ପାଇପେଟ୍ ଟିପ୍ସ ଏବଂ ଇପି ଟ୍ୟୁବ୍ ଇତ୍ୟାଦିର ନିରାକରଣ |

1. ଡିଅନାଇଜଡ୍ ପାଣି ସହିତ 0.1% (ଏକ ହଜାର) DEPC (ଅତ୍ୟଧିକ ବିଷାକ୍ତ ପଦାର୍ଥ) ପ୍ରସ୍ତୁତ କରନ୍ତୁ, ଏହାକୁ ଏକ ଫ୍ୟୁମ୍ ହୁଡରେ ଭଲ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଆଲୋକଠାରୁ 4 ° C ଦୂରରେ ରଖନ୍ତୁ;

DEPC ଜଳ ହେଉଛି DEPC ସହିତ ବିଶୁଦ୍ଧ ଜଳ ଏବଂ ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରା ଏବଂ ଉଚ୍ଚ ଚାପ ଦ୍ୱାରା ନିର୍ଗତ |RNase, DNase ଏବଂ proteinase ରୁ ମୁକ୍ତ ହେବାକୁ ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଛି |

2. ପାଇପେଟ୍ ଟିପ୍ ଏବଂ ଇପି ଟ୍ୟୁବ୍ କୁ 0.1% DEPC ରେ ରଖନ୍ତୁ, ଏବଂ ନିଶ୍ଚିତ କରନ୍ତୁ ଯେ ପାଇପେଟ୍ ଟିପ୍ ଏବଂ ଇପି ଟ୍ୟୁବ୍ 0.1% DEP ରେ ଭରି ରହିଛି |

3. ଆଲୋକରୁ ରକ୍ଷା କରନ୍ତୁ, ଛିଡା ହୁଅନ୍ତୁ, ରାତାରାତି (12-24 ଘଣ୍ଟା)

4. ଟିପ୍ ଏବଂ ଇପି ଟ୍ୟୁବ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ବାକ୍ସକୁ DEPC ରେ ଭିଜାଇବାର ଆବଶ୍ୟକତା ନାହିଁ |ଟିପ୍ କିମ୍ବା ଇପି ଟ୍ୟୁବରେ ଥିବା DEPC ଜଳକୁ ପ୍ରାୟ କା oving ଼ିବା ପରେ ଏହାକୁ ପ୍ୟାକ୍ କରି ଗୁଡ଼ାଇ ରଖ |

5. 121 ଡିଗ୍ରୀ ସେଲସିୟସ୍, 30 ମିନିଟ୍ |

6. 180 ଡିଗ୍ରୀ ସେଲସିୟସ୍, ଅନେକ ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଶୁଖନ୍ତୁ (ଅତିକମରେ 3 ଘଣ୍ଟା)

ଟିପନ୍ତୁ: a।DEPC ପରିଚାଳନା କରିବା ସମୟରେ ଲାଟେକ୍ସ ଗ୍ଲୋଭସ୍ ଏବଂ ମାସ୍କ ପିନ୍ଧନ୍ତୁ!b, କିମ୍ବା DEPC ନିରୂପଣ ବିନା, 130 ℃, 90min autoclave (ଅନେକ ଲାବ୍ରୋଟୋରୀ ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରା ନିରୂପଣ ଦୁଇଥର)

RNA ନିଷ୍କାସନ ବିଚାର |

ଟିସୁ RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନତା ବିଫଳତାର ଦୁଇଟି ପ୍ରମୁଖ ଘଟଣା |

RNA ଅବକ୍ଷୟ ଏବଂ ଟିସୁରେ ଥିବା ଅପରିଷ୍କାର ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ,ଅବନତି ବିଷୟରେ, ଆସନ୍ତୁ ପ୍ରଥମେ ଦେଖିବା କାହିଁକି ସାଂସ୍କୃତିକ କୋଷରୁ ବାହାର କରାଯାଇଥିବା RNA ସହଜରେ ଖରାପ ହୁଏ ନାହିଁ |ବିଦ୍ୟମାନ RNA ନିଷ୍କାସନ ରେଜେଣ୍ଟଗୁଡିକ ସମସ୍ତ ଉପାଦାନ ଧାରଣ କରିଥାଏ ଯାହାକି RNase କୁ ଶୀଘ୍ର ପ୍ରତିରୋଧ କରିଥାଏ |ସଂସ୍କୃତ କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ଲାଇସେଟ୍ ଯୋଡନ୍ତୁ, ଏବଂ ଏହାକୁ କେବଳ ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ, ସମସ୍ତ କୋଷଗୁଡିକ ଲାଇସେଟ୍ ସହିତ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶ୍ରିତ ହୋଇପାରିବ ଏବଂ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଲାଇସେଡ୍ |କୋଷଗୁଡିକ ଲାଇସେଡ୍ ହେବା ପରେ, ଲାଇସେଟ୍ ରେ ଥିବା ସକ୍ରିୟ ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକ ତୁରନ୍ତ ଇଣ୍ଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ RNase କୁ ପ୍ରତିରୋଧ କରନ୍ତି, ତେଣୁ RNA ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ରହିଥାଏ |ଏହାର ଅର୍ଥ ହେଉଛି, କାରଣ ସଂସ୍କୃତ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ଲାଇସେଟ୍ ସହିତ ସହଜରେ ଏବଂ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ଯୋଗାଯୋଗ କରନ୍ତି, ସେମାନଙ୍କର RNA ସହଜରେ ଖରାପ ହୁଏ ନାହିଁ;ଅନ୍ୟ ପଟେ, ଟିସୁରେ ଥିବା RNA ସହଜରେ ଖରାପ ହୋଇଯାଏ କାରଣ ଟିସୁରେ ଥିବା କୋଷଗୁଡ଼ିକ ଶୀଘ୍ର ଲାଇସେଟ୍ ସହିତ ଯୋଗାଯୋଗ କରିବା ସହଜ ନୁହେଁ |ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ଯୋଗାଯୋଗ ହେତୁ |ତେଣୁ,RNA କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ କରୁଥିବାବେଳେ ଟିସୁକୁ ଗୋଟିଏ କୋଷରେ ପରିଣତ କରିବାର ଏକ ଉପାୟ ଅଛି ବୋଲି ମନେକରି, ଅବନତିର ସମସ୍ୟା ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ସମାଧାନ ହୋଇପାରେ |

ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ ମିଲିଂ ହେଉଛି ଏହିପରି ପଦ୍ଧତି |ଅବଶ୍ୟ, ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ ମିଲିଂ ପଦ୍ଧତି ଅତ୍ୟନ୍ତ ଅସୁବିଧାଜନକ ଅଟେ, ବିଶେଷତ when ଯେତେବେଳେ ନମୁନା ସଂଖ୍ୟା ଅଧିକ ଥାଏ |ଏହା ପରବର୍ତ୍ତୀ ସର୍ବୋତ୍ତମ ଜିନିଷ ସୃଷ୍ଟି କଲା: ହୋମୋଜେନାଇଜର |Theହୋମୋଜେନାଇଜରଲାଇସେଟ୍ ସହିତ କୋଷଗୁଡିକ ଯୋଗାଯୋଗ ହେବା ପୂର୍ବରୁ RNase କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ କିପରି ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ ହୁଏ ତାହା ପଦ୍ଧତି ବିଚାର କରେ ନାହିଁ, ବରଂ ପ୍ରାର୍ଥନା କରେ ଯେ ଇଣ୍ଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ RNase RN କୁ ଖରାପ କରୁଥିବା ହାରଠାରୁ ଟିସୁ ବ୍ୟାଘାତ ହାର ଦ୍ରୁତ ଅଟେ |

ଇଲେକ୍ଟ୍ରିକ୍ ହୋମୋଜେନାଇଜରର ପ୍ରଭାବ ଭଲ,ଏବଂ ଗ୍ଲାସ୍ ହୋମୋଜେନାଇଜରର ପ୍ରଭାବ ଖରାପ, କିନ୍ତୁ ସାଧାରଣତ ,, ହୋମୋଜେନାଇଜର ପଦ୍ଧତି ଅବକ୍ଷୟ ଘଟଣାକୁ ରୋକିପାରିବ ନାହିଁ |ତେଣୁ, ଯଦି ନିଷ୍କାସନ ହ୍ରାସ ହୁଏ, ମୂଳ ଇଲେକ୍ଟ୍ରିକ୍ ହୋମୋଜେନାଇଜରକୁ ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ସହିତ ଗ୍ରାଇଣ୍ଡ୍ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯିବା ଉଚିତ୍;ମୂଳ ଗ୍ଲାସ୍ ହୋମୋଜେନାଇଜରକୁ ଏକ ବ electric ଦ୍ୟୁତିକ ହୋମୋଜେନାଇଜରରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରାଯିବା ଉଚିତ କିମ୍ବା ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ ସହିତ ସିଧାସଳଖ ମିଲ୍ କରାଯିବା ଉଚିତ |ସମସ୍ୟା ପ୍ରାୟ 100% ସମ୍ଭବ ଅଟେ |ସମାଧାନ କର |

ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷଣକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରୁଥିବା ଅପରିଷ୍କାର ଅବଶିଷ୍ଟ ସମସ୍ୟା ଅବକ୍ଷୟ ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ ବିବିଧ କାରଣ ରହିଛି, ଏବଂ ସମାଧାନଗୁଡ଼ିକ ଅନୁରୂପ ଭାବରେ ଭିନ୍ନ |ପରିଶେଷରେ,ଯଦି ଟିସୁରେ ଅବନତି କିମ୍ବା ଅବଶିଷ୍ଟ ଅପରିଷ୍କାରତା ଥାଏ, ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପଦାର୍ଥ ପାଇଁ ନିଷ୍କାସନ ପଦ୍ଧତି / ପୁନ ag ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହେବା ଆବଶ୍ୟକ |ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ୍ ପାଇଁ ତୁମର ମୂଲ୍ୟବାନ ନମୁନାକୁ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପଡିବ ନାହିଁ: ଆପଣ ବଜାରରୁ ମାଛ / ଚିକେନ୍ ପରି କିଛି ଛୋଟ ପ୍ରାଣୀ କିଣି ପାରିବେ, RNA ଉତ୍ତୋଳନ ପାଇଁ ସାମଗ୍ରୀର ଅନୁରୂପ ଅଂଶ ନେଇପାରିବେ ଏବଂ ଅନ୍ୟ ଅଂଶ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଉତ୍ତୋଳନ ପାଇଁ - ପାଟି, ପେଟ ଏବଂ ଅନ୍ତନଳୀରେ ଗ୍ରାଇଣ୍ଡ୍ କରନ୍ତୁ |

ବାହାର କରାଯାଇଥିବା RNA ର ଲକ୍ଷ୍ୟ RNA ବିଭିନ୍ନ ଅନୁସରଣ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ ଏବଂ ଏହାର ଗୁଣାତ୍ମକ ଆବଶ୍ୟକତା ଭିନ୍ନ ଅଟେ |

cDNA ଲାଇବ୍ରେରୀ ନିର୍ମାଣରେ ଏନଜାଇମ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରତିବନ୍ଧକର ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ ବିନା RNA ଅଖଣ୍ଡତା ଆବଶ୍ୟକ |ଉତ୍ତରରେ ଉଚ୍ଚ RNA ଅଖଣ୍ଡତା ଏବଂ ଏନଜାଇମ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ନିରୋଧକ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ ପାଇଁ କମ୍ ଆବଶ୍ୟକତା ଆବଶ୍ୟକ କରେ |RT-PCR ଅତ୍ୟଧିକ ଉଚ୍ଚ RNA ଅଖଣ୍ଡତା ଆବଶ୍ୟକ କରେ ନାହିଁ,କିନ୍ତୁ ଏନଜାଇମ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ପ୍ରତିରୋଧ କରେ |ଅବଶିଷ୍ଟ ଆବଶ୍ୟକତା କଠୋର ଅଟେ |ଇନପୁଟ୍ ଆଉଟପୁଟ୍ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରେ;ପ୍ରତ୍ୟେକ ଥର ଲକ୍ଷ୍ୟ ହେଉଛି ସର୍ବୋଚ୍ଚ ଶୁଦ୍ଧତା RNA ପାଇବା, ଏହା ଲୋକ ଏବଂ ଟଙ୍କା ଖର୍ଚ୍ଚ କରିବ |

ନମୁନା ସଂଗ୍ରହ / ସଂରକ୍ଷଣ

ଅବକ୍ଷୟକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରୁଥିବା କାରକଗୁଡିକ ନମୁନା ଜୀବନ୍ତ ଶରୀର / କିମ୍ବା ମୂଳ ଅଭିବୃଦ୍ଧି ପରିବେଶ ଛାଡିବା ପରେ, ନମୁନାରେ ଥିବା ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମ୍ RNA କୁ ଖରାପ କରିବାକୁ ଲାଗିବ,ଏବଂ ଅବନତି ହାର ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମ୍ ଏବଂ ତାପମାତ୍ରା ସହିତ ଜଡିତ |ପାରମ୍ପାରିକ ଭାବରେ, ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ କରିବାର କେବଳ ଦୁଇଟି ଉପାୟ ଅଛି: ତୁରନ୍ତ ଲାଇସେଟ୍ ଯୋଡନ୍ତୁ ଏବଂ ପୁଙ୍ଖାନୁପୁଙ୍ଖ ଏବଂ ଶୀଘ୍ର ହୋମୋଜେନାଇଜ୍ କରନ୍ତୁ |ଛୋଟ ଖଣ୍ଡରେ କାଟି ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନରେ ତୁରନ୍ତ ଫ୍ରିଜ୍ କର |ଉଭୟ ପନ୍ଥା ଦ୍ରୁତ କାର୍ଯ୍ୟ ଆବଶ୍ୟକ କରେ |ଶେଷଟି ସମସ୍ତ ନମୁନା ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ହୋଇଥିବାବେଳେ ପୂର୍ବଟି କେବଳ କମ୍ କୋଷ ଏବଂ ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମ୍ ଥିବା ଟିସୁ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ଏବଂ ହୋମୋଜେନାଇଜ୍ କରିବା ସହଜ ଅଟେ |ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଭାବରେ, ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁ, ଯକୃତ, ଥାଇମସ୍, ଅଗ୍ନାଶୟ, କଫ, ମସ୍ତିଷ୍କ, ଚର୍ବି, ମାଂସପେଶୀ ଟିସୁ ଇତ୍ୟାଦି ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ ସହିତ ଅଗ୍ରଗତି କରିବା ପୂର୍ବରୁ ସର୍ବୋତ୍ତମ |

ନମୁନାଗୁଡ଼ିକର ଖଣ୍ଡବିଖଣ୍ଡନ ଏବଂ ହୋମୋଜେନାଇଜେସନ୍ |

ଅବନତି ଏବଂ ଅମଳ ନମୁନା ଖଣ୍ଡକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରୁଥିବା କାରକଗୁଡ଼ିକ ହେଉଛି |ପୁଙ୍ଖାନୁପୁଙ୍ଖ ହୋମୋଜେନାଇଜେସନ୍ ପାଇଁ |, ଯାହାକି RNA ର ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଏବଂ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରକାଶନ ପାଇଁ |କକ୍ଷଗୁଡିକ ଭାଙ୍ଗି ନପାରି ସିଧାସଳଖ ହୋମୋଜେନାଇଜ୍ ହୋଇପାରିବ |ଟିସୁ ଭାଙ୍ଗିବା ପରେ ହିଁ ହୋମୋଜେନାଇଜ୍ ହୋଇପାରିବ |ଖମୀର ଏବଂ ଜୀବାଣୁ ଏକତ୍ର ହେବା ପୂର୍ବରୁ ସଂପୃକ୍ତ ଏନଜାଇମ୍ ସହିତ ଭାଙ୍ଗିବା ଆବଶ୍ୟକ |ନିମ୍ନ ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ ଏବଂ ସହଜ ହୋମୋଜେନାଇଜେସନ୍ ସହିତ ଟିସୁଗୁଡିକ ଏକ ହୋମୋଜେନାଇଜର ଦ୍ୱାରା ଲାଇସେଟ୍ରେ ଏକ ସମୟରେ ଚୂର୍ଣ୍ଣ ହୋଇ ହୋମୋଜେନାଇଜ୍ ହୋଇପାରେ |ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁ, ଯକୃତ, ଥାଇମସ୍, ଅଗ୍ନାଶୟ, କଫ, ମସ୍ତିଷ୍କ, ଚର୍ବି, ମାଂସପେଶୀ ଟିସୁ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ନମୁନା, ସେଗୁଡ଼ିକ ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମ୍ରେ ଅଧିକ କିମ୍ବା ସହଜରେ ହୋମୋଜେନାଇଜ୍ ହୋଇନଥାଏ,ତେଣୁ ଟିସୁ ବ୍ୟାଘାତ ଏବଂ ହୋମୋଜେନାଇଜେସନ୍ ପୃଥକ ଭାବରେ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |।ଖଣ୍ଡବିଖଣ୍ଡନର ସବୁଠାରୁ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ଏବଂ ଉତ୍ପାଦନକାରୀ ପଦ୍ଧତି ହେଉଛି ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ ସହିତ ମିଲ୍, ଏବଂ ହୋମୋଜେନାଇଜେସନ୍ ର ସବୁଠାରୁ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ପଦ୍ଧତି ହେଉଛି ଏକ ବ electric ଦ୍ୟୁତିକ ହୋମୋଜେନାଇଜର ବ୍ୟବହାର |ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ ସହିତ ମିଲ୍ କରିବା ବିଷୟରେ ଏକ ବିଶେଷ ଟିପ୍ପଣୀ: ସମଗ୍ର ମିଲ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ ନମୁନାକୁ ଥୋଇ ଦିଆଯିବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ, କାରଣ ଫ୍ରିଜ୍ ହେବାବେଳେ ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମ୍ କାର୍ଯ୍ୟ କରିବାର ସମ୍ଭାବନା ଅଧିକ |

ଲାଇସେଟ୍ ପସନ୍ଦ |

କାର୍ଯ୍ୟର ସୁବିଧା ଏବଂ ଅବଶିଷ୍ଟ ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଅପରିଷ୍କାର କାରଣଗୁଡିକ ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଇବା ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ ଲାଇସିସ୍ ସମାଧାନଗୁଡିକ RNase ର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପ୍ରାୟ ବାଧା ଦେଇପାରେ |ତେଣୁ, ଲାଇସିସ୍ ସମାଧାନ ବାଛିବାର ମୁଖ୍ୟ ବିଷୟ ହେଉଛି ଶୁଦ୍ଧକରଣ ପଦ୍ଧତି ସହିତ ମିଳିତ ଭାବରେ ବିଚାର କରିବା |ଗୋଟିଏ ବ୍ୟତିକ୍ରମ ଅଛି:ଉଚ୍ଚ ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ ସହିତ ନମୁନାଗୁଡିକ ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମ୍ ନିଷ୍କ୍ରିୟ କରିବାର କ୍ଷମତା ବ to ାଇବା ପାଇଁ ଫେନୋଲ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ ଲାଇସେଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ପରାମର୍ଶ ଦିଆଯାଇଛି |

ଶୁଦ୍ଧ ପଦ୍ଧତିର ପସନ୍ଦ |

ଅବଶିଷ୍ଟ ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଅପରିଷ୍କାରତା, ନିଷ୍କାସନ ବେଗକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରୁଥିବା କାରକଗୁଡିକ କୋଷ ପରି ପରିଷ୍କାର ନମୁନା ପାଇଁ, ପ୍ରାୟ କ pur ଣସି ଶୁଦ୍ଧକରଣ ପ୍ରଣାଳୀ ସହିତ ସନ୍ତୋଷଜନକ ଫଳାଫଳ ମିଳିପାରିବ |କିନ୍ତୁ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଅନେକ ନମୁନା ପାଇଁ, ବିଶେଷତ those ଯେଉଁମାନେ ଉଚ୍ଚ ସ୍ତରର ଅପରିଷ୍କାରତା ଯଥା ଉଦ୍ଭିଦ, ଯକୃତ, ଜୀବାଣୁ ଇତ୍ୟାଦି ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ଶୁଦ୍ଧ ପଦ୍ଧତି ବାଛିବା ଅତ୍ୟନ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ |ସ୍ତମ୍ଭ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗୁଲ୍ ଶୁଦ୍ଧକରଣ ପଦ୍ଧତିର ଏକ ଦ୍ରୁତ ନିଷ୍କାସନ ବେଗ ଅଛି ଏବଂ RNA ର ପରବର୍ତ୍ତୀ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରୁଥିବା ଅପରିଷ୍କାରତାକୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ଅପସାରଣ କରିପାରିବ, କିନ୍ତୁ ଏହା ମହଙ୍ଗା ଅଟେ (ଫୋରେଜେନ୍ ବ୍ୟୟବହୁଳ କିଟ୍ ପ୍ରଦାନ କରିପାରିବ, ଅଧିକ ବିବରଣୀ କ୍ଲିକ୍ କରନ୍ତୁ |ଏଠାରେ);ଅର୍ଥନ and ତିକ ଏବଂ କ୍ଲାସିକ୍ ଶୁଦ୍ଧକରଣ ପ୍ରଣାଳୀ ବ୍ୟବହାର କରି, ଯେପରିକି LiCl ବୃଷ୍ଟିପାତ, ମଧ୍ୟ ସନ୍ତୋଷଜନକ ଫଳାଫଳ ହାସଲ କରିପାରିବ, କିନ୍ତୁ କାର୍ଯ୍ୟ ସମୟ ଲମ୍ବା ଅଟେ |।

RNA ନିଷ୍କାସନ ପାଇଁ “ତିନୋଟି ଅନୁଶାସନ ଏବଂ ଆଠଟି ଧ୍ୟାନ” |

ଅନୁଶାସନ 1:ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମର ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ସମାପ୍ତ କରନ୍ତୁ |

ଟିପ୍ପଣୀ 1:ଦୃ ly ଭାବରେ ମାସ୍କ ଏବଂ ଗ୍ଲୋଭସ୍ ପିନ୍ଧନ୍ତୁ |

ଟିପ୍ପଣୀ 2:ଏହି ପରୀକ୍ଷଣରେ ଜଡିତ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍, ଟିପ୍ ହେଡ୍, ପାଇପେଟ୍ ରଡ୍, ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଟ୍ୟାଙ୍କ ଏବଂ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ବେଞ୍ଚଗୁଡିକ ଭଲ ଭାବରେ ବିସର୍ଜନ କରାଯିବା ଉଚିତ୍ |

ଟିପ୍ପଣୀ 3:ପରୀକ୍ଷଣରେ ଜଡିତ ରେଜେଣ୍ଟସ୍ / ସମାଧାନଗୁଡିକ, ବିଶେଷତ water ଜଳ, ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ RNase ମୁକ୍ତ |

ଅନୁଶାସନ 2:ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ଅବରୋଧ କରନ୍ତୁ |

ଟିପ୍ପଣୀ 4:ଏକ ଉପଯୁକ୍ତ ହୋମୋଜେନାଇଜେସନ୍ ପଦ୍ଧତି ବାଛନ୍ତୁ |

ଟିପ୍ପଣୀ 5:ଏକ ଉପଯୁକ୍ତ ଲାଇସେଟ୍ ବାଛନ୍ତୁ |

ଟିପ୍ପଣୀ 6:ନମୁନାର ପ୍ରାରମ୍ଭ ପରିମାଣକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରନ୍ତୁ |

ଅନୁଶାସନ ::ତୁମର ନିଷ୍କାସନ ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟ ସ୍ପଷ୍ଟ କର |

ଟିପ୍ପଣୀ 7:ଯେକ any ଣସି ଲାଇସେଟ୍ ସିଷ୍ଟମ୍ ସର୍ବାଧିକ ନମୁନା ପରିମାଣର ନିକଟତର ହେବା ସହିତ, ଉତ୍ତୋଳନ ସଫଳତା ହାର ତୀବ୍ର ହ୍ରାସ ପାଇଥାଏ |

ଟିପ୍ପଣୀ 8:ସଫଳ RNA ଉତ୍ତୋଳନ ପାଇଁ ଏକମାତ୍ର ଅର୍ଥନ cr ତିକ ମାନଦଣ୍ଡ ହେଉଛି ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷଣରେ ଏକ ସଫଳତା, ଅମଳ ନୁହେଁ |

RNase ପ୍ରଦୂଷଣର ଶ୍ରେଷ୍ଠ ୧୦ ଉତ୍ସ |

1. ଆଙ୍ଗୁଠିଗୁଡିକ ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମର ପ୍ରଥମ ଉତ୍ସ, ତେଣୁ ଗ୍ଲୋଭସ୍ ପିନ୍ଧିବା ଏବଂ ବାରମ୍ବାର ବଦଳାଇବା ଜରୁରୀ |ଏହା ସହିତ ମାସ୍କ ମଧ୍ୟ ପିନ୍ଧିବା ଜରୁରୀ, କାରଣ ଶ୍ୱାସକ୍ରିୟା ମଧ୍ୟ ଏନଜାଇମର ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଉତ୍ସ |ଏକ ଗ୍ଲୋଭ୍ ମାସ୍କ ପିନ୍ଧିବାର ଅତିରିକ୍ତ ଲାଭ ହେଉଛି ପରୀକ୍ଷକଙ୍କୁ ସୁରକ୍ଷା ଦେବା |

2. ପାଇପେଟ୍ ଟିପ୍ସ, ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍, ପାଇପେଟ୍ - RNase କେବଳ ଷ୍ଟେରିଲାଇଜେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ନିଷ୍କ୍ରିୟ ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ, ତେଣୁ ପାଇପେଟ୍ ଟିପ୍ସ ଏବଂ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ DEPC ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯିବା ଉଚିତ, ଯଦିଓ ସେଗୁଡିକ DEPC ଚିକିତ୍ସିତ ଭାବରେ ଚିହ୍ନିତ |ଏକ ବିଶେଷ ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟ ବିଶିଷ୍ଟ ପାଇପେଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବା ଭଲ, ଏହାକୁ ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ 75% ଆଲକୋହଲ୍ ସୂତା ବଲ୍ ସହିତ ପୋଛି ଦିଅ, ବିଶେଷତ the ବାଡ଼ି;ଏହା ସହିତ, ଏକ ହେଡ୍ ରିମୁଭର୍ ବ୍ୟବହାର ନକରିବାକୁ ନିଶ୍ଚିତ ହୁଅନ୍ତୁ |

3. ଜଳ / ବଫର୍ RNase ପ୍ରଦୂଷଣରୁ ମୁକ୍ତ ହେବା ଜରୁରୀ |

4. ଅତିକମରେ ପରୀକ୍ଷା ଟେବୁଲକୁ 75% ମଦ୍ୟପାନ କଟନ୍ ବଲ୍ ସହିତ ସଫା କରିବା ଉଚିତ୍ |

5. ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ RNase ସମସ୍ତ ଟିସୁରେ ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମ୍ ଥାଏ, ତେଣୁ ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ସହିତ ଟିସୁ ଶୀଘ୍ର ଫ୍ରିଜ୍ ହେବା ଅବକ୍ଷୟକୁ ହ୍ରାସ କରିବାର ସର୍ବୋତ୍ତମ ଉପାୟ |ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ଷ୍ଟୋରେଜ୍ / ଗ୍ରାଇଣ୍ଡିଂ ପଦ୍ଧତି ବାସ୍ତବରେ ଅସୁବିଧାଜନକ, କିନ୍ତୁ ଉଚ୍ଚ ସ୍ତରର ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମ୍ ଥିବା ଟିସୁ ପାଇଁ ଏହା ହେଉଛି ଏକମାତ୍ର ଉପାୟ |

6. RNA ନମୁନା RNA ନିଷ୍କାସନ ଉତ୍ପାଦଗୁଡ଼ିକରେ RNase ପ୍ରଦୂଷଣର ଚିହ୍ନ ରହିପାରେ |

7. ପ୍ଲାସିମ ନିଷ୍କାସନ ପ୍ଲାସିମ ନିଷ୍କାସନ ପ୍ରାୟତ R RNA କୁ ଖରାପ କରିବା ପାଇଁ Rnase ବ୍ୟବହାର କରିଥାଏ, ଏବଂ ଅବଶିଷ୍ଟ Rnase ପ୍ରୋଟିନେଜ୍ K ସହିତ ହଜମ ହେବା ଉଚିତ ଏବଂ PCI ଦ୍ୱାରା ବାହାର କରାଯିବା ଉଚିତ |

8. RNA ଷ୍ଟୋରେଜ୍ ଯଦିଓ ଏହା କମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ ଗଚ୍ଛିତ ହୁଏ, ତେବେ ପରିମାଣର RNase RNA ଅବନତି ଘଟାଇବ |RNA ର ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ସଂରକ୍ଷଣ ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ ସମାଧାନ ହେଉଛି ଏକ ଲୁଣ / ମଦ୍ୟପାନ ନିଲମ୍ବନ, କାରଣ ମଦ୍ୟପାନ ନିମ୍ନ ତାପମାତ୍ରାରେ ସମସ୍ତ ଏନଜାଇମାଟିଭ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପ୍ରତିରୋଧ କରିଥାଏ |

9. ଯେତେବେଳେ କେସନ୍ (Ca, Mg) ଏହି ଆୟନ ଧାରଣ କରେ, 80C ରେ 5 ମିନିଟ୍ ଗରମ କରିବା ଦ୍ R ାରା RNA ଖଣ୍ଡ ହୋଇଯାଏ, ତେଣୁ ଯଦି RNA ଗରମ ହେବା ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ, ତେବେ ସଂରକ୍ଷଣ ସମାଧାନରେ ଏକ ଚେଲିଂ ଏଜେଣ୍ଟ (1 ମି ସୋଡିୟମ୍ ସାଇଟ୍ରେଟ୍, pH 6.4) ରହିବା ଆବଶ୍ୟକ |

10. ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷଣରେ ବ୍ୟବହୃତ ଏନଜାଇମ୍ RNase ଦ୍ୱାରା ଦୂଷିତ ହୋଇପାରେ |

RNA ନିଷ୍କାସନ ପାଇଁ 10 ଟି ଟିପ୍ସ |

1: RNase କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ଶୀଘ୍ର ପ୍ରତିରୋଧ କରନ୍ତୁ |ସଂଗ୍ରହ ପରେ ନମୁନାଗୁଡିକ ଶୀଘ୍ର ଫ୍ରିଜ୍ ହୋଇଯାଏ, ଏବଂ ଲାଇସିସ୍ ସମୟରେ ଦ୍ରୁତ ଅପରେସନ୍ ଦ୍ୱାରା RNase ନିଷ୍କ୍ରିୟ ହୋଇଯାଏ |

୨: ଉଚ୍ଚ ରାଇବୋଜାଇମ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ ସହିତ ଟିସୁ ପାଇଁ ଏକ ଉପଯୁକ୍ତ ନିଷ୍କାସନ ପଦ୍ଧତି ବାଛନ୍ତୁ ଏବଂ ଫେନୋଲ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ପଦ୍ଧତିକୁ ବ୍ୟବହାର କରିବା ପାଇଁ ଆଡିପୋଜ୍ ଟିସୁ ସର୍ବୋତ୍ତମ |

3: ଭବିଷ୍ୟବାଣୀ ଗୁଣ ଉତ୍ତର ଆବଶ୍ୟକ କରେ, cDNA ଲାଇବ୍ରେରୀ ନିର୍ମାଣ ଉଚ୍ଚ ଅଖଣ୍ଡତା ଆବଶ୍ୟକ କରେ, ଏବଂ RT-PCR ଏବଂ RPA (ରିବନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ ସୁରକ୍ଷା ଅନୁଧ୍ୟାନ) ଉଚ୍ଚ ଅଖଣ୍ଡତା ଆବଶ୍ୟକ କରେ ନାହିଁ |RT-PCR ଉଚ୍ଚ ଶୁଦ୍ଧତା (ଏନଜାଇମ୍ ଇନହିବିଟର ଅବଶିଷ୍ଟ) ଆବଶ୍ୟକ କରେ |

:: ଉତ୍ତମ ହୋମୋଜେନାଇଜେସନ୍ ହେଉଛି ଅମଳର ଉନ୍ନତି ଏବଂ ଅବନତି ହ୍ରାସ କରିବାର ଚାବି |

5: RNA ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଚିହ୍ନଟର ଅଖଣ୍ଡତା ଯାଞ୍ଚ କରନ୍ତୁ, 28S: 18S = 2: 1 ହେଉଛି ଏକ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଚିହ୍ନ, ଅଧିକାଂଶ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ 1: 1 ମଧ୍ୟ ଗ୍ରହଣୀୟ |

6: RT-PCR ପାଇଁ DNA ଅପସାରଣ, ଆରେ ବିଶ୍ଳେଷଣ DNA ଅପସାରଣ କରିବା ପାଇଁ Dnase I ବ୍ୟବହାର କରିବା ସର୍ବୋତ୍ତମ |

7: ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମର ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ହ୍ରାସ କରନ୍ତୁ - ଏନ୍ଜାଇମ୍ ବାହ୍ୟରୁ ଆମଦାନୀ ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ |

:: କମ୍-ଏକାଗ୍ରତା ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏକାଗ୍ର କରିବାବେଳେ, ଏକ ସହ-ବୃଷ୍ଟିପାତ ପୁନ ag ଯୋଗ କରାଯିବା ଉଚିତ |କିନ୍ତୁ ଏନଜାଇମ୍ ଏବଂ ଡିଏନ୍ଏ ପ୍ରଦୂଷଣ ଧାରଣ କରିଥିବା ସହ-ପ୍ରବୀଣକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ |

9: ଯଦି ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ, RNA କୁ ଭଲ ଭାବରେ ଦ୍ରବଣ କରନ୍ତୁ, 65C ରେ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଗରମ କରନ୍ତୁ |

ଉପଯୁକ୍ତ ସଂରକ୍ଷଣ ପଦ୍ଧତି |

ଏହା ଅଳ୍ପ ସମୟ ପାଇଁ –20C ଏବଂ ଦୀର୍ଘ ସମୟ ପାଇଁ –80C ରେ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇପାରିବ |RNA ଅମଳର ଉନ୍ନତିର ପ୍ରଥମ ପଦକ୍ଷେପ ହେଉଛି ହୃଦୟଙ୍ଗମ କରିବା ଯେ ବିଭିନ୍ନ ନମୁନାର RNA ବିଷୟବସ୍ତୁ ବହୁତ ଭିନ୍ନ ଅଟେ |ଉଚ୍ଚ ପ୍ରଚୁରତା (2-4ug / mg) ଯେପରିକି ଯକୃତ, ଅଗ୍ନାଶୟ, ହୃଦୟ, ମଧ୍ୟମ ପ୍ରଚୁରତା (0.05-2ug / mg) ଯେପରିକି ମସ୍ତିଷ୍କ, ଭ୍ରୁଣ, କିଡନୀ, ଫୁସଫୁସ, ଥାଇମସ୍, ଓଭାରି, କମ୍ ପ୍ରଚୁରତା (<0.05ug / mg) mg) ଯେପରିକି ବ୍ଲାଡର, ହାଡ, ଚର୍ବି |

1: ଆରଏନ୍ ମୁକ୍ତ କରିବାକୁ ଲାଇସ୍ କୋଷଗୁଡିକ - ଯଦି RNA ମୁକ୍ତ ନହୁଏ, ଅମଳ କମିଯିବ |ଇଲେକ୍ଟ୍ରିକ୍ ହୋମୋଜେନାଇଜେସନ୍ ଅନ୍ୟ ହୋମୋଜେନାଇଜେସନ୍ ପଦ୍ଧତି ଅପେକ୍ଷା ଭଲ କାମ କରେ, କିନ୍ତୁ ଅନ୍ୟ ପଦ୍ଧତି ସହିତ ମିଶ୍ରିତ ହେବା ଆବଶ୍ୟକ ହୋଇପାରେ, ଯେପରିକି ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ମାସିଂ, ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହଜମ (ଲାଇସୋଜାଇମ୍ / ଲାଇଟିକେଜ୍) |

୨: ନିଷ୍କାସନ ପଦ୍ଧତିର ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ୍ |ଫେନୋଲ-ଆଧାରିତ ପଦ୍ଧତିଗୁଡିକ ସହିତ ସବୁଠାରୁ ବଡ ସମସ୍ୟା ହେଉଛି ଅସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ସ୍ତରକରଣ ଏବଂ ଆଂଶିକ RNA କ୍ଷତି (ଅଲ ern କିକ ଶକ୍ତି ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ଅପସାରଣ କରାଯାଇପାରିବ ନାହିଁ) |ଅସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ସ୍ତରକରଣ ଉଚ୍ଚ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ ହେତୁ ହୋଇଥାଏ, ଯାହା ବ୍ୟବହୃତ ଲାଇସେଟ୍ ପରିମାଣ ବୃଦ୍ଧି କିମ୍ବା ନମୁନା ପରିମାଣକୁ ହ୍ରାସ କରି ସମାଧାନ ହୋଇପାରିବ |ଆଡିପୋଜ୍ ଟିସୁରେ କ୍ଲୋରୋଫର୍ମ ନିଷ୍କାସନର ଏକ ପଦକ୍ଷେପ ଯୋଗ କରାଯାଇଥିଲା |ବ୍ୟାକ୍-ପମ୍ପିଂ କିମ୍ବା ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ଦ୍ the ାରା ଜ organic ବ ସ୍ତରକୁ ବାହାର କରି RNA କ୍ଷତି ହ୍ରାସ କରାଯାଇପାରେ |ସ୍ତମ୍ଭ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍-ଆଧାରିତ ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକ ସହିତ ସବୁଠାରୁ ବଡ ସମସ୍ୟା ହେଉଛି ଅତ୍ୟଧିକ ନମୁନା |

କ୍ଲାସିକ୍ ଏକ୍ସଟ୍ରାକସନ୍ ଟିପ୍ସ |

1. ଫେନୋଲ୍ ଶୁଦ୍ଧତା: ସମାନ ପରିମାଣର 1: 1 ଫେନୋଲ୍ / କ୍ଲୋରୋଫର୍ମ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ 1-2 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଜୋରରେ ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ |2 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଉଚ୍ଚ ବେଗରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ |ଅଲ ern କିକ (80-90%) ଯତ୍ନର ସହିତ ଅପସାରଣ କରନ୍ତୁ |କଦାପି ମଧ୍ୟମ ସ୍ତରକୁ ଯାଆନ୍ତୁ ନାହିଁ |ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମାଧାନର ସମାନ ପରିମାଣ ଫେନୋଲ / କ୍ଲୋରୋଫର୍ମରେ ଯୋଗ କରାଯାଇପାରେ ଏବଂ ଅଲ ern କିକ ପଦାର୍ଥ ଅପସାରିତ ହୁଏ |ଅମଳର ଉନ୍ନତି ପାଇଁ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ବୃଷ୍ଟିପାତ ପାଇଁ ଦୁଇଟି ଅଲ ern କିକ ପଦାର୍ଥକୁ ମିଶ୍ରିତ କରାଯାଇପାରେ |ମିଶ୍ରଣ କରିବା ସମୟରେ ଅତ୍ୟଧିକ ଭଦ୍ର ହୁଅନ୍ତୁ ନାହିଁ, ଏବଂ ସମସ୍ତ ଅଲ ern କିକ ଶକ୍ତି ଅପସାରଣ କରିବାକୁ ଚେଷ୍ଟା କରନ୍ତୁ ନାହିଁ |

2. 70-80% ଇଥାନଲ ସହିତ ଧୋଇବା: ଧୋଇବା ସମୟରେ, ଅବଶିଷ୍ଟ ଲୁଣ ଧୋଇଯିବା ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ନିଲମ୍ବିତ ହେବା ଆବଶ୍ୟକ |ସେହି ସମୟରେ, ଇଥାନଲ ing ାଳିବା ପରେ ତୁରନ୍ତ, କିଛି ସେକେଣ୍ଡ ପାଇଁ ଉଚ୍ଚ ବେଗରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍, ଏବଂ ପରେ ପାଇପେଟ୍ ସହିତ ଅବଶିଷ୍ଟ ଇଥାନଲ୍ କା remove ଼ିଦିଅ |ରୁମ ତାପମାତ୍ରାରେ 5-10 ମିନିଟ୍ ଛିଡା ହେବା ପରେ ବିସର୍ଜନ କରନ୍ତୁ |

11. ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର ସଂସ୍ଥାଗୁଡ଼ିକର ଉତ୍ତୋଳନ |

1. ଫାଇବ୍ରସ୍ ଟିସୁ: ହୃଦୟ / କଙ୍କାଳ ମାଂସପେଶୀ ପରି ଫାଇବ୍ରସ୍ ଟିସୁରୁ RNA ବାହାର କରିବାର ଚାବି ହେଉଛି ଟିସୁକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ରୂପେ ବ୍ୟାହତ କରିବା |ଏହି ଟିସୁଗୁଡ଼ିକରେ କୋଷର ଘନତା କମ୍, ତେଣୁ ଟିସୁର ୟୁନିଟ୍ ଓଜନ ପ୍ରତି RNA ର ପରିମାଣ କମ୍ ଅଟେ, ଏବଂ ଯଥାସମ୍ଭବ ପ୍ରାରମ୍ଭ ପରିମାଣ ବ୍ୟବହାର କରିବା ଭଲ |ଫ୍ରିଜ୍ ଅବସ୍ଥାରେ ଟିସୁକୁ ଭଲ ଭାବରେ ଗ୍ରାଇଣ୍ଡ୍ କରିବାକୁ ନିଶ୍ଚିତ ହୁଅନ୍ତୁ |

2. ଉଚ୍ଚ ପ୍ରୋଟିନ୍ / ଚର୍ବିଯୁକ୍ତ ଟିସୁ: ମସ୍ତିଷ୍କ / ପନିପରିବା ଚର୍ବି ଅଧିକ |PCI ନିଷ୍କାସନ ପରେ, ଅଲ ern କିକ ପଦାର୍ଥରେ ଧଳା ଫ୍ଲୋକ୍ୟୁଲ୍ ଥାଏ |ଅଲ ern କିକ ପଦାର୍ଥକୁ କ୍ଲୋରୋଫର୍ମ ସହିତ ପୁନ - ବାହାର କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |

3. ଉଚ୍ଚ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ / ରାଇବୋଜାଇମ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ ସହିତ ଟିସୁ: କଫ / ଥାଇମସରେ ଉଚ୍ଚ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏବଂ ରାଇବୋଜାଇମ୍ ଥାଏ |ଫ୍ରିଜ୍ ଅବସ୍ଥାରେ ଗ୍ରାଇଣ୍ଡ୍ ଟିସୁ ଦ୍ରୁତ ହୋମୋଜେନାଇଜେସନ୍ ଦ୍ rib ାରା ରିବୋଜାଇମ୍କୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ନିଷ୍କ୍ରିୟ କରିପାରେ |ଯଦିଓ, ଯଦି ଲାଇସେଟ୍ ଅତ୍ୟଧିକ ସାନ୍ଦ୍ର ଅଟେ (ଉଚ୍ଚ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ ହେତୁ), PCI ନିଷ୍କାସନ ଫଳପ୍ରଦ ଭାବରେ ସ୍ତରିତ ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ;ଅଧିକ ଲାଇସେଟ୍ ଯୋଡିବା ଏହି ସମସ୍ୟାର ସମାଧାନ କରିପାରିବ |ଏକାଧିକ PCI ନିଷ୍କାସନ ଅଧିକ ଅବଶିଷ୍ଟ DNA ଅପସାରଣ କରିପାରିବ |ଯଦି ମଦ୍ୟପାନ କରିବା ପରେ ତୁରନ୍ତ ଏକ ଧଳା ରଙ୍ଗ ସୃଷ୍ଟି ହୁଏ, ଏହା DNA ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ସୂଚିତ କରେ |ବିଲୋପ ପରେ ଅମ୍ଳୀୟ PCI ସହିତ ପୁନ - ନିଷ୍କାସନ DNA ପ୍ରଦୂଷଣକୁ ଦୂର କରିପାରିବ |

4. ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁ: ପଶୁ ଟିସୁ ଅପେକ୍ଷା ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁ ଅଧିକ ଜଟିଳ |ସାଧାରଣତ ,, ଉଦ୍ଭିଦଗୁଡିକ ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ଅବସ୍ଥାରେ ଭୂମି, ତେଣୁ ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମ୍ ଦ୍ R ାରା RNA ଅବକ୍ଷୟ ଏକ ଅଭାବନୀୟ ଘଟଣା |ଯଦି ଅବନତି ସମସ୍ୟାର ସମାଧାନ ନହୁଏ, ତେବେ ଏହା ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ ନମୁନାରେ ଥିବା ଅପରିଷ୍କାର କାରଣରୁ ହୋଇଥାଏ |ଅନେକ ଉଦ୍ଭିଦଗୁଡିକରେ ଥିବା ଅଶୁଦ୍ଧତା ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶକୁ ନେଇଯିବ, ଏବଂ ଅବଶିଷ୍ଟ କାରଣଗୁଡ଼ିକର କାରଣ ହେଉଛି କାରଣ ଏହି ଅପରିଷ୍କାରତା RNA ସହିତ କିଛି ସମାନତା ଥାଏ: ତୁମେ ବୃଷ୍ଟିପାତ କର ଏବଂ ମୁଁ ବୃଷ୍ଟିପାତ କରେ, ଏବଂ ତୁମେ ଆଡ୍ସର୍ବ ଏବଂ ମୁଁ ଆଡ୍ସର୍ବ |ଏହି ବ characteristics ଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡିକ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରେ ଯେ ସେମାନେ ବହୁତ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ଏନଜାଇମ୍ ଇନହିବିଟର |

ବର୍ତ୍ତମାନ, ବାଣିଜ୍ୟିକ RNA ନିଷ୍କାସନ ରେଜେଣ୍ଟଗୁଡିକ ପ୍ରାୟ ସମସ୍ତ ପଶୁ ଟିସୁ ସହିତ ଛୋଟ ଆଡଜଷ୍ଟେସନ୍ ସହିତ ଆଡାପ୍ଟ୍ଟ୍ ହୋଇପାରିବ, କିନ୍ତୁ ସେଠାରେ କିଛି ବ୍ୟବସାୟିକ RNA ନିଷ୍କାସନ ରେଜେଣ୍ଟସ୍ ଅଛି ଯାହା ଅଧିକାଂଶ ଉଦ୍ଭିଦ ଟିସୁ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ ହୋଇପାରେ |ସ Fort ଭାଗ୍ୟବଶତ।, ଫୋରେଗେନ ବିଶେଷ ପ୍ରଦାନ କରିପାରନ୍ତି |ଉଦ୍ଭିଦ RNA ନିଷ୍କାସନ କିଟ୍ |, ଆମର ଅଛିଉଦ୍ଭିଦ ସମୁଦାୟ RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନ କିଟ୍ |, ଉଦ୍ଭିଦ ସମୁଦାୟ RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନ କିଟ୍ ପ୍ଲସ୍ |।ପରବର୍ତ୍ତୀଟି ଉଚ୍ଚ ପଲିସାକାରାଇଡ୍ ଏବଂ ପଲିଫେନୋଲ୍ ଥିବା ଉଦ୍ଭିଦମାନଙ୍କ ପାଇଁ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର ଭାବରେ ଡିଜାଇନ୍ ହୋଇଛି |RNA ନିଷ୍କାସନ ପାଇଁ, ଲ୍ୟାବ ବ୍ୟବହାରକାରୀଙ୍କ ମତାମତ ବିଶେଷ ଭଲ |

12. ନମୁନା ଫ୍ରିଜ୍ ଏବଂ ଥୋଇଙ୍ଗର ପ୍ରଭାବ ଫ୍ରିଜ୍ ହୋଇଥିବା ନମୁନା ବଡ଼ ହୋଇପାରେ, ଏବଂ RNA ଉତ୍ତୋଳନ ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର ହେବା ପୂର୍ବରୁ ଏହାକୁ କାଟିବା ଆବଶ୍ୟକ |କାଟିବା ସମୟରେ ନମୁନାଗୁଡିକ ତରଳିଯାଏ (ସମ୍ଭବତ part ଆଂଶିକ) |ଫ୍ରୋଜେନ୍ ନମୁନାଗୁଡିକ RNA ଉତ୍ତୋଳନ ପୂର୍ବରୁ ଓଜନ କରିବାକୁ ପଡିପାରେ, ଏବଂ ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ ଥୋଇଙ୍ଗ୍ ଘଟିବ |ବେଳେବେଳେ, ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ମିଲ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସମୟରେ ନମୁନାର ଥୋଇଙ୍ଗ୍ ମଧ୍ୟ ହୁଏ |କିମ୍ବା ଫ୍ରିଜ୍ ହୋଇଥିବା ନମୁନାକୁ ତରଳ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ମିଲ୍ ବିନା ଲାଇସେଟ୍ ସହିତ ସିଧାସଳଖ ଯୋଡା ଯାଇଥାଏ, ଏବଂ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ହୋମୋଜେନାଇଜେସନ୍ ପୂର୍ବରୁ ଥୋଇଙ୍ଗ୍ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ ଘଟିବ |ପରୀକ୍ଷଣରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଫ୍ରିଜ୍ ଟିସୁ ତାଜା ଟିସୁ ଅପେକ୍ଷା ଥୋଇବା ସମୟରେ RNA ଅବକ୍ଷୟ ହେବାର ସମ୍ଭାବନା ଅଧିକ |ସମ୍ଭାବ୍ୟ କାରଣ: ଫ୍ରିଜ୍-ଥ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟା କୋଷ ଭିତରେ ଥିବା ସଂରଚନାକୁ ବାଧା ଦେଇଥାଏ, ଯାହା ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ଏନଜାଇମ୍ ସହିତ RNA ସହିତ ସିଧାସଳଖ ଯୋଗାଯୋଗକୁ ସହଜ କରିଥାଏ |

13. RNA ଗୁଣର ବିଚାର ସାଧାରଣତ ,, RNA ର ଅଖଣ୍ଡତାକୁ ବିଚାର କରିବା ପାଇଁ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଏବଂ RNA ର ଶୁଦ୍ଧତାକୁ ବିଚାର କରିବା ପାଇଁ A260 / A280 ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ସିଦ୍ଧାନ୍ତରେ, ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ RNA ର 28S: 18S = 2.7: 1 ଅନୁପାତ ଅଛି, ଏବଂ ଅଧିକାଂଶ ତଥ୍ୟ 28S: 18S = 2: 1 ଅନୁପାତକୁ ଗୁରୁତ୍ୱ ଦେଇଥାଏ |ପ୍ରକୃତ କଥା ହେଉଛି କୋଷ ବ୍ୟତୀତ ଅନ୍ୟ ନମୁନାରୁ ବାହାର କରାଯାଇଥିବା RNA ମଧ୍ୟରୁ କ none ଣସିଟି 2: 1 ଅନୁପାତରେ ନାହିଁ (ଏହା ଆଜିଲିଣ୍ଟ ବାୟୋନାଲିଜର ବ୍ୟବହାର କରି ମିଳିଥିଲା) |

RNA ର ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଫଳାଫଳ ଦ୍ factors ିତୀୟ ଗଠନ, ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଅବସ୍ଥା, ନମୁନା ଲୋଡ୍, EB ଦ୍ sat ାରା ପରିପୂର୍ଣ୍ଣତା ଇତ୍ୟାଦି ସହିତ ଅନେକ କାରଣ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଭାବିତ ହୋଇଥାଏ | RNA ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ଏବଂ DNA ମାର୍କରକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରିବା ପାଇଁ ଦେଶୀ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |ଯଦି 2Sb ରେ 28S ଏବଂ 0.9kb ରେ 18S ସ୍ପଷ୍ଟ, ଏବଂ 28S: 18S> 1, ଅଖଣ୍ଡତା ପରବର୍ତ୍ତୀ ପରୀକ୍ଷଣଗୁଡିକର ଆବଶ୍ୟକତା ପୂରଣ କରିପାରିବ |

A260 / A280 ହେଉଛି ଏକ ସୂଚକ ଯାହା ଅନେକ ଦ୍ୱନ୍ଦ୍ୱ ସୃଷ୍ଟି କରିଛି |ସର୍ବପ୍ରଥମେ, ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ପାଇଁ ଏହି ସୂଚକର ମୂଳ ଅର୍ଥ ସ୍ପଷ୍ଟ କରିବା ଆବଶ୍ୟକ: ଶୁଦ୍ଧ RNA, ଏହାର A260 / 280 = ପ୍ରାୟ 2.0 |ଶୁଦ୍ଧ RNA ହେଉଛି 'କାରଣ' ଏବଂ A260 / A280 = 2 ହେଉଛି 'ପ୍ରଭାବ' |ବର୍ତ୍ତମାନ ସମସ୍ତେ A260 / A280 କୁ 'କାରଣ' ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରୁଛନ୍ତି, ଭାବୁଛନ୍ତି ଯେ “ଯଦି A260 / A280 = 2, ତେବେ RNA ଶୁଦ୍ଧ”, ଯାହା ସ୍ natural ାଭାବିକ ଭାବରେ ଦ୍ୱନ୍ଦ୍ୱ ସୃଷ୍ଟି କରିଥାଏ |

ଯଦି ତୁମେ ଆଗ୍ରହୀ, ତୁମେ ଟିକିଏ ରିଜେଣ୍ଟ୍ ଯୋଗ କରିପାରିବ ଯାହା ପ୍ରାୟତ extr ନିର୍ବାହରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଯେପରିକି ଫେନୋଲ୍, ଗୁଆନାଡାଇନ୍ ଆଇସୋଥାଇଓସିୟାନେଟ୍, PEG ଇତ୍ୟାଦି, ତୁମର RNA ନମୁନାରେ, ଏବଂ ତାପରେ A260 / A280 ଅନୁପାତ ମାପ |ବାସ୍ତବତା ହେଉଛି RNA ଉତ୍ତୋଳନ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ଅନେକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା, ଏବଂ ନମୁନାରେ ଥିବା ଅନେକ ଅପରିଷ୍କାରତା, A260 / A280 କୁ ପ୍ରଭାବିତ କରି A260 ଏବଂ A280 କୁ ଅବଶୋଷଣ କରିଥାଏ |

ବର୍ତ୍ତମାନର ସବୁଠାରୁ ଶିକ୍ଷଣୀୟ ଉପାୟ ହେଉଛି 200-300 nm ପରିସର ମଧ୍ୟରେ RNA ନମୁନା ସ୍କାନ୍ କରିବା |ଶୁଦ୍ଧ RNA ର ବକ୍ରରେ ନିମ୍ନଲିଖିତ ବ characteristics ଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡିକ ଅଛି: ବକ୍ରଟି ସୁଗମ, A230 ଏବଂ A260 ଦୁଇଟି ଇନଫ୍ଲେକ୍ସନ୍ ପଏଣ୍ଟ, A300 ପାଖାପାଖି 0, A260 / A280 = ପାଖାପାଖି 2.0, ଏବଂ A260 / A230 = ପାଖାପାଖି 2.0 |ଯଦି ସ୍କାନ୍ ତଥ୍ୟ ଉପଲବ୍ଧ ନହୁଏ, A260 / A230 ଅନୁପାତ ମଧ୍ୟ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ, କାରଣ ଏହି ଅନୁପାତ ସମସ୍ତ ଅପରିଷ୍କାର ପଦାର୍ଥ ଉପରେ ଅଧିକ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ଅଟେ ଯାହା ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିଥାଏ |ଡିଭାଇସର ର line ଖ୍ୟ ପରିସରକୁ ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ (A260 ପାଇଁ 0.1–0.5) |

ଅନ୍ୟ ଦୁଇଟି ଉପଯୋଗୀ ଘଟଣା ଅଛି: ଯେତେବେଳେ A260 / A280 ପାଣିରେ ମାପ କରାଯାଏ ସେତେବେଳେ ଅନୁପାତ ପ୍ରାୟ 0.3 କମ୍ ହେବ;10 ମିଟର EDTA ରେ ମାପ ହୋଇଥିବା ଅନୁପାତ 1 ମିଟର EDTA ରେ ମାପାଯାଇଥିବା ତୁଳନାରେ ପ୍ରାୟ 0.2 ଅଧିକ |

ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ:

ଚାଇନା ପ୍ଲାଣ୍ଟ ମୋଟ RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନ କିଟ୍ ଉତ୍ପାଦକ ଏବଂ ଯୋଗାଣକାରୀ | |Foregene (foreivd.com)

RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନତା ଶୃଙ୍ଖଳା ଯୋଗାଣକାରୀ ଏବଂ କାରଖାନା |ଚାଇନା RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନତା ସିରିଜ୍ ନିର୍ମାତା (foreivd.com)

RNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନତା କ୍ରମ - ଫୋରେଗେନ କୋ, ଲିମିଟେଡ୍ (foreivd.com)