପ୍ରତିଯୋଗିତା ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନକୁ ସଙ୍କୋଚନ କରିପାରେ ଏବଂ ସହଜରେ ପ read ଼ିପାରେ, ଏବଂ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ର ଦକ୍ଷତାକୁ ମଧ୍ୟ ବହୁତ ଉନ୍ନତ କରିଥାଏ |
ମୁଖ୍ୟ ବିନ୍ଦୁ: ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଦକ୍ଷତାର ସ୍ଥିରତା ଅନୁସରଣ କରିବା ପାଇଁ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଅଧିକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ (ଏନଜାଇମ୍ କେବଳ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ନୁହେଁ ବରଂ ସ୍ଥିର ମଧ୍ୟ) ଲୋଡ୍ ହୋଇଥିବା ନମୁନା ପରିମାଣ ଅପେକ୍ଷା, ଯଦି ଏହା ଏକ ବୃହତ ଆକାରର ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ନୁହେଁ, ଏହା ଆଦ possible ସମ୍ଭବ ନୁହେଁ |ଏକାଧିକ cDNA |
ବିଭିନ୍ନ ଉତ୍ପାଦକମାନେ ମଧ୍ୟ ସ୍ଥିରତା ପାଇଁ କିଛି ପ୍ରୟାସ କରିଛନ୍ତି |ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଅଧିକାଂଶ କମ୍ପାନୀ ବର୍ତ୍ତମାନ ବିକ୍ରୟ ପାଇଁ ଏକ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ କିଟ୍ ଭାବରେ ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ୟାକେଜ୍ କରିଛନ୍ତି, ଯାହା ଏକ ଭଲ ପସନ୍ଦ |
ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଫୋରେଗେନର ଆରଟି ସହଜ ସିରିଜ୍ କିଟ୍:

RT ସହଜ I (ପ୍ରଥମ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ cDNA ସିନ୍ଥେସିସ୍ କିଟ୍ ପାଇଁ ମାଷ୍ଟର ପ୍ରିମିକ୍ସ)

MIQE (5) - ଜିନ୍ ସୂଚନାକୁ ଟାର୍ଗେଟ୍ କରନ୍ତୁ |

ଉପରୋକ୍ତ ଚିତ୍ର ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରେ |
ବାରମ୍ବାର ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ଏହି ଜିନ୍ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ କି ନୁହେଁ ସାଧାରଣତ repeated ବାରମ୍ବାର ପରୀକ୍ଷଣ ଦ୍ୱାରା ଯାଞ୍ଚ କରାଯାଇପାରିବ |
2. ଜିନ୍ ଆଇଡି, ଆପଣ ଜାଣନ୍ତି |
3. ଜିନ୍ ଲମ୍ବ, ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ର ମୋଟ ଲମ୍ବ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ କ problem ଣସି ଅସୁବିଧା ନୁହେଁ |ପ୍ରାଥମିକ ଡିଜାଇନ୍ କରିବାବେଳେ, ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଯେ ଏକ ଭଲ ବର୍ଦ୍ଧନ ଦକ୍ଷତା ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ ଆମ୍ପଲିକନ୍ ର ଲମ୍ବ 80-200bp ମଧ୍ୟରେ ଅଛି |
4. ସିକ୍ୱେନ୍ସ ବ୍ଲାଷ୍ଟ ତୁଳନାତ୍ମକ ସୂଚନା, ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାରକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ ଟାର୍ଗେଟ ଜିନ୍କୁ ଜେନବ୍ୟାଙ୍କରେ ତୁଳନା କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |
5. ସିଉଡୋଜେନସ୍ ର ଉପସ୍ଥିତି |ଏକ ସିଉଡୋଜେନ ହେଉଛି ଏକ ସାଧାରଣ ଜିନ୍ ପରି ଏକ DNA କ୍ରମ କିନ୍ତୁ ଏହାର ସାଧାରଣ କାର୍ଯ୍ୟ ହରାଇଥାଏ |ଇଉକାରିଓଟ୍ସର ମଲ୍ଟି-ଜିନ୍ ପରିବାରରେ ଏହା ପ୍ରାୟତ exists ବିଦ୍ୟମାନ |ଏହା ସାଧାରଣତ by ଦ୍ୱାରା ପ୍ରତିନିଧିତ୍। ହୁଏ |ଏହା ଜିନୋମରେ ଏକ ଅଣ-କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ଜେନୋମିକ୍ DNA କପି ଯାହା କୋଡିଂ ଜିନ୍ କ୍ରମ ସହିତ ସମାନ |, ସାଧାରଣତ trans ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ ହୋଇନଥାଏ, ଏବଂ ଏହାର କ clear ଣସି ସ୍ପଷ୍ଟ ଶାରୀରିକ ଅର୍ଥ ନାହିଁ |
6. ଏକ୍ସନ୍ ଏବଂ ଇଣ୍ଟ୍ରନ୍ ସହିତ ପ୍ରାଇମର୍ ର ଅବସ୍ଥାନ |ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ବର୍ଷଗୁଡିକରେ, ଯେତେବେଳେ ଆମେ ଡିଏନ୍ଏ ପ୍ରଦୂଷଣର ସମସ୍ୟାର ସମାଧାନ କରିଥିଲୁ, ଆମେ ପ୍ରାୟତ prim ପ୍ରାଇମର୍, ଏକ୍ସନ୍, ଏବଂ ଇଣ୍ଟ୍ରନ୍ ସ୍ଥିତିକୁ ଧ୍ୟାନ ଦେଇଥାଉ ଏବଂ ସାଧାରଣତ DNA DNA ବିସ୍ତାରକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ ଇଣ୍ଟ୍ରନ୍ ମଧ୍ୟରେ ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍ କରିବାକୁ ବିଚାର କରୁଥିଲୁ |ଦୟାକରି ନିମ୍ନରେ ଥିବା ଚିତ୍ରକୁ ଦେଖନ୍ତୁ: କଳା ଇଣ୍ଟ୍ରନ୍ କୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍। କରେ, ବିଭିନ୍ନ ବ୍ଲୁସ୍ ଏକ୍ସନ୍ କୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ, ଗୋଲାପୀ ସାଧାରଣ ପ୍ରାଇମର୍ କୁ ପ୍ରତିପାଦିତ କରେ, ଏବଂ ଉଜ୍ଜ୍ୱଳ ଲାଲ୍ ଇଣ୍ଟ୍ରନ୍-ସ୍ପାନିଂ ପ୍ରାଇମର୍ କୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ |

ସ୍କିମେଟିକ୍, କଦାପି ସତ ନୁହେଁ |
ଏହା ଏକ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଯୋଜନା କ’ଣ ମନେହୁଏ, କିନ୍ତୁ ବାସ୍ତବରେ, ଅଧିକାଂଶ କ୍ଷେତ୍ରରେ, ଟ୍ରାନ୍ସ-ଇଣ୍ଟ୍ରନ୍ ପ୍ରାଇମର୍ଗୁଡ଼ିକ କଳ୍ପିତ ପରି ଯାଦୁକର ନୁହେଁ, ଏବଂ ସେମାନେ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାର ମଧ୍ୟ ସୃଷ୍ଟି କରିବେ |ତେଣୁ DNA ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ ଉପାୟ ହେଉଛି DNA କୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ରୂପେ ହଟାଇବା |
7. ରୂପାନ୍ତର ପୂର୍ବାନୁମାନ |ପୁନର୍ବାର ଏହି ଉଦାହରଣକୁ ବ୍ୟବହାର କରି, ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ତାପମାତ୍ରା ଏବଂ ଲୁଣର ଏକାଗ୍ରତାରେ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଖଣ୍ଡର ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବାକୁ mFold ଅନ୍ଲାଇନ୍ ଉପକରଣ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |

ବିଭିନ୍ନ ତାପମାତ୍ରାରେ RNA ର ଦ୍ Secondary ିତୀୟ ଗଠନ |
ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନ ହେଉଛି ଟେମ୍ପଲେଟର ଏକ ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଯୋଡି, ଯାହା ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଯୋଡି ମଧ୍ୟରେ ଦୃ strong ପ୍ରତିଯୋଗିତା ସୃଷ୍ଟି କରିବ, ଏବଂ ପ୍ରାଇମର୍ ବାନ୍ଧିବାର ସମ୍ଭାବନା କମ୍, ଫଳସ୍ୱରୂପ କମ୍ ଇ ଏବଂ ଖରାପ ପୁନରାବୃତ୍ତି ପରି ଅନେକ ସମସ୍ୟା ସୃଷ୍ଟି କରେ |ସଫ୍ଟୱେର୍ ଭବିଷ୍ୟବାଣୀ ମାଧ୍ୟମରେ, ଯଦି କ secondary ଣସି ଦଳୀୟ ସଂରଚନା ସମସ୍ୟା ନାହିଁ, ତାହା ବହୁତ ଭଲ ହେବ |ଯଦି ସେଠାରେ ଅଛି, ଆମର ଅନୁସରଣକାରୀ ଆର୍ଟିକିଲ୍ ଏହି ସମସ୍ୟାର ସମାଧାନ ପାଇଁ ବିଶେଷ ଭାବରେ ଆଲୋଚନା କରିବ |

MIQE (6) —qPCR ଅଲିଗ୍ନୁକ୍ଲାଏଟାଇଡ୍ |

ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ପାଇଁ, ଆପଣ ପ୍ରତିଦିନ ସଂଗ୍ରାମ କରୁଥିବା ପ୍ରଥମ ଜିନିଷ ହେଉଛି RNA ନିଷ୍କାସନ, ଏବଂ ଦ୍ୱିତୀୟଟି ହେଉଛି ପ୍ରାଥମିକ ଡିଜାଇନ୍ |
ସର୍ବପ୍ରଥମେ, ଆମେ ତଥାପି MIQE ଯାଞ୍ଚ ତାଲିକା ଅନୁଯାୟୀ ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍ ବିଷୟରେ ନିୟମ ଯାଞ୍ଚ କରୁ |ଏହା ଏତେ ସରଳ ଯେ ସ୍କାମବ୍ୟାଗ୍ ହସିପାରେ, ଏବଂ ଆମେ ଏହାକୁ ଗୋଟିଏ ବାକ୍ୟରେ ଶେଷ କରିପାରିବା: ପ୍ରାଇମର୍ ପ୍ରୋବ୍ର କ୍ରମ ଏବଂ ସ୍ଥିତି ଏବଂ ପରିବର୍ତ୍ତନ ପଦ୍ଧତି ଖୋଜ |ପ୍ରାଇମର୍ ଶୁଦ୍ଧକରଣ ପଦ୍ଧତି ପାଇଁ, ପ୍ରାଇମର୍ ସିନ୍ଥେସିସ୍ ବର୍ତ୍ତମାନ ଏତେ ଶସ୍ତା, qPCR PAGE ଏବଂ ଉପର ଶୁଦ୍ଧକରଣ ପଦ୍ଧତି ପାଇଁ ଯୋଗ୍ୟ, ଏବଂ ସିନ୍ଥେସିସ୍ ଯନ୍ତ୍ରର ସୂଚନା ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ନୁହେଁ |ଅନେକ ଲୋକ ଦଶନ୍ଧି ଧରି ପ୍ରାଥମିକ କାର୍ଯ୍ୟ କରିଆସୁଛନ୍ତି ଏବଂ ଜାଣନ୍ତି ନାହିଁ ଯେ ସିନ୍ଥେସାଇଜର ହେଉଛି ABI3900 |
ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍ ର ନୀତିଗୁଡିକ ବିଷୟରେ, ଆପଣଙ୍କୁ ସେଗୁଡିକୁ ସ୍ମରଣ ଦ୍ୱାରା ମନେରଖିବାକୁ ପଡିବ ନାହିଁ, କାରଣ ଅଧିକାଂଶ ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍ ସଫ୍ଟୱେର୍ କିମ୍ବା ଅନ୍ଲାଇନ୍ ଉପକରଣଗୁଡ଼ିକ ଏହି ସମସ୍ୟାର ଯତ୍ନ ନେଇପାରିବେ (ପରାମର୍ଶିତ ଅନ୍ଲାଇନ୍ ଟୁଲ୍ primer3.ut.ee/), ଏବଂ 99.999% ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍ ମାନୁଆଲୀ ଭାବରେ କରାଯାଇ ନାହିଁ ଦେଖନ୍ତୁ, ଲେଖକ ବେଳେବେଳେ ଦିନକୁ ଶହ ଶହ ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍ କରନ୍ତି, ଯଦି ଆପଣ ଗୋଟିଏ ପରେ ଗୋଟିଏ ପ read ନ୍ତି, ତେବେ ଏହା କ୍ରସ୍ ଆଖିରେ ପରିଣତ ହେବ |
ପ୍ରାଥମିକ ଡିଜାଇନ୍ ହେବା ପରେ କେବଳ ନିମ୍ନଲିଖିତ ପଏଣ୍ଟଗୁଡ଼ିକୁ ଯା check ୍ଚ କରନ୍ତୁ:
1. ′ ଶେଷକୁ ଡିଜାଇନ୍ ପ୍ରାଇମର୍: cDNA ପ୍ରଥମ-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ ସିନ୍ଥେସିସ୍ ପାଇଁ ଅଲିଗୋ dT ପ୍ରାଇମର୍ ବ୍ୟବହାର କରିବା କ୍ଷେତ୍ରରେ, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଦକ୍ଷତା ଏବଂ RNA ଅଖଣ୍ଡତାକୁ ବିଚାର କରି, ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦକ୍ଷତାକୁ ଉନ୍ନତ କରିବା ପାଇଁ ଡିଜାଇନ୍ ହୋଇଥିବା ପ୍ରାଇମର୍ଗୁଡ଼ିକୁ 3 ′ ଶେଷରେ ଡିଜାଇନ୍ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |ନିମ୍ନଲିଖିତ ଭାବରେ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରିବାକୁ ଏକ ଚିତ୍ର ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ (ଏହାକୁ ବୁ to ିବାର କ way ଣସି ଉପାୟ ନାହିଁ):

ପ୍ରାଥମିକଗୁଡିକ କାହିଁକି ′ ′ ଶେଷରେ ଡିଜାଇନ୍ ହେବା ଉଚିତ୍, ଏହା ସତ୍ୟ ନୁହେଁ |
2. ଟିଏମ୍ ମୂଲ୍ୟ: Tm ମୂଲ୍ୟ 55-65 ° C ରେ ଅଛି (କାରଣ ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ 60 ° C ରେ ସର୍ବାଧିକ) ଏବଂ GC ବିଷୟବସ୍ତୁ 40% -60% ରେ ଅଛି |
3. ବ୍ଲାଷ୍ଟ: ଜିନୋମର ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାରକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ, ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଯାଞ୍ଚ ପାଇଁ ବ୍ଲାଷ୍ଟ ବ୍ୟବହାର କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |

MIQE (7) —qPCR ପ୍ରକ୍ରିୟା |

1. qPCR କିଟ୍ |
MIQE ର ଆବଶ୍ୟକତା ଅନୁଯାୟୀ, ଆମକୁ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀର ବିନ୍ୟାସ, କେଉଁ କିଟ୍ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ନିର୍ମାତା କିଏ, ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ କେତେ ବଡ଼, ରଙ୍ଗ ପ୍ରଣାଳୀ କିମ୍ବା ଅନୁସନ୍ଧାନ ପ୍ରଣାଳୀ ବ୍ୟବହୃତ ହେଉ, PCR ପ୍ରୋଗ୍ରାମ ସେଟିଂସମୂହ ସହିତ ଆର୍ଟିକିଲରେ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅବସ୍ଥାକୁ ସ୍ପଷ୍ଟ ଭାବରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରିବାକୁ ପଡିବ |ଭେଟେରାନ୍ ଡ୍ରାଇଭରମାନେ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ ପାଇବେ ଯେ ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ କିଟ୍ ଚୟନ ହେବ, ଉପରୋକ୍ତ ସୂଚନା ମ ically ଳିକ ଭାବରେ ନିର୍ଣ୍ଣୟ ହେବ |
ବର୍ତ୍ତମାନ, ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR କିଟ୍ ଉତ୍ପାଦନ ଏବଂ ଉତ୍ପାଦନ ଏକ ପରିପକ୍ୱ ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା |ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଆପଣ ଅତ୍ୟଧିକ ଖରାପ ଉତ୍ପାଦକ ବାଛି ନାହାଁନ୍ତି, ସମସ୍ୟାର ସମ୍ଭାବନା ଅଧିକ ନୁହେଁ, କିନ୍ତୁ ଆମେ ତଥାପି ଆପଣଙ୍କ ସହ କିଛି ପଏଣ୍ଟ ବାଣ୍ଟିବାକୁ ଚାହୁଁଛୁ:
ହଟ୍-ଷ୍ଟାର୍ଟ ଟ୍ୟାକ୍ ଏନଜାଇମ୍:PCR ର ସବୁଠାରୁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଅଂଶ ହେଉଛି ହଟ-ଷ୍ଟାର୍ଟ ଟ୍ୟାକ୍ ଏନଜାଇମ୍ |ବଜାରରେ ହଟ-ଷ୍ଟାର୍ଟ ଏନଜାଇମଗୁଡିକ ସାଧାରଣତ two ଦୁଇ ପ୍ରକାରରେ ବିଭକ୍ତ, ଗୋଟିଏ ହେଉଛି ରାସାୟନିକ ରୂପାନ୍ତରିତ ହଟ-ଷ୍ଟାର୍ଟ ଏନଜାଇମ (ଆପଣ ଏହାକୁ ପାରାଫିନ୍ ଏମ୍ବେଡିଂ ଭାବରେ କଳ୍ପନା କରିପାରିବେ) ଏବଂ ଅନ୍ୟଟି ହେଉଛି ଆଣ୍ଟିବଡି ପରିବର୍ତ୍ତନ ପାଇଁ ଏକ ହଟ-ଷ୍ଟାର୍ଟ ଏନଜାଇମ୍ (ଆଣ୍ଟିଜେନ୍-ଆଣ୍ଟିବଡି ବାଇଣ୍ଡିଂ) |ରାସାୟନିକ ପରିବର୍ତ୍ତନ ହେଉଛି ଗରମ-ଆରମ୍ଭ ଏନଜାଇମର ଏକ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଉପାୟ |ଯେତେବେଳେ ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ତାପମାତ୍ରା ପହଞ୍ଚେ, ଏନଜାଇମ୍ ଏହାର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ମୁକ୍ତ କରିବ |ଆଣ୍ଟିବଡି-ରୂପାନ୍ତରିତ ହଟ-ଷ୍ଟାର୍ଟ ଏନଜାଇମ ଏନଜାଇମର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ ଜ bi ବିକ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରେ |ଯେତେବେଳେ ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ତାପମାତ୍ରା ପହଞ୍ଚେ, ଆଣ୍ଟିବଡି ଏକ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଭାବରେ ନିଷ୍କ୍ରିୟ ହୋଇ ନିଷ୍କ୍ରିୟ ହୋଇଯିବ ଏବଂ ଏନଜାଇମ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ କାର୍ଯ୍ୟକାରୀ କରାଯିବ |

ତଥାପି, ଏହାର ବ୍ୟବହାର କ’ଣ?ଏହା ହେଉଛି, ରାସାୟନିକ ରୂପାନ୍ତରିତ ଏନଜାଇମ ଅପେକ୍ଷା ଆଣ୍ଟିବଡି-ରୂପାନ୍ତରିତ ଏନଜାଇମର ରିଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଦ୍ରୁତ ଅଟେ, ତେଣୁ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଦୃଷ୍ଟିରୁ ଆଣ୍ଟିବଡି-ରୂପାନ୍ତରିତ ଏନଜାଇମର ସାମାନ୍ୟ ସୁବିଧା ଅଛି, ଯାହାଫଳରେ ବଜାରରେ କିଟ୍ଗୁଡ଼ିକରେ ରାସାୟନିକ ରୂପାନ୍ତରିତ ଏନଜାଇମ୍ ନାହିଁ |ଯଦି ଅଛି, ତେବେ ଏହି ଉତ୍ପାଦକଙ୍କ ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ସହସ୍ର ଯୁଗରେ ଅଟକି ରହିଛି |
ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ ଆୟନର ଏକାଗ୍ରତା:PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ ଆୟନର ଏକାଗ୍ରତା ଅତ୍ୟନ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ |ଉପଯୁକ୍ତ ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ ଆୟନ ଏକାଗ୍ରତା ଟାକ ଏନଜାଇମ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ମୁକ୍ତ କରିପାରିବ |ଯଦି ଏକାଗ୍ରତା ଅତ୍ୟଧିକ କମ୍, ଏନଜାଇମ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଯଥେଷ୍ଟ ହ୍ରାସ ପାଇବ;ଯଦି ଏକାଗ୍ରତା ଅଧିକ ଥାଏ, ତେବେ ଏନଜାଇମ୍-କାଟାଲାଇଜଡ୍ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି ବୃଦ୍ଧି ହେବ |ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ ଆୟନର ଏକାଗ୍ରତା ମଧ୍ୟ ପ୍ରାଇମର ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍, ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ର ତରଳିବା ତାପମାତ୍ରା ଏବଂ PCR ଉତ୍ପାଦ ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଇବ, ଯାହାଦ୍ୱାରା ବର୍ଦ୍ଧିତ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଅମଳ ପ୍ରଭାବିତ ହେବ |ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ ଆୟନର ଏକାଗ୍ରତା ସାଧାରଣତ 25 25 ମିଟରରେ ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ହୋଇଥାଏ |ଅବଶ୍ୟ, ଏକ ଭଲ କିଟ୍ ପାଇଁ ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ ଆୟନର ଏକାଗ୍ରତା ଭଲ ଭାବରେ ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ହେବା ଆବଶ୍ୟକ |କିଛି ବ୍ୟବସାୟୀ ରିଜେଣ୍ଟରେ ଏକ ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ ଆୟନ ଚେଲିଂ ଏଜେଣ୍ଟ ଯୋଗ କରନ୍ତି, ଯାହା ମ୍ୟାଗ୍ନେସିୟମ୍ ଆୟନର ଏକାଗ୍ରତାର ସ୍ୱୟଂଚାଳିତ ସମନ୍ୱୟର ପ୍ରଭାବ ହାସଲ କରିପାରିବ |
ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗର ଏକାଗ୍ରତା:ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗ, ଯାହା ଆମେ ସାଧାରଣତ use ବ୍ୟବହାର କରୁଥିବା SYBR ଗ୍ରୀନ୍, ମୁଖ୍ୟତ double ଡବଲ୍-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ ଡିଏନ୍ଏର ଛୋଟ ଗ୍ରୀଭ୍ ସହିତ ବାନ୍ଧିବା ଦ୍ୱାରା ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସୃଷ୍ଟି କରିଥାଏ, କାରଣ ରଙ୍ଗର ଦୁଇଗୁଣ ବିଶିଷ୍ଟ DNA ସହିତ ବାନ୍ଧିବା ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ନୁହେଁ, ଅର୍ଥାତ୍ ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଡବଲ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ ଡିଏନ୍ଏ ଏହା ସହିତ ମିଳିତ ହୁଏ, ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ହୋଇପାରେ, ତେଣୁ ସିଷ୍ଟମରେ ପ୍ରାଇମର୍-ଡାଇମର୍ ଏବଂ DNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଗଠନ ହେବ |
PS: ଏହାର ହାଲୁକା ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ଗୁଣ ଯୋଗୁଁ, ବଜାରରେ ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ ସାଧାରଣତ brown ବ୍ରାଉନ୍ ଅପାକ୍ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବରେ ପ୍ୟାକେଜ୍ ହୋଇଥାଏ (ନିମ୍ନ ଚିତ୍ରରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି) |ତଥାପି, ଏହା ଏକ ସମସ୍ୟାର ସମ୍ମୁଖୀନ ହେବ |ନମୁନା ସଂଗ୍ରହ କରିବା ସମୟରେ ତରଳ ପଦାର୍ଥ ଶୋଷୁଛି କି ନାହିଁ ତାହା ଦେଖିବା କଷ୍ଟକର |ଏହି ପରିପ୍ରେକ୍ଷୀରେ, କଳିଙ୍ଗ ପ୍ରକୃତରେ ସବୁଠାରୁ ଉପଭୋକ୍ତା-ଅନୁକୂଳ (ନିମ୍ନ ଚିତ୍ରରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି), ଏବଂ ସ୍ୱଚ୍ଛ ଟ୍ୟୁବ୍ ଏକ ସ୍ୱଚ୍ଛ ଟିଫିନ୍ ବ୍ୟାଗରେ ପ୍ୟାକ୍ ହୋଇଛି |ତା’ପରେ ଆଲୋକ ଏବଂ ନମୁନାକୁ ଏଡ଼ାଇବା ପାଇଁ ସୁବିଧାକୁ ଧ୍ୟାନରେ ରଖି ଏହାକୁ ଏକ ଟିଣ ବ୍ୟାଗରେ ରଖନ୍ତୁ |ଆପଣ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ ଉପଯୁକ୍ତ ଉତ୍ପାଦ ସଂଖ୍ୟା ବାଛିବେ |TSE204 ହେଉଛି ଏକ ସୁପର ବ୍ୟୟ-ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଅସ୍ତିତ୍ୱ, ଯାହା ମୋତେ ଘାସ ରୋପଣ କରିବାକୁ ଇଚ୍ଛା କରେ |

ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗର ଏକାଗ୍ରତା ମଧ୍ୟ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ |ଯଦି ଏକାଗ୍ରତା ଅତ୍ୟଧିକ କମ୍, ପରବର୍ତ୍ତୀ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ବର୍ଦ୍ଧନ ବକ୍ର ଉପରକୁ ଯିବ ନାହିଁ ଏବଂ ସିଦ୍ଧ ନୁହେଁ;ଯଦି ଏକାଗ୍ରତା ଅଧିକ ଥାଏ, ତେବେ ଏହା ଶବ୍ଦ ବାଧା ସୃଷ୍ଟି କରିବ |ଯେହେତୁ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ମୁଖ୍ୟତ the CT ମୂଲ୍ୟ ଉପରେ ନିର୍ଭର କରେ, ଯଦି ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗର ଏକାଗ୍ରତା ସଠିକ୍ ଭାବରେ ସଜାଡି ନଥାଏ, ତେବେ ନିମ୍ନ ପଏଣ୍ଟ ଉଚ୍ଚ ପଏଣ୍ଟ ଅପେକ୍ଷା ଭଲ |ଅବଶ୍ୟ, ଉପଯୁକ୍ତ ରଙ୍ଗର ଏକାଗ୍ରତା ସର୍ବୋତ୍ତମ |

ROX: ଭଲ-ଟୁ-ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସିଗନାଲ୍ ତ୍ରୁଟି ପାଇଁ ସଂଶୋଧନ କରିବାକୁ ROX ରଙ୍ଗ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ |କେତେକ ଯନ୍ତ୍ର ନିର୍ମାତା କାଲିବ୍ରେସନ୍ ଆବଶ୍ୟକ କରୁଥିବାବେଳେ ଅନ୍ୟମାନେ ଆବଶ୍ୟକ କରନ୍ତି ନାହିଁ |ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍ ର ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଉପକରଣର ବ୍ୟବହାର ସାଧାରଣତ cal କାଲିବ୍ରେସନ୍ ଆବଶ୍ୟକ କରେ, 7300, 7500, 7500 ଫାଷ୍ଟ, ଷ୍ଟେପୋନ୍ ପ୍ଲସ୍ ଇତ୍ୟାଦି ସାଧାରଣ କିଟ୍ ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ ଏହାକୁ ବର୍ଣ୍ଣନା କରିବ |
ଫୋରେଗେନର qPCR ମିଶ୍ରଣରେ ROX ରଙ୍ଗ ମଧ୍ୟ ଥାଏ, ଯାହା ବିଭିନ୍ନ ମଡେଲରେ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ସୁବିଧାଜନକ |

ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR କିଟ୍-ଟକମ୍ୟାନ୍ |

ଦୁର୍ବଳ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ବଣ୍ଡ ଚିକିତ୍ସା |: ଦୁର୍ବଳ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ବଣ୍ଡର ଚିକିତ୍ସା ଏକ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ବ technical ଷୟିକ ବିଷୟ |ଅନେକ କିଟ୍ ର ମାନୁଆଲ୍ କିଛି ପ read ି ନାହିଁ, କିନ୍ତୁ ସେମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରୁ କେହି ଏହି ବିଷୟ ଉଲ୍ଲେଖ କରିନାହାଁନ୍ତି |ବାସ୍ତବରେ, ଏହା ଅତ୍ୟନ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ |ବେସର ମିଶ୍ରଣ ମୁଖ୍ୟତ hyd ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ବଣ୍ଡର ଶକ୍ତି ଉପରେ ନିର୍ଭର କରେ |ଶକ୍ତିଶାଳୀ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ବଣ୍ଡଗୁଡିକ ସାଧାରଣ ବୃଦ୍ଧି, ଏବଂ ଦୁର୍ବଳ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ବଣ୍ଡଗୁଡିକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାରକୁ ନେଇଥାଏ |ଯଦି ଦୁର୍ବଳ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ବଣ୍ଡଗୁଡିକ ଭଲଭାବେ ଦୂର ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ, ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାରକୁ ଏଡାଯାଇପାରିବ ନାହିଁ |ଲେଖକଙ୍କ ପରିସର ମଧ୍ୟରେ, କେବଳ କିଛି କମ୍ପାନୀ ଏହି ସମସ୍ୟାକୁ ଲକ୍ଷ୍ୟ କରିଛନ୍ତି |ଯେତେବେଳେ ଆପଣ କିଟ୍ କିଣନ୍ତି, ଆପଣ ଚୟନ କରିବାକୁ ଚାହୁଁଥିବା କିଟ୍ ପାଇଁ ଆପଣ ଏହି ବିଷୟରେ ଏକ ସମାଧାନ ବିଷୟରେ ବିଚାର କରିଛନ୍ତି କି ନାହିଁ ତାହା ସୂଚାଇ ପାରିବେ |

ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପରିମାଣ: 20-50ul ସିଷ୍ଟମ୍ ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଏବଂ ଛୋଟ ଭଲ୍ୟୁମ୍ ତ୍ରୁଟି ଘଟାଇବାର ସମ୍ଭାବନା ଥାଏ |ସାଧାରଣତ speaking କହିବାକୁ ଗଲେ, କିଟ୍ ନିର୍ଦ୍ଦେଶଗୁଡ଼ିକ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଭଲ୍ୟୁମ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ସୁପାରିଶ କରିବ |ସ୍ମାର୍ଟ ହୁଅନ୍ତୁ ନାହିଁ ଏବଂ ଖର୍ଚ୍ଚ ସଞ୍ଚୟ କରିବାକୁ ଛୋଟ ଭଲ୍ୟୁମ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |ର ଲକ୍ଷ୍ୟବଣିକମାନଙ୍କ ଦ୍ recommended ାରା ସୁପାରିଶ କରାଯାଇଥିବା ଭଲ୍ୟୁମ୍ ପ୍ରକୃତରେ ପରୀକ୍ଷଣ କରାଯାଇଛି, ଏବଂ ଏହା ହୋଇପାରେ ଯେ ସେମାନେ ଛୋଟ ଭଲ୍ୟୁମ୍ ଦ୍ୱାରା ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ତ୍ରୁଟି ସମସ୍ୟାର ସମାଧାନ କରିପାରିବେ ନାହିଁ |
2. ଟ୍ୟୁବ୍ ପ୍ଲେଟର ନିର୍ମାତା ଏବଂ ପ୍ରବନ୍ଧ ସଂଖ୍ୟା |
ସମସ୍ତେ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ ପରିମାଣିକ PCR ର ନୀତି ଜାଣନ୍ତି |ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସଂଗ୍ରହ ମୁଖ୍ୟତ PCR PCR ଟ୍ୟୁବ୍ କ୍ୟାପ୍ ମାଧ୍ୟମରେ କରାଯାଇଥାଏ |PCR ଉପଯୋଗୀ ସାମଗ୍ରୀ ବାଛିବାବେଳେ, ଦୁଇଟି ପଏଣ୍ଟ ପ୍ରତି ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ: ଭଲ ଆଲୋକ ସଂକ୍ରମଣ ଏବଂ ଯନ୍ତ୍ର ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ |ସାଧାରଣତ speaking କହିବାକୁ ଗଲେ, ମୁଖ୍ୟ ସ୍ରୋତ ବ୍ରାଣ୍ଡର ବୋର୍ଡ ଏବଂ ଟ୍ୟୁବ୍ ଭଲ ଅଛି, କିନ୍ତୁ ଆପଣଙ୍କୁ ଆଡାପ୍ଟେସନ୍ ଦୃଷ୍ଟିରୁ ଯତ୍ନର ସହିତ ବାଛିବାକୁ ପଡିବ, ନଚେତ୍ ଆପଣ ଏହି ଉପକରଣ ବ୍ୟବହାର କରିବାରେ ସମର୍ଥ ହେବେ ନାହିଁ |

4. ଶୀର୍ଷ ସ୍ତରର ଜ୍ଞାନ |

MIQE (8) —qPCR ବ ation ଧତା |
ଏହା ହେଉଛି qPCR ର ସର୍ବୋଚ୍ଚ ପ୍ରାଥମିକତା!ଏତେ ସଂଖ୍ୟକ ହିରୋ ଏଠାରେ ବାଲିରେ ପଡ଼ିଯାଇଛନ୍ତି |ଅବଶ୍ୟ, ଏହା ମଧ୍ୟ ସମ୍ଭବ ଯେ ତୁମେ ଭାଗ୍ୟବାନ ଏବଂ ତୁମେ ଅଧ୍ୟୟନ କରିଥିବା ଜିନ୍ ଗୁଡିକ ସରଳ, ତେଣୁ ତୁମେ ପବନ ସହିତ ବରଫ ଗୁମ୍ଫାରେ ଭାସିଲ |QPCR ର ଯାଞ୍ଚ ସୂଚନା ତଥ୍ୟର ବିଶ୍ୱସନୀୟତା ପରୀକ୍ଷା କରିବାକୁ ଉଦ୍ଦିଷ୍ଟ |ନିମ୍ନଲିଖିତ ଭାବରେ ଆମେ ଆବଶ୍ୟକ ଯାଞ୍ଚ ସୂଚନା ତାଲିକାଭୁକ୍ତ କରୁ:

1. ବିଶେଷତା ପରୀକ୍ଷା
ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଚିତ୍ର ଏକକ ବ୍ୟାଣ୍ଡ କି ନାହିଁ ଯାଞ୍ଚ କରି ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ |କ୍ରମ ଯାଞ୍ଚ;ଶିଖର ମାନଚିତ୍ର ଏକକ କି ନାହିଁ ଦେଖିବା ପାଇଁ ତରଳିବା ବକ୍ର;ଏନଜାଇମ୍ ହଜମ ଯାଞ୍ଚ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ପଦ୍ଧତି |
ଏଠାରେ, ଆମେ t ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେବୁ |ସେ ବକ୍ର ତରଳିବା ପ୍ରଣାଳୀ ବ୍ୟବହାର କରି ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାରର ବିଶ୍ଳେଷଣ କରନ୍ତି |।ସାଧାରଣତ speaking କହିବାକୁ ଗଲେ, ଯେତେବେଳେ ଆମେ ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍ କରୁ, ଉତ୍ପାଦ ଖଣ୍ଡର ଆକାର 80-200bp ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ରହିବା ଆବଶ୍ୟକ, ଯାହା PCR ଉତ୍ପାଦର ତରଳିବା ତାପମାତ୍ରାକୁ 80-85 ° C ପରିସର କରିଥାଏ |ତେଣୁ, ଯଦି ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର ଶିଖର ଅଛି, ସେଠାରେ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଉତ୍ପାଦ ରହିବା ଆବଶ୍ୟକ |ଯଦି ଶିଖର 80 ° C ତଳେ ଦେଖାଯାଏ, ସାଧାରଣତ it ଏହାକୁ ଏକ ପ୍ରାଥମିକ ଡାଇମର୍ ଭାବରେ ବିବେଚନା କରାଯାଏ;ଯଦି ଶିଖର 85 ° C ରୁ ଅଧିକ ଦେଖାଯାଏ, ଏହା ସାଧାରଣତ D DNA ପ୍ରଦୂଷଣ କିମ୍ବା ବୃହତ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଅଧିକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବର୍ଦ୍ଧନ ବୋଲି ବିବେଚନା କରାଯାଏ |
ଟିପନ୍ତୁ: ବେଳେବେଳେ 80 ° C ରେ କେବଳ ଗୋଟିଏ ଶିଖର ଥାଏ |ଏହି ସମୟରେ, ଏହି ଧାରଣାକୁ ପାଳନ କରିବା ଜରୁରୀ |ଏହା ସମ୍ଭବତ the ବର୍ଦ୍ଧିତ ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ସମସ୍ତ ପ୍ରାଥମିକ ଡ଼ିମର୍ |

ସାଧାରଣ ତରଳିବା ବକ୍ର (କ specific ଣସି ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାର ବିନା ଏକକ ଶିଖର)

ସମସ୍ୟାଜନିତ ତରଳିବା ବକ୍ର (ଭ୍ରାନ୍ତ ଶିଖରର ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି) |
【କେସ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ】

ଏକ ମୁଖ୍ୟ ଶିଖର ଅଛି, କିନ୍ତୁ ପ୍ରାଇମର୍ ଡାଇମର୍ ଗମ୍ଭୀର |
ନିମ୍ନରେ ଥିବା ଚିତ୍ରରେ ଥିବା ଏକକ-ଶିଖର ତରଳିବା ବକ୍ର ଏହା ଏକ ଉପଯୁକ୍ତ ପରୀକ୍ଷଣ ବୋଲି ଭାବି ଆପଣଙ୍କ ଆଖିକୁ ସହଜରେ ପ୍ରତାରଣା କରିପାରେ, କିନ୍ତୁ ଫଳାଫଳଟି ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୁଲ୍ |ଏହି ସମୟରେ, ଆମକୁ ତରଳିବା ତାପମାତ୍ରାକୁ ଦେଖିବାକୁ ପଡିବ |ଶିଖର ତାପମାତ୍ରା 80 ° C ତଳେ, ଯାହା ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରାଥମିକ ଅଟେ |

କ target ଣସି ଟାର୍ଗେଟ୍ ଖଣ୍ଡ, ସମସ୍ତ ପ୍ରାଇମର୍ ଡାଇମର୍ |
ଏଠାରେ, ମୋ ଭାଇ ଅଟକାଇ ପାରିବେ ନାହିଁ |ନିମ୍ନରେ ଥିବା ଚିତ୍ରଟି ଏକ ମୋବାଇଲ୍ ଫୋନ୍ ସହିତ ମୋତେ ଏକ ସ୍କାମବାଗ୍ ଦ୍ୱାରା ପଠାଯାଇଥିବା ଫଟୋ |ସେ ବ୍ୟବହାର କରୁଥିବା ରେଜେଣ୍ଟଗୁଡିକ ଇଣ୍ଡଷ୍ଟ୍ରିରେ ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ ବ୍ରାଣ୍ଡ |ସେ ଗୋଟିଏ ଟି-ପ୍ରିଫିକ୍ସ ବ୍ରାଣ୍ଡରୁ ଅନ୍ୟ ଟି-ପ୍ରିଫିକ୍ସ ବ୍ରାଣ୍ଡକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କଲେ |ମୁଁ ଭାବୁଛି ଆପଣ ଏହା ଅନୁମାନ କରିସାରିଛନ୍ତି |ସ୍କାମବାଗ୍ ମୋତେ କାନ୍ଦିଲା: “ପ୍ରଥମ ଛବିରେ ବ୍ୟବହୃତ ରିଜେଣ୍ଟ ବହୁତ ଭଲ, ଏବଂ ଶିଖର ଏକକ ଅଟେ |ପରେ, ଆପଣ ସୁପାରିଶ କରିଥିବା ରେଜେଣ୍ଟ ବ୍ୟବହାର କରିବା ପରେ, ଏହା ମିଶ୍ରିତ ଶିଖର ସହିତ ଦ୍ୱିତୀୟ ଛବି ପରି ହୋଇଯାଏ |ତୁମେ ମୋତେ ଦୁ iser ଖୀ କରିଛ।“
ଦୁଇଟି ଗ୍ରାଫ୍ ଅଲଗା କରନ୍ତୁ |ପ୍ରଥମ ଦେଖାରେ, ଗୋଟିଏରେ ଗୋଟିଏ ଶିଖର ଏବଂ ଅନ୍ୟଟିର ଡବଲ୍ ଶିଖର ଅଛି |ନିର୍ବୋଧତା, ଗୋଟିଏ ଶିଖର ଅବଶ୍ୟ ଭଲ ଅଟେ |ଏହା ସତ କି?
ଡୁ ଇ ଠାରୁ ଖରାପ, ଯଦି ମୁଁ ଦୁଇଟି ଚିତ୍ରକୁ ନିମ୍ନ ଚିତ୍ରରେ ରଖିବି, ତୁମେ ତୁରନ୍ତ ବୁ will ିବ |ବାସ୍ତବରେ, ଏହି ପ୍ରକାର ଚିତ୍ର ଦ୍ୱାରା ଆମେ ସହଜରେ ପକ୍ଷାଘାତ ହୋଇଥାଉ |ଯତ୍ନର ସହ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପରେ, ଆମେ ଜାଣିଲୁ: ପ୍ରଥମ ଚିତ୍ରର ଶିଖର 75 ° C ରେ ଅଛି, ଯାହା ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରାଥମିକ ଅଟେ;ଦ୍ୱିତୀୟ ଚିତ୍ରର ଶିଖର 75 ° C ଏବଂ 82 ° C ରେ ଦେଖାଯାଏ, ଅତିକମରେ ସେଠାରେ ଉତ୍ପାଦ ଦେଖାଯାଏ |

ଛାତ୍ରମାନଙ୍କ ଠାରୁ ମତାମତର ଚିତ୍ର |
ତେଣୁ ମ fundamental ଳିକ ସମସ୍ୟା ରିଜେଣ୍ଟସ୍ ସମସ୍ୟା ନୁହେଁ, ବରଂ ପ୍ରାଥମିକ ଡିଜାଇନର ସମସ୍ୟା |ଏଥି ସହିତ, ଏହା ମଧ୍ୟ ପ୍ରମାଣ କରେ ଯେ କିଛି ବଡ ବ୍ରାଣ୍ଡ ଲୁହା ଗୁଣର ନୁହେଁ, ଏବଂ ଏହା ମଧ୍ୟ ପ୍ରମାଣ କରେ ଯେ ମୋ ଭାଇ ପୂର୍ବରୁ ଯାହା କହିଥିଲେ: ଏହା ତୁମର ଆର୍ଟିକିଲକୁ ସମର୍ଥନ କରୁଥିବା ରିଜେଣ୍ଟ ବ୍ରାଣ୍ଡ ନୁହେଁ |ଏହା ହେଉଛି ତୁମର ଆର୍ଟିକିଲ୍ ଯାହା ରେଜେଣ୍ଟସ୍ ବ୍ରାଣ୍ଡକୁ ସମର୍ଥନ କଲା |କଳ୍ପନା କରନ୍ତୁ, ଯଦି ସ୍କାମବାଗ୍ ରେଜେଣ୍ଟଗୁଡିକ ପରିବର୍ତ୍ତନ ନକରେ, ତେବେ ଭୁଲ ତଥ୍ୟ ପତ୍ରିକାକୁ ପଠାଯିବ ଏବଂ କ’ଣ ହେବ ତାହା ଏକ ଦୁ tragedy ଖଦ ଘଟଣା |
2. ଖାଲି ନିୟନ୍ତ୍ରଣର Ct ମୂଲ୍ୟ
ବ୍ୟାଖ୍ୟା କର ନାହିଁ, ଯଦି ଖାଲି ନିୟନ୍ତ୍ରଣର Ct ମୂଲ୍ୟ ଅଛି, ଏହା ପ୍ରଦୂଷଣ ନୁହେଁ କି?ତଥାପି, ତୁମେ ତଥାପି ବୁ to ିବାକୁ ପଡିବ କେଉଁ ଖାଲି ନିୟନ୍ତ୍ରଣର Ct ମୂଲ୍ୟ ଅଛି |ଯଦି ଏହା NTC ଅଟେ, ଏହାର ଅର୍ଥ ହେଉଛି ଯେ ବିଦେଶୀ DNA ଅଛି ଯେପରିକି ପୁନ ag ପ୍ରଦୂଷଣ |ଯଦି ଏହା NRT ଅଟେ, ଏହାର ଅର୍ଥ ହେଉଛି ବାହାର କରାଯାଇଥିବା RNA ରେ DNA ପ୍ରଦୂଷଣ ଅଛି |
3. ମାନକ ବକ୍ର
ଖାଲ ଏବଂ ଗଣନା ସୂତ୍ର ଅନ୍ତର୍ଭୂକ୍ତ କରି, PCR ଦକ୍ଷତା ସୂତ୍ର ମାଧ୍ୟମରେ ଗଣନା କରାଯାଇପାରିବ |ଏକ ଉପଯୁକ୍ତ ପରୀକ୍ଷଣରେ 3.32, ଏବଂ R² 0.9999 ନିକଟକୁ ଯିବା ପାଇଁ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ବକ୍ରର ope ୁଲା ଆବଶ୍ୟକ |
4. ରେଖା ଗତିଶୀଳ ପରିସର |
ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ଗତିଶୀଳ ପରିସର ହେଉଛି ର ar ଖ୍ୟ |ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ବକ୍ର ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଅନୁଯାୟୀ, ଗତିଶୀଳ ପରିସର ଅତିକମରେ concent ଟି ଏକାଗ୍ରତା ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ ଅନ୍ତର୍ଭୂକ୍ତ କରିବା ଉଚିତ ଏବଂ ଉଚ୍ଚ ଏକାଗ୍ରତା ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ ଏବଂ ନିମ୍ନ ଏକାଗ୍ରତା ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟରେ Ct ମୂଲ୍ୟ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେବା ଉଚିତ |
5. ଚିହ୍ନଟ ସଠିକତା |
QPCR ଫଳାଫଳଗୁଡିକର ପରିବର୍ତ୍ତନ, ଅର୍ଥାତ୍ ଖରାପ ପୁନରାବୃତ୍ତି, ଅର୍ଥାତ୍ ଖରାପ ସଠିକତା, ତାପମାତ୍ରା, ଏକାଗ୍ରତା ଏବଂ କାର୍ଯ୍ୟ ସହିତ ଅନେକ କାରଣ ଦ୍ୱାରା ହୋଇଥାଏ |କପି ସଂଖ୍ୟା ହ୍ରାସ ହେତୁ qPCR ସଠିକତା ସାଧାରଣତ less କମ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ହୋଇଯାଏ |ଆଦର୍ଶ-ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପରିବର୍ତ୍ତନ ମଧ୍ୟରେ, ଏହି ବ technical ଷୟିକ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଜ bi ବିକ ପରିବର୍ତ୍ତନଠାରୁ ଭିନ୍ନ ହେବା ଉଚିତ ଏବଂ ଜ bi ବିକ ପ୍ରତିକୃତି ଗୋଷ୍ଠୀ କିମ୍ବା ଚିକିତ୍ସା ମଧ୍ୟରେ qPCR ଫଳାଫଳରେ ପରିସଂଖ୍ୟାନିକ ପାର୍ଥକ୍ୟକୁ ସିଧାସଳଖ ସମାଧାନ କରିପାରିବ |ବିଶେଷ ଭାବରେ ଡାଇଗ୍ନୋଷ୍ଟିକ୍ ଆସେସ୍ ପାଇଁ, ସାଇଟ୍ ଏବଂ ଅପରେଟରମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରେ ସର୍ବୋତ୍ତମ ଆନ୍ତ ass- ଆସେ ସଠିକତା (ପୁନରାବୃତ୍ତି) ରିପୋର୍ଟ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |
6. ଚିହ୍ନଟ ଦକ୍ଷତା ଏବଂ LOD (ମଲ୍ଟିପ୍ଲେକ୍ସ qPCR ରେ)
ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଥିବା ସକରାତ୍ମକ ନମୁନାଗୁଡିକର 95% LOD ହେଉଛି ସର୍ବନିମ୍ନ ଏକାଗ୍ରତା |ଅନ୍ୟ ଶବ୍ଦରେ, ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ପ୍ରତିକୃତିର ଏକ ସେଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ଥିବା LOD ର ଏକାଗ୍ରତା ବିଫଳ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର 5% ରୁ ଅଧିକ ହେବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ |ମଲ୍ଟିପ୍ଲେକ୍ସ qPCR ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିବାବେଳେ, ବିଶେଷତ point ପଏଣ୍ଟ ମ୍ୟୁଟେସନ୍ କିମ୍ବା ପଲିମୋର୍ଫିଜିମ୍ ର ଏକକାଳୀନ ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ, ମଲ୍ଟିପ୍ଲେକ୍ସ qPCR ପ୍ରମାଣ ପ୍ରଦାନ କରିବା ଆବଶ୍ୟକ କରେ ଯେ ଏକାଧିକ ଟ୍ୟୁବ୍ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ସଠିକତା ସମାନ ଟ୍ୟୁବ୍, ଏକାଧିକ ଚିହ୍ନଟ ଏବଂ ଏକକ ଟ୍ୟୁବ୍ ଚିହ୍ନଟ ଦକ୍ଷତା ଏବଂ LOD ସମାନ ହେବା ଉଚିତ |ବିଶେଷକରି ଯେତେବେଳେ ଉଚ୍ଚ-ଏକାଗ୍ରତା ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜିନ୍ ଏବଂ ନିମ୍ନ-ଏକାଗ୍ରତା ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜିନ୍ ଏକାସାଙ୍ଗରେ ବୃଦ୍ଧି ହୁଏ, ଏହି ସମସ୍ୟା ପ୍ରତି ଧ୍ୟାନ ଦେବା ଆବଶ୍ୟକ |
ସମସ୍ୟା ଏବଂ ସମାଧାନ |ସାଧାରଣତ speaking କହିବାକୁ ଗଲେ, qPCR ତ୍ରୁଟି ନିବାରଣରେ ସମ୍ମୁଖୀନ ହେଉଥିବା ସମସ୍ୟାଗୁଡ଼ିକ ନିମ୍ନଲିଖିତ ଦିଗ ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେଇଥାଏ:
· ଅଜ୍ଞାତ ବିସ୍ତାର |
ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତାର କଠିନ ପସନ୍ଦ ଏବଂ ପ୍ରାଇମର୍-ଡାଇମର୍ ସହିତ ଅସୁବିଧା |
ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ଭୁଲ୍ ଅଟେ |
· ଦ୍ Secondary ିତୀୟ ସଂରଚନା ବିସ୍ତାର ଦକ୍ଷତା ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ |
ଅଜ୍ଞାତ ବିସ୍ତାର
ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧିଘଟେ, ସାଧାରଣତ considered ପ୍ରାଥମିକ ଡିଜାଇନ୍ ଉପଯୁକ୍ତ ନୁହେଁ କି ନାହିଁ ତାହା ବିଚାର କରାଯାଏ, କିନ୍ତୁ ଯଦି ତୁମେ ପ୍ରାଥମିକ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିବାକୁ ତତ୍ପର ନୁହଁ, ତୁମେ ପ୍ରଥମେ ନିମ୍ନଲିଖିତ ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକୁ ଚେଷ୍ଟା କରିପାରିବ (ନୀତି ମଧ୍ୟ ସଂଲଗ୍ନ ହୋଇଛି):
ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ବ --ାନ୍ତୁ - ଦୁର୍ବଳ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ବଣ୍ଡକୁ ବଜାୟ ରଖିବାରେ ଅସମର୍ଥ କରିବାକୁ ଚେଷ୍ଟା କରନ୍ତୁ;
ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ଏବଂ ବିସ୍ତାର ସମୟକୁ ଛୋଟ କର - ଦୁର୍ବଳ ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ବଣ୍ଡର ସମ୍ଭାବନାକୁ ହ୍ରାସ କର;
ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା ହ୍ରାସ କରନ୍ତୁ - ଅନାବଶ୍ୟକ ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ଲକ୍ଷ୍ୟହୀନ ଅଞ୍ଚଳଗୁଡିକର ବାନ୍ଧିବାର ସୁଯୋଗକୁ ହ୍ରାସ କରନ୍ତୁ;
କମ୍ ବିସ୍ତାର ଦକ୍ଷତା |
ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାରର ବିପରୀତ ପରିସ୍ଥିତି - ନିମ୍ନ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦକ୍ଷତା, ଏବଂ ନିମ୍ନ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦକ୍ଷତା ସହିତ ମୁକାବିଲା କରିବାର ପଦକ୍ଷେପଗୁଡ଼ିକ ବିପରୀତ:
· ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ଏବଂ ବିସ୍ତାର ସମୟ ବ olong ାନ୍ତୁ;
ତିନି-ପର୍ଯ୍ୟାୟ PCR କୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ହ୍ରାସ କରନ୍ତୁ;
ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା ବୃଦ୍ଧି;
Ps: 90 ଦଶକରେ ଜନ୍ମ ହୋଇଥିବା ଅନେକ ସ୍ନାତକ ଛାତ୍ରମାନେ କିପରି ପରୀକ୍ଷଣ ତ୍ରୁଟି ନିବାରଣ କରିବାକୁ ଅଧ୍ୟୟନ କରିବାକୁ ଅନିଚ୍ଛା ପ୍ରକାଶ କରନ୍ତି ଏବଂ ଆଶା କରନ୍ତି ଯେ କିଟ୍ ସମସ୍ୟାର ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ସମାଧାନ କରିପାରିବ (ଯଦି ଆପଣ ସ୍ନାତକୋତ୍ତର ପରେ ଅନୁସନ୍ଧାନ ଏବଂ ବିକାଶ କରିବାକୁ ଏକ ପୁନ ag କମ୍ପାନୀକୁ ଯିବାକୁ ଚାହାଁନ୍ତି), ବାସ୍ତବରେ, ପୁନ ag ଉତ୍ପାଦକମାନେ ମଧ୍ୟ ଏହିପରି ଭାବନ୍ତି, ମୁଁ ଆଶା କରେ ଏହା ଏକ ମୂର୍ଖ ଅଟେ ଯେତେବେଳେ ଆପଣ ଏହା ପାଇବେ ସେତେବେଳେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ, ତେଣୁ ରିଜେଣ୍ଟ୍ ନିର୍ମାତାମାନେ ଏନ୍-ଏମ୍ପ୍ଲାଇଜେସନ୍ ସମସ୍ୟାର ସମାଧାନ ପାଇଁ ବହୁ ପରିଶ୍ରମ କରିଛନ୍ତି |ସମସ୍ୟାର ସହଜରେ ସମାଧାନ କରିବାକୁ, ମୂର୍ଖମାନଙ୍କୁ ପୁନର୍ବାର ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ବଣ୍ଡ ଅବଶୋଷଣ କରୁଥିବା ଏକ କାରକ ଅଛି କି ନାହିଁ ଦେଖିବା ପାଇଁ ପୁନ ag କମ୍ପାନୀର ପରିଚୟ ପ read ିବାକୁ ପଡିବ |
ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତାର କଠିନ ପସନ୍ଦ ଏବଂ ପ୍ରାଇମର୍-ଡାଇମର୍ ସହିତ ଅସୁବିଧା |
ପଦ୍ଧତି 1: ସାଧାରଣତ speaking କହିବାକୁ ଗଲେ, qPCR ପାଇଁ କିଟ୍ ନିର୍ଦ୍ଦେଶଗୁଡ଼ିକ ସିଷ୍ଟମ୍ଗୁଡ଼ିକୁ ସୁପାରିଶ କରିଛି ଏବଂ ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତାକୁ ସୁପାରିଶ କରିଛି |
ପଦ୍ଧତି ୨: ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ ସେଟ୍ କରି ତ୍ରୁଟି ନିବାରଣ |ବର୍ଣ୍ଣନା କରିବାକୁ ନିମ୍ନରେ ଥିବା ଚିତ୍ର ଏକ କମ୍ପାନୀରୁ ଚୋରି ହୋଇଛି |ନିମ୍ନରେ ଥିବା ଚିତ୍ରଟି ତିନୋଟି ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ (100nM, 250nM, 500nM) ଏବଂ ଚାରୋଟି ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଏକାଗ୍ରତା ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ (0.1ng, 1ng, 10ng, 100ng) ସହିତ ନିର୍ମିତ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପରିମାଣିକ ଫଳାଫଳକୁ ଦର୍ଶାଏ |ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଫଳାଫଳଗୁଡିକର Ct ମୂଲ୍ୟ ନିମ୍ନଲିଖିତ ଭାବରେ ଷଡଯନ୍ତ୍ର କରାଯାଇଛି:

ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା ଚୟନ ପ୍ରତ୍ୟେକ ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତାକୁ ନିମ୍ନଲିଖିତ ଭାବରେ ଏକ ଧାଡିରେ ଏକତ୍ର କରନ୍ତୁ:

ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତାର ପସନ୍ଦ ସ୍ପଷ୍ଟ, 100nM ଏବଂ 250nM ର ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତାର ର ar ଖ୍ୟ ସମ୍ପର୍କ ଭଲ, ଏବଂ 500nM ର ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତାର ର ar ଖ୍ୟ ସମ୍ପର୍କ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ଖରାପ |100nM ଏବଂ 250nM ରେ, 250nM ର Ct ମୂଲ୍ୟ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ଛୋଟ, ତେଣୁ ସର୍ବୋଚ୍ଚ ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା ହେଉଛି 250nM |ସାଧାରଣତ severe ଗମ୍ଭୀର ପ୍ରାଇମର୍-ଡାଇମର୍ ତରଳିବା ବକ୍ରରେ ଦେଖାଯାଏ |ଯଦି ଡିଜାଇନ୍ ହୋଇଥିବା ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକ ପ୍ରାଇମର୍-ଡାଇମର୍ ଠାରୁ ଦୂରେଇ ରହିପାରିବ ନାହିଁ?
ପଦ୍ଧତି 3: ପ୍ରାଥମିକ ପରିମାଣ ହ୍ରାସ କର ଏବଂ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ବୃଦ୍ଧି କର (ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରିବାର ଆବଶ୍ୟକତା ନାହିଁ) |
ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରାର ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ମୂଲ୍ୟ ହେଉଛି 60 ° C |ଯଦି ଆପଣ ନିଶ୍ଚିତ ନୁହଁନ୍ତି, ଏକ ଅଧିକ ଉପଯୁକ୍ତ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା କିପରି ବାଛିବେ?ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତାର ପସନ୍ଦ ସହିତ ଉତ୍ତର ସମାନ -ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ ପରୀକ୍ଷା।ସମସ୍ୟାକୁ ବର୍ଣ୍ଣନା କରିବାକୁ ବାୟୋ-ରେଡ୍ କମ୍ପାନୀରୁ ଏକ ଚିତ୍ର ନିଅ |ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଖଣ୍ଡର ବିସ୍ତାର ପାଇଁ, ଆଠଟି ତାପମାତ୍ରା ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ ସେଟ୍ କରନ୍ତୁ, ପ୍ରତ୍ୟେକଟି ତିନୋଟି ପୁନରାବୃତ୍ତି ସହିତ, ଏବଂ ପ୍ରାପ୍ତ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବକ୍ର ନିମ୍ନଲିଖିତ ଅଟେ:

ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ଚୟନ:
· 70 ° C, 69 ° C - ମ ically ଳିକ ଭାବରେ, ପ୍ରାଥମିକଗୁଡିକ ମିଳିତ ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ, ତେଣୁ କ pl ଣସି ବିସ୍ତାର ନାହିଁ |
· 67.3 ° C - ପ୍ରାରମ୍ଭରେ ଅଳ୍ପ ପରିମାଣର ବିସ୍ତାର ଅଛି, ଏବଂ Ct ମୂଲ୍ୟ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ବଡ଼ |
· 64.5 ° C —— Ct ମୂଲ୍ୟ ହ୍ରାସ ହୁଏ |
· 60.7 ° C, 58.0 ° C, 56.2 ° C, ଏବଂ 55.0 ° C ରେ, Ct ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ସ୍ଥିର ହେବାକୁ ଲାଗିଲେ, କିନ୍ତୁ ଅନ୍ତିମ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ମୂଲ୍ୟ ଭିନ୍ନ ଥିଲା |
କିପରି ବାଛିବେ?ନୀତି: ପ୍ରଥମ ନୀତି ହେଉଛି ଉଚ୍ଚ Ct ମୂଲ୍ୟ |ସମାନ Ct ମୂଲ୍ୟ ପାଇଁ, ଡାଇମେରାଇଜେସନ୍ ଏବଂ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାରକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ ଏକ ଉଚ୍ଚ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ବାଛନ୍ତୁ |ଯଦିଓ 55 ° C ରେ ଅଧିକ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ମୂଲ୍ୟ ଅଛି, ଏଥିରେ ଡାଇମର୍ କିମ୍ବା ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାର ହୋଇପାରେ |
କିନ୍ତୁ ଯଦି ତୁମେ ତୁମ ପରି ସ୍ମାର୍ଟ, ତୁମେ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ ଭାବିବ: ଯୁକ୍ତିଯୁକ୍ତ ଭାବରେ କହିବାକୁ ଗଲେ, ଯଦି PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅତ୍ୟନ୍ତ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ, ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତା ସର୍ବନିମ୍ନ ଆବଶ୍ୟକତାଠାରୁ ଅଧିକ, ଉଚ୍ଚ ଏବଂ ନିମ୍ନ ପଏଣ୍ଟଗୁଡ଼ିକର କ effect ଣସି ପ୍ରଭାବ ପଡ଼ିବ ନାହିଁ, ଠିକ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ରଙ୍ଗ ଏବଂ dNTP ପରି |ବାସ୍ତବରେ, ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ସଠିକ୍ ଭାବରେ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୁଏ, Ct ମୂଲ୍ୟ ଉପରେ ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତାର ପ୍ରଭାବ ସ୍ natural ାଭାବିକ ଭାବରେ କମ୍ ହୋଇଯିବ |

ଆନ୍ନାଲିଂ ତାପମାତ୍ରା ସଠିକ୍ ଭାବରେ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୁଏ, ଏବଂ CT ଉପରେ ପ୍ରାଥମିକ ଏକାଗ୍ରତାର ପ୍ରଭାବ କମ୍ ହେବ |
ଦ୍ Secondary ିତୀୟ ସଂରଚନା ବିସ୍ତାର ଦକ୍ଷତାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ |
ସମସ୍ୟାକୁ ବର୍ଣ୍ଣନା କରିବାକୁ ଆସନ୍ତୁ ବାୟୋ-ରେଡରୁ ଚିତ୍ର ନେବା |ଏହା ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନ ସହିତ ଏକ ଜିନ୍ ବୃଦ୍ଧି କରିବା ପାଇଁ ଏକ ତାପମାତ୍ରା ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ ମଧ୍ୟ ଡିଜାଇନ୍ କରେ |

ଦ୍ Secondary ିତୀୟ ଗଠନ ହୁଏ |
ଏହା ଦେଖାଯାଇପାରେ ଯେ ତାପମାତ୍ରା ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ ହ୍ରାସ ହେବା ସହିତ ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ ଦେଖାଯିବା ଆରମ୍ଭ କରେ ଏବଂ Ct ମୂଲ୍ୟ ଆଗକୁ ବ, େ, ସର୍ବନିମ୍ନ ମୂଲ୍ୟରେ 60.7 ° C ରେ ପହଞ୍ଚେ, ଏବଂ ତାପରେ ତାପମାତ୍ରା ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟ୍ ହ୍ରାସ ହେଲେ Ct ମୂଲ୍ୟ ବଡ ହୋଇଯାଏ |ଅପରପକ୍ଷେ, ତାପମାତ୍ରା ବ increases ଼ିବା ସହିତ ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଗଠନ ଖୋଲାଯାଏ ଏବଂ ବିସ୍ତାର ଦକ୍ଷତା ବୃଦ୍ଧି ହୁଏ |ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ତାପମାତ୍ରାରେ ପହଞ୍ଚିବା ପରେ, ତାପମାତ୍ରା ବୃଦ୍ଧି କରିବା ଦ୍ୱାରା ବର୍ଦ୍ଧିତ ଦକ୍ଷତା ବୃଦ୍ଧି ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ |କାରଣ ଏହି ସମୟରେ ପ୍ରାଇମର୍ ଗୁଡିକ ସ୍ଥିର ଭାବରେ ମିଳିତ ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ |ତେଣୁ,ସର୍ବନିମ୍ନ Ct ମୂଲ୍ୟ ସହିତ ତାପମାତ୍ରା ଖୋଜ |, ଯାହା ଦ୍ secondary ିତୀୟ ସଂରଚନା ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ ତାପମାତ୍ରା!ଅବଶ୍ୟ, ସ୍ମାର୍ଟ ମୂର୍ଖମାନେ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ ଜାଣିବେ ଯେ ଯଦି ଏହା ଆବଶ୍ୟକ ନୁହେଁ, ତେବେ ପ୍ରାଥମିକ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିବା ଏବଂ ଦଳୀୟ ସଂରଚନା ଅଞ୍ଚଳରୁ ଦୂରେଇ ରହିବା ଭଲ |
5. ଆବେଦନ ସ୍ତର
MIQE - ତଥ୍ୟ ବିଶ୍ଳେଷଣ |

ତଥ୍ୟ ବିଶ୍ଳେଷଣ ମୁଖ୍ୟତ the ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR ଯନ୍ତ୍ର ଦ୍ୱାରା ଦିଆଯାଏ |ପୂର୍ବ ଆର୍ଟିକିଲରେ, ଅନେକ ତଥ୍ୟ ବିଶ୍ଳେଷଣ କାର୍ଯ୍ୟ କରାଯାଇଛି, ଯେପରିକି ଖାଲି ନିୟନ୍ତ୍ରଣ, ଯାହା ପରୀକ୍ଷଣର ଡିଜାଇନ୍ରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଛି |ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍, ପୁନରାବୃତ୍ତି ସଂଖ୍ୟା ଇତ୍ୟାଦି ସ୍ପଷ୍ଟ କରାଯାଇଛି |, ଏଠାରେ ଆମେ ମୁଖ୍ୟତ q qPCR ର ପ୍ରୟୋଗକୁ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରୁ |
qPCR ବହୁଳ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଏବଂ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଯାଞ୍ଚ ଏବଂ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ନିରାକରଣ ହେଉଛି ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ ପରିସ୍ଥିତି |
ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିମାଣ
ଲଗ୍ (ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଏକାଗ୍ରତା) ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା ସହିତ ଏକ ର ar ଖ୍ୟ ସମ୍ପର୍କ ଅଛି |ଜଣାଶୁଣା ପ୍ରାରମ୍ଭିକ କପି ସଂଖ୍ୟା ସହିତ ଏକ ମାନକରୁ ଏକ ମାନକ ବକ୍ର ଅଙ୍କାଯାଇପାରିବ, ଅର୍ଥାତ୍ ବିସ୍ତାର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ର ar ଖ୍ୟ ସମ୍ପର୍କ ମିଳିପାରିବ |ନମୁନାର Ct ମୂଲ୍ୟ ଅନୁଯାୟୀ, ନମୁନାରେ ଏକାଗ୍ରତା ଗଣନା କରାଯାଇପାରେ |ଅନ୍ତର୍ଭୂକ୍ତ କରିବାକୁ ଟେମ୍ପଲେଟର ପରିମାଣ |

ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିମାଣ ଗଣନା ପଦ୍ଧତି |
ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିମାଣ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ ମାନକ ବକ୍ର ଉପରେ ଆଧାରିତ |ଏକ ମାନକ ବକ୍ର କରିବାକୁ, ଏକ ମାନକ ଆବଶ୍ୟକ |ସାଧାରଣତ ,, ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ହେଉଛି ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ କ୍ଲୋନ୍ କରି ପ୍ରାପ୍ତ ଏକ ପ୍ଲାସିମ୍ |ଏହା ଏକ ପ୍ଲାଜାମିଡ୍ କାହିଁକି?କାରଣ ସର୍କୁଲାର ପ୍ଲାସିମ DNA ସବୁଠାରୁ ସ୍ଥିର ଅଟେ |ଦ୍ୱିଗୁଣିତ ଅନୁପାତ (10 ଗୁଣା ଦିଲ୍ୟୁସନ୍) ଅନୁଯାୟୀ 5 ରୁ 6 ଗ୍ରେଡିଏଣ୍ଟରେ ମାନକ ଉତ୍ପାଦକୁ ମିଶ୍ରିତ କରନ୍ତୁ, ଏବଂ ହ୍ରାସ କରିବା ସମୟରେ ସମାନତା ପ୍ରତି ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ |Ct ମୂଲ୍ୟ 15-30 ମଧ୍ୟରେ ପଡ଼ିବାକୁ ଦିଅ |

ମାନକ ପ୍ରସ୍ତୁତି |
ସେହି ସମୟରେ, ପରୀକ୍ଷା ହେବାକୁ ଥିବା ନମୁନାକୁ ମଧ୍ୟ ସେହି ଅନୁଯାୟୀ ମିଶ୍ରିତ କରାଯିବା ଉଚିତ (ମିଶ୍ରଣ କାରକକୁ ମନେରଖନ୍ତୁ), ଏବଂ Ct ମୂଲ୍ୟ ମଧ୍ୟ 15-30 ମଧ୍ୟରେ ପଡ଼ିବା ଉଚିତ |ପରୀକ୍ଷିତ ହେବାକୁ ଥିବା ମାନକ ଉତ୍ପାଦ + ନମୁନାକୁ ମେସିନ୍ ଉପରେ ରଖାଯାଏ |ଚାଲିବା ପରେ, ମାନକ ପଦାର୍ଥ ସହିତ ଏକ ମାନକ ବକ୍ର ତିଆରି କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ପରୀକ୍ଷା ହେବାକୁ ଥିବା ନମୁନାଗୁଡିକ ଏକାଗ୍ରତା ଗଣନା କରିବା ପାଇଁ ମାନକ ବକ୍ରରେ ଅଣାଯାଇଥିଲା |
ହେପାଟାଇଟିସ୍ ବି ଜୀବାଣୁ HBV ପରିମାଣ ଏକ ସାଧାରଣ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିମାଣ, ଯାହା 1ml ରକ୍ତରେ ଜୀବାଣୁ କପି ସଂଖ୍ୟା ଗଣନା କରିପାରିବ |
କପି ନମ୍ବରର ଗଣନା
ପରୀକ୍ଷା ହେବାକୁ ଥିବା ନମୁନା ଏକାଗ୍ରତା (ng / ul) = OD260 × 50ug / ml × dilution factor |
ନମୁନା ମଲିକୁଲାର ଓଜନ = ଆଧାର ସଂଖ୍ୟା × 324 |
ପରୀକ୍ଷା ହେବାକୁ ଥିବା ନମୁନାର କପି ସଂଖ୍ୟା (କପି / ଉଲ୍) = ପରୀକ୍ଷା ହେବାକୁ ଥିବା ନମୁନାର ଏକାଗ୍ରତା / ନମୁନାର ମଲିକୁଲାର ଓଜନ × 6 × 1014

କପି ନମ୍ବରର ଗଣନା ପଦ୍ଧତି |

ପରିମାଣ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ଉପରୋକ୍ତ ଗଣନା ପଦ୍ଧତି |ଏହା ଏକ ଗାଣିତିକ ସମସ୍ୟା ଯାହା ଜୁନିୟର ହାଇସ୍କୁଲରୁ ସ୍ନାତକ ହାସଲ କରିବା ପରେ ସମାଧାନ ହୋଇପାରିବ ଏବଂ ଗାଣିତିକ ସମସ୍ୟା ସାଧାରଣତ computer କମ୍ପ୍ୟୁଟର ଦ୍ୱାରା ସମାଧାନ ହୋଇପାରିବ |ଯଦି ତୁମେ ବୁ don't ିନାହଁ, ତୁମେ ଯୋଗାଯୋଗ କରିବାକୁ ଆସିପାରିବ |
ଆପେକ୍ଷିକ ପରିମାଣ
ଆପେକ୍ଷିକ ପରିମାଣ ମୁଖ୍ୟତ scientific ବ scientific ଜ୍ଞାନିକ ଅନୁସନ୍ଧାନରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |1ml ରକ୍ତରେ କେତେ ଜୀବାଣୁ ଅଛନ୍ତି, ଏବଂ ଏହା ଏକ DNA ଜୀବାଣୁ, ଏହା ଏକ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ନିର୍ଣ୍ଣୟକାରୀ ଘଟଣା: ରକ୍ତ ପରିମାଣ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇପାରେ ଏବଂ DNA ଜୀବାଣୁ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ସ୍ଥିର ଅଟନ୍ତି |ତଥାପି, ଗୋଟିଏ ପତ୍ରରେ ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଜିନ୍ ର ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ କପି ସଂଖ୍ୟା ତୁଳନା କରିବା ଆମ ପାଇଁ କଷ୍ଟକର, କାରଣ ପତ୍ରର ଆକାର, ଓଜନ, ଏବଂ କୋମଳତା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା କଷ୍ଟକର, ବାହାର କରାଯାଇଥିବା RNA ର ପରିମାଣ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା କଷ୍ଟକର, ଏବଂ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ର ଦକ୍ଷତା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ମଧ୍ୟ କଷ୍ଟସାଧ୍ୟ, ଅର୍ଥାତ୍ ଯେକ step ଣସି ପଦକ୍ଷେପ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ତଥ୍ୟରେ ତ୍ରୁଟି ରହିପାରେ ଏବଂ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ ନାହିଁ |
ତେଣୁ, ଆପେକ୍ଷିକ ପରିମାଣ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ ଏକ ଉପାଦାନ ଉପସ୍ଥାପନ କରିବ:ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ |
ଅନ୍ୟ ଅର୍ଥରେ, ଆପେକ୍ଷିକ ପରିମାଣ ପ୍ରକୃତରେ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜିନ୍ ଏବଂ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ମଧ୍ୟରେ ଏକ ତୁଳନାତ୍ମକ |ସମାନ ଟିସୁ ଏବଂ ସମାନ କୋଷରେ ତୁଳନା କଲେ ନମୁନା ଆକାରର ପ୍ରଭାବ, RNA ନିଷ୍କାସନ ପରିମାଣ, ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଦକ୍ଷତା ଏବଂ PCR ଦକ୍ଷତା ଅପେକ୍ଷାକୃତ ଛୋଟ |ଛୋଟ ନମୁନା ଆକାର ହେତୁ ଉଭୟ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ଏବଂ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ହ୍ରାସ କରାଯାଇଥିଲା |ସେଥିପାଇଁ ଆମେ ପୂର୍ବରୁ ଏକତା ଏବଂ ସ୍ଥିରତା ଉପରେ ଗୁରୁତ୍ୱ ଦେଇ ଆସୁଛୁ |
ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ଗୁଡିକ ସାଧାରଣତ are |ଗୃହରକ୍ଷୀ ଜିନ୍ |(ଘର ସଂରକ୍ଷଣ ଜିନ୍), ଯାହାକି ଜିନ୍ ର ଏକ ଶ୍ରେଣୀକୁ ସୂଚିତ କରେ ଯାହା ସମସ୍ତ କୋଷରେ ସ୍ଥିର ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ କରାଯାଇଥାଏ ଏବଂ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ମ life ଳିକ ଜୀବନ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ବଜାୟ ରଖିବା ପାଇଁ ସେମାନଙ୍କର ଉତ୍ପାଦଗୁଡ଼ିକ ଆବଶ୍ୟକ |
ଏହି ଧାରଣାକୁ ଭ୍ରମିତ କରନ୍ତୁ ନାହିଁ |ଗୃହରକ୍ଷୀ ଜିନ୍ ହେଉଛି ଜ ological ବିକ କାର୍ଯ୍ୟ ଶବ୍ଦ, ଯେତେବେଳେ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ବ technical ଷୟିକ ଶବ୍ଦ |ଗୃହରକ୍ଷୀ ଜିନ୍ ଗୁଡିକ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ଭାବରେ ଚୟନ ହେବା ପୂର୍ବରୁ ବ valid ଧତା ପାସ୍ କରିବା ଆବଶ୍ୟକ |
ଉଦାହରଣ ସ୍ .ରୁପ, ବିଭିନ୍ନ ଟିସୁ କୋଷରେ ସେମାନଙ୍କର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସ୍ତରକୁ ପରୀକ୍ଷା କରିବା ପାଇଁ ଆମେ ନିମ୍ନ ଚିତ୍ରରେ ଅନେକ ଗୃହରକ୍ଷୀ ଜିନ୍ ଚୟନ କରିଥିଲୁ ଏବଂ ଜାଣିବାକୁ ପାଇଲୁ ଯେ β-2- ମାଇକ୍ରୋଗ୍ଲୋବୁଲିନ୍ ର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସ୍ତର ଅନ୍ୟ ତିନୋଟି ଜିନ୍ ଠାରୁ ଭିନ୍ନ ଥିଲା, ତେଣୁ ସେଗୁଡିକ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ ନାହିଁ |

ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ର ସଂଶୋଧନ କାର୍ଯ୍ୟକୁ ବୁ After ିବା ପରେ, ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ର ପରିଚୟ ହେତୁ ଦୁଇଟି ଆଲଗୋରିଦମ ଉତ୍ପନ୍ନ ହୁଏ |
· ଡବଲ୍ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ବକ୍ର ପଦ୍ଧତି |
· 2 - t Ct ପଦ୍ଧତି (CT ମୂଲ୍ୟ ତୁଳନା ତୁଳନା ପଦ୍ଧତି)
ଯଦି ଆପଣ ପ୍ରଜାତି ଏବଂ ଜିନ୍ କାର୍ଯ୍ୟଗୁଡିକ ଅଧ୍ୟୟନ କରିବାକୁ ଆଗ୍ରହୀ, ଦୟାକରି ଆଲଗୋରିଦମ ଉପରେ ଗବେଷଣା ଛାଡି ଦିଅନ୍ତୁ ଏବଂ ସିଧାସଳଖ ସୂତ୍ର ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ, କିମ୍ବା ସିଧାସଳଖ ମେସିନ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ;ଯଦି ତୁମେ ଗଣିତ ଏବଂ ଇଞ୍ଜିନିୟରିଂରେ ଜଣେ ସିଧା ଲୋକ, ଦୟାକରି ମୁକ୍ତ ହୁଅ |
ଡବଲ୍ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ବକ୍ର ପଦ୍ଧତି |
କଣ୍ଟ୍ରୋଲ୍ ନମୁନାର ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ଏବଂ ଗୃହରକ୍ଷୀ ଜିନ୍ ଏବଂ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ବକ୍ର ମାଧ୍ୟମରେ ପରୀକ୍ଷଣ ହେବାକୁ ଥିବା ନମୁନାକୁ ପରିମାଣ କରନ୍ତୁ, ଏବଂ ତାପରେ ଗଣନା ସୂତ୍ର ଅନୁଯାୟୀ ଆପେକ୍ଷିକ ମୂଲ୍ୟ ଗଣନା କରନ୍ତୁ, ଯାହା ଆପେକ୍ଷିକ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସ୍ତର |
ଉପକାରିତା: ସରଳ ବିଶ୍ଳେଷଣ, ଅପେକ୍ଷାକୃତ ସରଳ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ୍ |
ଅସୁବିଧା: ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜିନ୍ ପାଇଁ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ରାଉଣ୍ଡ ପରୀକ୍ଷଣ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ ଏକ ମାନକ ବକ୍ର କରିବା ଆବଶ୍ୟକ |
ପ୍ରୟୋଗ: ଜିନ୍ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଅଧ୍ୟୟନରେ ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ ଏବଂ ସ୍ୱୀକୃତିପ୍ରାପ୍ତ ଆପେକ୍ଷିକ ପରିମାଣିକ ପଦ୍ଧତି ମଧ୍ୟରୁ ଗୋଟିଏ |
ସୂତ୍ରଟି ନିମ୍ନଲିଖିତ ଅଟେ:

ଉଦାହରଣଗୁଡିକ ନିମ୍ନଲିଖିତ ଅଟେ:

ପରିମାଣିକ ଫଳାଫଳ ଉପରେ ଆଧାର କରି ଆପେକ୍ଷିକ ପରିମାଣ ଗଣନା କର |
2 - t Ct ପଦ୍ଧତି (CT ମୂଲ୍ୟ ତୁଳନା ତୁଳନା ପଦ୍ଧତି)

ସୁବିଧା: ଏକ ମାନକ ବକ୍ର କରିବା ଆବଶ୍ୟକ ନାହିଁ |
ଅସୁବିଧା: ଏହା ଅନୁମାନ କରାଯାଏ ଯେ ବିସ୍ତାର ଦକ୍ଷତା 100% ପାଖାପାଖି ଅଟେ;ମାନକ ବିଘ୍ନ ହେଉଛି <5%, ଏବଂ ମାନକ ବକ୍ରତା ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ବିସ୍ତାର ମଧ୍ୟରେ ଦକ୍ଷତା ସ୍ଥିର ବୋଲି ଧରାଯାଏ;ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଅବସ୍ଥାର ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ୍ ଅଧିକ ଜଟିଳ |
ପ୍ରୟୋଗ: ଜିନ୍ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଅଧ୍ୟୟନରେ ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ ଏବଂ ସ୍ୱୀକୃତିପ୍ରାପ୍ତ ଆପେକ୍ଷିକ ପରିମାଣିକ ପଦ୍ଧତି ମଧ୍ୟରୁ ଗୋଟିଏ |

ଅବଶ୍ୟ, ବର୍ଦ୍ଧନ ଦକ୍ଷତା ସାଧାରଣତ perfect ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ହେବା ଅସମ୍ଭବ ଅଟେ 1. ସଂଶୋଧନ ପଦ୍ଧତି: ଯଦି ଆମେ ଜାଣୁ ଯେ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ଏବଂ ରେଫରେନ୍ସ ଜିନ୍ ସମାନ ବର୍ଦ୍ଧନ ଦକ୍ଷତା ଅଛି, କିନ୍ତୁ ବିସ୍ତାର କ୍ଷମତା 1 ସହିତ ସମାନ ନୁହେଁ, ତେବେ 2－ △△ Ct କୁ ସଂଶୋଧନ କରାଯାଇପାରିବ:
ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ, ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ ପରିମାଣିକ PCR ବିଷୟରେ ବିଷୟବସ୍ତୁ ସମାପ୍ତ ହୋଇଛି |