ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପରିମାଣିକ PCR (TaqMan PCR ଭାବରେ ମଧ୍ୟ ଜଣାଶୁଣା, ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ FQ-PCR କୁହାଯାଏ) ହେଉଛି ଏକ ନୂତନ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ପରିମାଣିକ ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ରରେ PE (ପର୍କିନ୍ ଏଲମର୍) ଦ୍ 1995 ାରା 1995 ରେ ବିକଶିତ ହୋଇଥିଲା। ଏହି ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଲେବଲ୍ ପ୍ରୋବ ଯୋଗ କରି ପାରମ୍ପାରିକ PCR ଉପରେ ଆଧାରିତ।ନମନୀୟ PCR ସହିତ ତୁଳନା କଲେ, ଏହାର ପରିମାଣିକ କାର୍ଯ୍ୟକୁ ହୃଦୟଙ୍ଗମ କରିବାକୁ FQ-PCR ର ଅନେକ ସୁବିଧା ଅଛି |ଏହି ପ୍ରବନ୍ଧଟି ଟେକ୍ନୋଲୋଜିର ବ characteristics ଶିଷ୍ଟ୍ୟ, ନୀତି, ପଦ୍ଧତି ଏବଂ ପ୍ରୟୋଗଗୁଡ଼ିକୁ ସଂକ୍ଷେପରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରିବାକୁ ଇଚ୍ଛା କରେ |

1 ବ Features ଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡିକ

FQ-PCR କେବଳ ସାଧାରଣ PCR ର ଉଚ୍ଚ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ନୁହେଁ, ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପ୍ରୋବ୍ର ପ୍ରୟୋଗ ହେତୁ ଏହା ପରିମାଣିକ ଫଳାଫଳ ପାଇବା ପାଇଁ ଫଟୋ ଇଲେକ୍ଟ୍ରିକ୍ କଣ୍ଡକ୍ଟେସନ୍ ସିଷ୍ଟମ ମାଧ୍ୟମରେ PCR ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ସମୟରେ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିପାରିବ, ଯାହା ପାରମ୍ପାରିକ PCR ର ଅନେକ ଅଭାବକୁ ଦୂର କରେ, ତେଣୁ ଏହାର DNA ହାଇବ୍ରିଡାଇଜେସନ୍ ଏବଂ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରସ୍କୋପି ଟେକ୍ନୋଲୋଜିର ଉଚ୍ଚ ସଠିକତା ମଧ୍ୟ ରହିଥାଏ |

ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ସାଧାରଣ PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ ଅଗରୋଜ୍ ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଏବଂ ଇଥିଡିୟମ୍ ବ୍ରୋମାଇଡ୍ ଦାଗ ଦ୍ୱାରା ଅତିବାଇଗଣି ରଙ୍ଗର ଆଲୋକ କିମ୍ବା ପଲିୟାକ୍ରିଲାମାଇଡ୍ ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଏବଂ ରୂପା ଦାଗ ଦ୍ୱାରା ପାଳନ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |ଏହା କେବଳ ଏକାଧିକ ଯନ୍ତ୍ରର ଆବଶ୍ୟକ କରେ ନାହିଁ, ବରଂ ସମୟ ଏବଂ ପରିଶ୍ରମ ମଧ୍ୟ କରେ |ଇଥିଡିୟମ୍ ବ୍ରୋମାଇଡ୍ ବ୍ୟବହୃତ ଦାଗ ମାନବ ଶରୀର ପାଇଁ କ୍ଷତିକାରକ ଏବଂ ଏହି ଜଟିଳ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପ୍ରଣାଳୀ ପ୍ରଦୂଷଣ ଏବଂ ମିଥ୍ୟା ପଜିଟିଭ୍ ପାଇଁ ସୁଯୋଗ ପ୍ରଦାନ କରିଥାଏ |ତଥାପି, FQ-PCR କେବଳ ନମୁନା ଲୋଡିଂ ସମୟରେ ଥରେ lid ାଙ୍କୁଣୀ ଖୋଲିବା ଆବଶ୍ୟକ କରେ, ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ବନ୍ଦ-ଟ୍ୟୁବ୍ ଅପରେସନ୍ ଅଟେ, ଯାହା PCR ପୋଷ୍ଟ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ଆବଶ୍ୟକ କରେ ନାହିଁ, ପାରମ୍ପାରିକ PCR କାର୍ଯ୍ୟରେ ଅନେକ ଅସୁବିଧାକୁ ଏଡାଇ ଦିଏ |ଏହି ପରୀକ୍ଷଣ ସାଧାରଣତ PE PE କମ୍ପାନୀ ଦ୍ୱାରା ବିକଶିତ ABI7100 PCR ଥର୍ମାଲ୍ ସାଇକ୍ଲର ବ୍ୟବହାର କରେ |

ଯନ୍ତ୍ରର ନିମ୍ନଲିଖିତ ବ characteristics ଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡିକ ଅଛି: id ବ୍ୟାପକ ପ୍ରୟୋଗ: ଏହା DNA ଏବଂ RNA PCR ଉତ୍ପାଦ ପରିମାଣ, ଜିନ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ଅନୁସନ୍ଧାନ, ପାଥୋଜେନ ଚିହ୍ନଟ ଏବଂ PCR ସ୍ଥିତିର ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ୍ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରିବ |② ଅତୁଳନୀୟ ପରିମାଣିକ ନୀତି: ଫ୍ଲୋରୋସ୍କେନ୍ ଲେବଲ୍ ପ୍ରୋବ ବ୍ୟବହାର କରି, ଲେଜର ଉତ୍ତେଜନା ପରେ PCR ଚକ୍ର ସହିତ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସର ପରିମାଣ ଜମା ହେବ, ଯାହା ଦ୍ quant ାରା ପରିମାଣର ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟ ହାସଲ ହେବ |③ ଉଚ୍ଚ କାର୍ଯ୍ୟ ଦକ୍ଷତା: ବିଲ୍ଟ-ଇନ୍ 9600 PCR ଥର୍ମାଲ୍ ସାଇକ୍ଲର୍, କମ୍ପ୍ୟୁଟର ସ୍ୱୟଂଚାଳିତ ଭାବରେ ଏବଂ ସମକାଳୀନ 96 ନମୁନାଗୁଡିକର ବୃଦ୍ଧି ଏବଂ ପରିମାଣ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ କରିବାକୁ 1 ରୁ 2 ଘଣ୍ଟା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ |Gel ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ପାଇଁ କ need ଣସି ଆବଶ୍ୟକତା ନାହିଁ: ନମୁନାକୁ ତରଳାଇବା ଏବଂ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ କରିବାର ଆବଶ୍ୟକତା ନାହିଁ, ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଟ୍ୟୁବରେ ସିଧାସଳଖ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ କେବଳ ଏକ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର ଅନୁସନ୍ଧାନ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |ପାଇପଲାଇନରେ କ pollution ଣସି ପ୍ରଦୂଷଣ ନାହିଁ: ଅନନ୍ୟ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଆବଦ୍ଧ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଟ୍ୟୁବ୍ ଏବଂ ଫଟୋ ଇଲେକ୍ଟ୍ରିକ୍ କଣ୍ଡକ୍ଟେସନ୍ ସିଷ୍ଟମ୍ ଗ୍ରହଣ କରାଯାଇଛି, ତେଣୁ ପ୍ରଦୂଷଣ ବିଷୟରେ ଚିନ୍ତା କରିବାର କ is ଣସି ଆବଶ୍ୟକତା ନାହିଁ |ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ପୁନ oduc ପ୍ରବୃତ୍ତିଯୋଗ୍ୟ: ପରିମାଣିକ ଗତିଶୀଳ ପରିସର ପାଞ୍ଚଟି କ୍ରମାଙ୍କ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ |ତେଣୁ, ଏହି ଟେକ୍ନୋଲୋଜି ସଫଳତାର ସହିତ ବିକଶିତ ହୋଇଥିବାରୁ ଏହାକୁ ବହୁ ବ scientific ଜ୍ଞାନିକ ଅନୁସନ୍ଧାନକାରୀଙ୍କ ଦ୍ୱାରା ମୂଲ୍ୟବାନ କରାଯାଇଛି ଏବଂ ଅନେକ କ୍ଷେତ୍ରରେ ଏହା ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇଛି |

2 ନୀତି ଏବଂ ପଦ୍ଧତି |

FQ-PCR ର କାର୍ଯ୍ୟ ପ୍ରଣାଳୀ ହେଉଛି PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀରେ ଫ୍ଲୋରୋସ୍କେନ୍ ଲେବଲ୍ ପ୍ରୋବ ଯୋଡିବା ପାଇଁ ଟ୍ୟାକ୍ ଏନଜାଇମର 5 ′ → 3 ′ ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ବ୍ୟବହାର କରିବା |ପ୍ରାଥମିକ କ୍ରମରେ ଥିବା DNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ସହିତ ଅନୁସନ୍ଧାନ ବିଶେଷ ଭାବରେ ହାଇବ୍ରିଡାଇଜ୍ ହୋଇପାରେ |ଅନୁସନ୍ଧାନର 5′end ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ନିର୍ଗମନ ଜିନ୍ FAM (6-କାର୍ବକ୍ସାଇଫ୍ଲୋରୋସେସିନ୍, 518nm ରେ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ନିର୍ଗମନ ଶିଖର) ସହିତ ଲେବଲ୍ ହୋଇଛି ଏବଂ 3′end ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ କ୍ୱିଞ୍ଚିଂ ଗ୍ରୁପ୍ TAMRA (6-କାର୍ବକ୍ସାଇଟେଟ୍ରାମେଥାଇଲ୍ରୋଡାମାଇନ୍, ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ନିର୍ଗମନ ଶିଖର 582nm ରେ ବିସ୍ତାରିତ)ଯେତେବେଳେ ଅନୁସନ୍ଧାନ ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ରହିଥାଏ, ନିର୍ବାହକାରୀ ଗୋଷ୍ଠୀ ନିର୍ଗତ ଗୋଷ୍ଠୀର ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ନିର୍ଗମନକୁ ଦମନ କରିଥାଏ |ଥରେ ନିର୍ଗତ ହେଉଥିବା ଗୋଷ୍ଠୀକୁ ନିର୍ବାହକାରୀ ଗୋଷ୍ଠୀରୁ ଅଲଗା କରାଯିବା ପରେ, ପ୍ରତିବନ୍ଧକକୁ ହଟାଇ ଦିଆଯାଏ, ଏବଂ 518nm ରେ ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ସାନ୍ଧ୍ରତା ବ increases ିଥାଏ ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଚିହ୍ନଟ ପ୍ରଣାଳୀ ଦ୍ୱାରା ଚିହ୍ନଟ ହୁଏ | ପୁନ at ନିର୍ମାଣ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ, ଅନୁସନ୍ଧାନ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ DNA ସହିତ ହାଇବ୍ରିଡାଇଜ୍ ହୁଏ, ଏବଂ ବିସ୍ତାର ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ଟ୍ୟାକ୍ ଏନଜାଇମ୍ ପ୍ରାଇମର ବିସ୍ତାର ସହିତ DNA ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ସହିତ ଗତି କରେ |ଯେତେବେଳେ ଯା be ୍ଚଟି କଟିଯାଏ, ବନ୍ଦ କରିବାର ପ୍ରଭାବ ମୁକ୍ତ ହୁଏ ଏବଂ ଫ୍ଲୋରେସେଣ୍ଟାଲ ସଙ୍କେତ ଦିଆଯାଏ |ପ୍ରତ୍ୟେକ ଥର ଟେମ୍ପଲେଟ୍ କପି ହେଲେ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ ରିଲିଜ୍ ସହିତ ଏକ ପ୍ରୋବ କଟିଯାଏ |ଯେହେତୁ ରିଲିଜ୍ ହୋଇଥିବା ଫ୍ଲୋରୋଫୋର ସଂଖ୍ୟା ଏବଂ PCR ଉତ୍ପାଦ ସଂଖ୍ୟା ମଧ୍ୟରେ ଗୋଟିଏ ପରେ ଗୋଟିଏ ସମ୍ପର୍କ ଅଛି, ଟେମ୍ପଲେଟ୍କୁ ସଠିକ୍ ପରିମାଣ କରିବା ପାଇଁ ଏହି କ que ଶଳ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଯନ୍ତ୍ର ସାଧାରଣତ PE PE କମ୍ପାନୀ ଦ୍ୱାରା ବିକଶିତ ABI7100 PCR ଥର୍ମାଲ୍ ସାଇକ୍ଲର୍ ବ୍ୟବହାର କରେ ଏବଂ ଅନ୍ୟ ଥର୍ମାଲ୍ ସାଇକ୍ଲର୍ ମଧ୍ୟ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରେ |ଯଦି ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ABI7700 ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରକାର ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମାପ୍ତ ହେବା ପରେ ପରିମାଣିକ ଫଳାଫଳକୁ ସିଧାସଳଖ କମ୍ପ୍ୟୁଟର ବିଶ୍ଳେଷଣ ମାଧ୍ୟମରେ ଦିଆଯାଇପାରେ |ଯଦି ଆପଣ ଅନ୍ୟ ଥର୍ମାଲ୍ ସାଇକେଲ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତି, ତେବେ RQ +, RQ-, △ RQ ଗଣନା କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଟ୍ୟୁବରେ ଥିବା ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସିଗନାଲ୍ ମାପିବା ପାଇଁ ଆପଣଙ୍କୁ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ଡିଟେକ୍ଟର ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପଡିବ |RQ + ନମୁନା ଟ୍ୟୁବ୍ ର ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ନିର୍ଗମନ ଗୋଷ୍ଠୀର ଲ୍ୟୁମାଇସେନ୍ସ ତୀବ୍ରତାର ଅନୁପାତକୁ ଲିଭାଇଥାଏ, RQ- ଖାଲି ଟ୍ୟୁବରେ ଦୁଇଜଣଙ୍କ ଅନୁପାତକୁ ଦର୍ଶାଏ, △ RQ (△ RQ = RQ + -RQ-) ତଥ୍ୟ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ପରେ PCR ସମୟରେ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ସିଗ୍ନାଲ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନ ପରିମାଣକୁ ଦର୍ଶାଏ |ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପ୍ରୋବ୍ର ପ୍ରବର୍ତ୍ତନ ହେତୁ, ପରୀକ୍ଷଣର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ଯଥେଷ୍ଟ ଉନ୍ନତ ହେଲା |ଯା be ୍ଚ ଡିଜାଇନ୍ ସାଧାରଣତ the ନିମ୍ନଲିଖିତ ସର୍ତ୍ତଗୁଡିକ ପୂରଣ କରିବା ଉଚିତ୍: b ବାନ୍ଧିବାର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତା ନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ ଯା be ୍ଚର ଲମ୍ବ ପ୍ରାୟ 20-40 ଆଧାର ହେବା ଉଚିତ୍ |ଏକକ ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ କ୍ରମର ନକଲକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ ଜିସି ବେସର ବିଷୟବସ୍ତୁ 40% ରୁ 60% ମଧ୍ୟରେ |ହାଇବ୍ରିଡାଇଜେସନ୍ କିମ୍ବା ପ୍ରାଇମର୍ ସହିତ ଓଭରଲପ୍ ଠାରୁ ଦୂରେଇ ରୁହନ୍ତୁ |ପ୍ରୋବ ଏବଂ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ବାନ୍ଧିବାର ସ୍ଥିରତା ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ବନ୍ଧନର ସ୍ଥିରତାଠାରୁ ଅଧିକ, ତେଣୁ ପ୍ରୋବ୍ର Tm ମୂଲ୍ୟ ପ୍ରାଇମରର Tm ମୂଲ୍ୟଠାରୁ ଅତି କମରେ 5 ° C ଅଧିକ ହେବା ଉଚିତ |ଏଥିସହ, ଅନୁସନ୍ଧାନର ଏକାଗ୍ରତା, ପ୍ରୋବ ଏବଂ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ କ୍ରମ ମଧ୍ୟରେ ହୋମୋଲୋଜି, ଏବଂ ପ୍ରୋବ ଏବଂ ପ୍ରାଇମର୍ ମଧ୍ୟରେ ଦୂରତା ସମସ୍ତ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଫଳାଫଳ ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ |

ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ:

ଚାଇନା Lnc-RT ହିରୋ I (gDNase ସହିତ) (lncRNA ରୁ ପ୍ରଥମ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ cDNA ସିନ୍ଥେସିସ୍ ପାଇଁ ସୁପର ପ୍ରେମିକ୍ସ) ଉତ୍ପାଦକ ଏବଂ ଯୋଗାଣକାରୀ |Foregene (foreivd.com)

ଚାଇନା ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ସହଜ-ଟାକମ୍ୟାନ୍ ଉତ୍ପାଦକ ଏବଂ ଯୋଗାଣକାରୀ | |Foregene (foreivd.com)