ସ୍ତମ୍ଭ ପ୍ଲଗ୍ ହୋଇଛି |

ସ୍ତମ୍ଭ ପ୍ଲଗ୍ ହେବା ପରେ, RNA ଅମଳ କମିଯାଏ କିମ୍ବା RNA କୁ ଶୁଦ୍ଧ କରିବା ଅସମ୍ଭବ, ଏବଂ ପ୍ରାପ୍ତ RNA ମାସ କମ୍ ଅଟେ |

ସାଧାରଣ କାରଣ ବିଶ୍ଳେଷଣ:

1. ନମୁନା ବ୍ରେକ୍ ପୁଙ୍ଖାନୁପୁଙ୍ଖ ନୁହେଁ |

ନମୁନା ଭାଙ୍ଗିବା RNA ଉତ୍ପାଦନ ଏବଂ ଗୁଣବତ୍ତା ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଉଥିବାବେଳେ DNA-CLEANING COLUMN କୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ରୂପେ ଅବରୋଧ କରେ ନାହିଁ |ଯେତେବେଳେ ଆପଣ ନମୁନା ଭାଙ୍ଗିଲେ, ଯଥେଷ୍ଟ ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନରେ ଦ୍ରୁତ ଗ୍ରାଇଣ୍ଡିଂ ଅପରେସନ୍ ପାଇଁ ଆମେ ସୁପାରିଶ କରୁ, ନମୁନା ସେଲ୍ କାନ୍ଥ, ସେଲ୍ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଟିସୁକୁ ଭାଙ୍ଗିବାକୁ ଚେଷ୍ଟା କରନ୍ତୁ |ପଲିଓଲ୍ ପଲିସାକାରାଇଡ୍ର ଉଦ୍ଭିଦ ନମୁନା ପାଇଁ, ଆମେ ପରାମର୍ଶ ଦେଉଛୁ ଯେ ଆପଣ ପ୍ଲାଣ୍ଟ ଟୋଟାଲ୍ RNA ISOLATION କିଟ୍ ପ୍ଲସ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |

2. ଯେତେବେଳେ ଡିଏନ୍ଏ-କ୍ଲିନିଂ ସ୍ତମ୍ଭ ସହିତ ପୃଥକ ନମୁନା ସୁପର୍ନେଟାଣ୍ଟକୁ ଚୋବାଇବ, ସମ୍ଭାବ୍ୟ କୋଷ ଖଣ୍ଡବିଖଣ୍ଡିତ ନିଶ୍ୱାସ ପ୍ରଶ୍ୱାସ ହୋଇପାରେ |

ନିଆଯାଇଥିବା ସେଲ୍ ଖଣ୍ଡବିଖଣ୍ଡିତ ପଦାର୍ଥଗୁଡିକ RNA-ONLY ସ୍ତମ୍ଭ ସୃଷ୍ଟି କରିବ ଯାହା RNA ଆଡସର୍ପସନ୍ ଅପରେସନ୍ ସଂପନ୍ନ ହେଲେ ଅବରୋଧ ହେବ (ପଦାଙ୍କ 6 ଦେଖନ୍ତୁ) |ସେଲ୍ ଆବର୍ଜନାଗୁଡିକ ଚୋବାଇବା ପାଇଁ ଏହି ଅଲ ern କିକ ପଦାର୍ଥକୁ ଚୋବାଇବାବେଳେ ଆମେ ଆପଣଙ୍କୁ ଯତ୍ନର ସହିତ ସୁପାରିଶ କରୁ |

3. ନମୁନା ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ପରିମାଣ ବହୁତ ଅଧିକ |

ଅତ୍ୟଧିକ ନମୁନା ବ୍ୟବହାର ଦ୍ୱାରା ବଫର୍ PSL1 ଦ୍ୱାରା ଅସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ନମୁନା ଖଣ୍ଡବିଖଣ୍ଡନ କିମ୍ବା ଅସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ସେଲ୍ ଲାଇସିସ୍ ହେବ, ଫଳସ୍ୱରୂପ ଶୁଦ୍ଧତା ସମୟରେ ଶୁଦ୍ଧ ସ୍ତମ୍ଭ ଅବରୋଧ ହେବ |ଉଦ୍ଭିଦ ସମୁଦାୟ RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନ କିଟ୍ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଶୁଦ୍ଧ ଅପରେଟିଂ ନମୁନା ହେଉଛି 50 ମିଗ୍ରା |ପଲିଓଲ୍ ପଲିସାକାରାଇଡ୍ର ଉଦ୍ଭିଦ ନମୁନା ପାଇଁ, ଆମେ ପରାମର୍ଶ ଦେଉଛୁ ଯେ ଆପଣ ପ୍ଲାଣ୍ଟ ଟୋଟାଲ୍ RNA ISOLATION କିଟ୍ ପ୍ଲସ୍ ଚେଷ୍ଟା କରନ୍ତୁ |

4. ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ର ତାପମାତ୍ରା ବହୁତ କମ୍ |

ସମଗ୍ର RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନତା ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧତା ପ୍ରକ୍ରିୟା କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ କରାଯାଏ (20-25) |°ଗ), ଏହା ବ୍ୟତୀତ ନମୁନା ଟିସୁ ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ ଦ୍ୱାରା ଭାଙ୍ଗିଯାଏ | କିଛି କ୍ରାୟୋଜେନିକ୍ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ସର ତାପମାତ୍ରା 20 ରୁ କମ୍ ଅଟେ |℃, ଯାହାକି DNA- ସଫା କରିବା ସ୍ତମ୍ଭ ଏବଂ / କିମ୍ବା RNA- କେବଳ ସ୍ତମ୍ଭର ଅବରୋଧ ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ |ଯଦି ଏହା ଘଟେ, ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ତାପମାତ୍ରାକୁ 20-25 ରେ ସେଟ୍ କରନ୍ତୁ |℃, ଏବଂନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଯେ ଲାଇସିସ୍ ମିଶ୍ରଣ ଏବଂ / କିମ୍ବା ଇଥାନଲ୍-ଯୋଗୀ ଅଲ ern କିକ ଶକ୍ତି 37 କୁ ଗରମ ହୋଇଛି |°C.

କ R ଣସି RNA ବାହାର କରାଯାଇ ନାହିଁ କିମ୍ବା RNA ଅମଳ କମ୍ ନୁହେଁ |

ସାଧାରଣତ many ଅନେକ କାରଣ ଅଛି ଯାହା ପୁନରୁଦ୍ଧାର ଦକ୍ଷତାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିଥାଏ, ଯେପରିକି: ନମୁନା RNA ବିଷୟବସ୍ତୁ, କାର୍ଯ୍ୟ ପ୍ରଣାଳୀ, ଏଲିଟେସନ୍ ଭଲ୍ୟୁମ୍ ଇତ୍ୟାଦି |

ନିମ୍ନରେ ସାଧାରଣ କାରଣଗୁଡିକର ବିଶ୍ଳେଷଣ:

1. ଅପରେସନ୍ ସମୟରେ ଏକ ବରଫ ସ୍ନାନ କିମ୍ବା ନିମ୍ନ ତାପମାତ୍ରା (4 ° C) ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ କରାଯାଇଥିଲା |

ପରାମର୍ଶ: କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରନ୍ତୁ (15-25) |°ଗ) ସମଗ୍ର ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ, ବରଫ ସ୍ନାନ ଏବଂ ନିମ୍ନ ତାପମାତ୍ରା ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ କରନ୍ତୁ ନାହିଁ |

2. ନମୁନାର ଅନୁପଯୁକ୍ତ ସଂରକ୍ଷଣ କିମ୍ବା ନମୁନାର ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ସଂରକ୍ଷଣ ହେତୁ RNA ଖରାପ ହୋଇଯାଇଛି |

ପରାମର୍ଶ: ସତେଜ ସଂଗୃହିତ ନମୁନାଗୁଡିକ ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନରେ ଶୀଘ୍ର ଫ୍ରିଜ୍ ହେବା ଉଚିତ, ଏବଂ ତାପରେ -80 ° C ରେ ଦୀର୍ଘ ସମୟ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଗଚ୍ଛିତ ହେବା ଉଚିତ୍, ନମୁନାଗୁଡିକର ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍ ଏବଂ ଥୋଇବା ଠାରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ;କିମ୍ବା ତୁରନ୍ତ ନମୁନାକୁ RNA ଷ୍ଟାବିଲାଇଜର୍ RNAlater ସମାଧାନ (ପଶୁ ନମୁନା) ରେ ଭିଜାନ୍ତୁ |

3. ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ନମୁନା ଖଣ୍ଡ ଏବଂ ଲାଇସିସ୍ ଶୁଦ୍ଧ ସ୍ତମ୍ଭର ଅବରୋଧକୁ ନେଇଥାଏ |

ପରାମର୍ଶ: ଟିସୁ ଗ୍ରାଇଣ୍ଡ୍ କରିବାବେଳେ, ଦୟାକରି ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଯେ ଟିସୁ ଯଥେଷ୍ଟ ଭୂମିରେ ଅଛି, ଏବଂ ଶୀଘ୍ର ଏହାକୁ ପୂର୍ବ-ପ୍ରସ୍ତୁତ ବଫର୍ PSL1 କୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ (ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଯେ β-ME ର ସଠିକ ଅନୁପାତ ଯୋଡି ହୋଇଛି, ପଦ୍ଧତିର ପ୍ରଥମ ପଦକ୍ଷେପ ଦେଖନ୍ତୁ) |

4. ଏଲିଏଣ୍ଟ୍ ଭୁଲ୍ ଭାବରେ ଯୋଡା ଯାଇଛି |

ପରାମର୍ଶ: ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଯେ RNase-free ddH2O ଶୁଦ୍ଧ ସ୍ତମ୍ଭ br ୁଲା ମ middle ିରେ ପକାଯାଇଛି |

5. ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଇଥାନଲ୍ର ସଠିକ୍ ଭଲ୍ୟୁମ୍ ବଫର୍ PSL2 କିମ୍ବା ବଫର୍ PRW2 ରେ ଯୋଗ କରାଯାଇ ନାହିଁ |

ପରାମର୍ଶ: ଦୟାକରି ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ ଅନୁସରଣ କରନ୍ତୁ, ବଫର୍ PSL2 ଏବଂ ବଫର୍ PRW2 ରେ ସଠିକ୍ ଇଥାନଲ୍ର ସଠିକ୍ ପରିମାଣ ଯୋଡନ୍ତୁ ଏବଂ କିଟ୍ ବ୍ୟବହାର ହେବା ପୂର୍ବରୁ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶାନ୍ତୁ |

6. ଟିସୁ ନମୁନାର ପରିମାଣ ଅନୁପଯୁକ୍ତ |

ପରାମର୍ଶ: ବଫର୍ PSL1 ର 500 μl ପ୍ରତି 50 ମିଗ୍ରା ଟିସୁ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |ଅତ୍ୟଧିକ ଟିସୁ ବ୍ୟବହାର କରିବା ଦ୍ R ାରା ବାହାର କରାଯାଇଥିବା RNA ପରିମାଣ କମିଯାଏ ଏବଂ ଫଳସ୍ୱରୂପ RNA ର ଶୁଦ୍ଧତା ମଧ୍ୟ କମିଯାଏ |ଆମେ ଦୃ strongly ଭାବରେ ସୁପାରିଶ କରୁଛୁ ଯେ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ନମୁନା ଡୋଜ୍ RNA ନିଷ୍କାସନ କାର୍ଯ୍ୟରେ 50 ମିଗ୍ରାରୁ ଅଧିକ ହେବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ |

7. ଅନୁପଯୁକ୍ତ ଏଲିଟେସନ୍ ଭଲ୍ୟୁମ୍ କିମ୍ବା ଅସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଏଲିଟେସନ୍ |

ପରାମର୍ଶ: ଶୁଦ୍ଧ ସ୍ତମ୍ଭର ଉତ୍ତମ ପରିମାଣ ହେଉଛି 50-200 μl;ଯଦି ଏଲିଟେସନ୍ ପ୍ରଭାବ ସନ୍ତୋଷଜନକ ନୁହେଁ, ତେବେ 5-10 ମିନିଟ୍ ପରି ଗରମ RNase-Free ddH2O ଯୋଗ କରିବା ପରେ ରୁମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ ସମୟ ବ to ାଇବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |

8. ବଫର୍ PRW2 ସହିତ ଧୋଇବା ପରେ ଶୁଦ୍ଧ ସ୍ତମ୍ଭରେ ଇଥାନଲ୍ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ ଅଛି |

ପରାମର୍ଶ: ଯଦି ଖାଲି ଟ୍ୟୁବ୍ 1 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗଡ୍ ହୋଇଛି ଏବଂ ବଫର୍ PRW2 ରେ ଧୋଇବା ପରେ ଇଥାନଲ୍ ବାକି ଅଛି, ତେବେ ଆପଣ ଖାଲି ଟ୍ୟୁବ୍ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ସମୟକୁ 2 ମିନିଟ୍ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ବ increase ାଇ ପାରିବେ, କିମ୍ବା ଅବଶିଷ୍ଟ ଇଥାନଲକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣରୂପେ ହଟାଇବା ପାଇଁ ଶୁଦ୍ଧ ସ୍ତମ୍ଭକୁ 5 ମିନିଟ୍ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ରୁମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ ରଖିପାରିବେ |

9. କିଟ୍ ଭୁଲ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |

ପରାମର୍ଶ: ପଲିଫେନୋଲିକ୍ ପଲିସାକାରାଇଡ୍ର ଉଦ୍ଭିଦ ନମୁନା ପାଇଁ, ପ୍ଲାଣ୍ଟ ଟୋଟାଲ୍ RNA ଆଇସୋଲେସନ୍ କିଟ୍ ଭଳି ସାଧାରଣ କିଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଆଦର୍ଶ RNA ନମୁନା ପାଇବାରେ ସକ୍ଷମ ହୋଇନପାରେ |ପ୍ଲାଣ୍ଟ ଟୋଟାଲ୍ RNA ଆଇସୋଲେସନ୍ କିଟ୍ ପ୍ଲସ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ଆମେ ଆପଣଙ୍କୁ ପରାମର୍ଶ ଦେଉଛୁ, ଯାହା ପଲିଫେନୋଲିକ୍ ପଲିସାକାରାଇଡ୍ ଉଦ୍ଭିଦ ନମୁନା ପାଇଁ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର ଭାବରେ ଡିଜାଇନ୍ ହୋଇଛି |ପଲିଫେନୋଲ ଏବଂ ପଲିସାକାରାଇଡ୍ ଉଦ୍ଭିଦ ନମୁନାରୁ RNA ବାହାର କରିବା ପାଇଁ ଏକ କିଟ୍ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର ଭାବରେ ବିକଶିତ |

OD260 / OD280 ମୂଲ୍ୟ କମ୍ ଅଟେ |

DdH2O ସହିତ RNA ଏଲିଟେସନ୍ ଏବଂ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରଫୋଟୋମିଟର ପଠନ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ କମ୍ OD260 / OD280 ମୂଲ୍ୟରେ ଫଳାଫଳ |ଅପେକ୍ଷାକୃତ ସଠିକ୍ OD260 / OD280 ମୂଲ୍ୟ ପାଇବାକୁ ଆମେ 10 ମିଟର Tris-HCl, pH 7.5 (RNA କୁ ମୁକ୍ତ କରିବା ପାଇଁ RNase-Free ddH2O ପରିବର୍ତ୍ତେ) ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ସୁପାରିଶ କରୁ, ପୃଷ୍ଠା 19 ରେ “RNA ଏକାଗ୍ରତା ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧତା ଅନୁଧ୍ୟାନ” ଦେଖନ୍ତୁ |

ଶୁଦ୍ଧ RNA ଖରାପ ହୋଇଛି |

ଶୁଦ୍ଧ RNA ର ଗୁଣ ନମୁନା ସଂରକ୍ଷଣ, RNase ପ୍ରଦୂଷଣ ଏବଂ ମନିପୁଲେସନ୍ ଭଳି କାରକ ସହିତ ଜଡିତ |

ସାଧାରଣ କାରଣଗୁଡିକର ବିଶ୍ଳେଷଣ:

1. ଟିସୁ ନମୁନା ସଂଗ୍ରହ ପରେ ସମୟ ସମୟରେ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇନଥିଲା |

ସୁପାରିଶ: ସଂଗ୍ରହ ପରେ ଯଦି ଟିସୁ ନମୁନାଗୁଡିକ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ ନାହିଁ, ଦୟାକରି ଏହାକୁ ତୁରନ୍ତ ନିମ୍ନ ତାପମାତ୍ରାରେ ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରନ୍ତୁ କିମ୍ବା ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନରେ ଶୀଘ୍ର ଫ୍ରିଜ୍ ହେବା ପରେ ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ସଂରକ୍ଷଣ ପାଇଁ -80 ° C କୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ, କିମ୍ବା ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ତୁରନ୍ତ RNA ଷ୍ଟାବିଲାଇଜର୍ RNAlater ସମାଧାନ (ପଶୁ ନମୁନା) ରେ ବୁଡ଼ାନ୍ତୁ |RNA ନିଷ୍କାସନ ପାଇଁ, ନୂତନ ଭାବରେ ସଂଗୃହିତ ଟିସୁ ନମୁନା ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ଚେଷ୍ଟା କରନ୍ତୁ |

2. ଟିସୁ ନମୁନାଗୁଡିକର ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍ ଏବଂ ଥୋଇଙ୍ଗ୍ |

ପରାମର୍ଶ: ଟିସୁ ନମୁନା ଗଚ୍ଛିତ କରିବାବେଳେ ଏହାକୁ ସଂରକ୍ଷଣ ପାଇଁ ଛୋଟ ଖଣ୍ଡରେ କାଟିବା ଭଲ, ଏବଂ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକର ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍ ଏବଂ ଥୋଇବା ଦ୍ R ାରା RNA ର ଅବକ୍ଷୟକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରିବା ସମୟରେ ସେଗୁଡିକର ଏକ ଅଂଶ ବାହାର କରିବା ଭଲ |

3.RNase ଅପରେସନ୍ ରୁମରେ ପରିଚିତ ହୋଇଛି କିମ୍ବା ଏକ ଥର ବ୍ୟବହାର କରାଯାଉଥିବା ଗ୍ଲୋଭସ୍, ମାସ୍କ ଇତ୍ୟାଦି ପିନ୍ଧାଯାଏ ନାହିଁ |

ପରାମର୍ଶ: ପୃଥକ ଆରଏନ୍ଏ ଅପରେସନ୍ରେ RNA ନିଷ୍କାସନ ପରୀକ୍ଷଣଗୁଡିକ ସର୍ବୋତ୍ତମ ଭାବରେ କରାଯାଏ, ଏବଂ ପରୀକ୍ଷଣ ପୂର୍ବରୁ ଲାବୋରେଟୋରୀ ଟେବୁଲ୍ ସଫା କରାଯିବା ଉଚିତ, ଏବଂ ପରୀକ୍ଷଣ ସମୟରେ ଡିସପୋଜେବଲ୍ ଗ୍ଲୋଭସ୍ ଏବଂ ମାସ୍କ ପିନ୍ଧିବା ଉଚିତ୍, ଯାହାକି RNase ର ପରିଚୟ ଦ୍ୱାରା RNA ଅବକ୍ଷୟକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ |

4. ବ୍ୟବହାର ସମୟରେ RNase ଦ୍ୱାରା ରିଜେଣ୍ଟ ପ୍ରଦୂଷିତ |

ପରାମର୍ଶ: ସମ୍ପୃକ୍ତ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ଉଦ୍ଭିଦ ସମୁଦାୟ RNA ନିଷ୍କାସନ କିଟ୍ ର ଏକ ନୂତନ ସିରିଜ୍ ସହିତ ବଦଳାନ୍ତୁ |

5. RNA ମନିପୁଲେସନ୍ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ଏବଂ ପାଇପେଟ୍ ଟିପ୍ସ RNase ସହିତ ଦୂଷିତ |

ପରାମର୍ଶ: ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଯେ RNA ଉତ୍ତୋଳନରେ ବ୍ୟବହୃତ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍, ପାଇପେଟ୍ ଟିପ୍ସ, ପାଇପେଟ୍ ଇତ୍ୟାଦି ସମସ୍ତ RNase ମୁକ୍ତ |

ନିର୍ଦ୍ଦେଶନାମା:

ଉଦ୍ଭିଦ ସମୁଦାୟ RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନତା କିଟ୍ ପ୍ଲସ୍ ନିର୍ଦ୍ଦେଶନାମା |